c*****e
发帖数: 619 | 1 I want to break oat genomic DNA into fragment of 10KB, what should be the
setting? So that I can get the fragment of the size I want?
Thank you! |
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l***h
发帖数: 9308 | 2 QoS的话，买个可以刷番茄的路由器。我试过刷成dd-wrt，但QoS效果不好，因为界面设
置不能控制最大带宽。
通过番茄的QoS，保证能流畅观看pplive，基本上，通过把上行带宽控制在30Kbit/s(
4KB/s),下行带宽最大就能在1Mbit/s(130KB/。我试过把QoS关掉，下行带宽基本占满
3Mbit/s，上行也占满为500Kbit/s(60KB/s)。
但是，看CNTV，尽管对下行带宽要求不高（1M足以），但对上行带宽要求比较高，至少
要到80Kbit/s(10KB/s)。
因此，对于outbound设置在80Kbit/s(10KB/s)，对于p2p的应用，下载带宽基本上就控
制在1.5Mbit/s(190KB/s）以下。我是upto 3M的DSL，基本感受不到这些p2p对网络的影
响。 |
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y***j
发帖数: 11235 | 3 大家从百度下东西是不是经常抽风，很多时候<10kb/s，然后抽一下某一个文件抽到几
百K，下完了，其他的继续10kb/s？有办法让他持续抽风么 |
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C*****h
发帖数: 926 | 4 lentivirus的包装极限是~10kb，另外，virus产量与size成反比，
一般来说，size增加1kb，virus产量减少十倍。
你的蛋白太大，编码序列本身就有>6kb，再加上virus自己的序列，可能超过10kb了。 |
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o**4
发帖数: 35028 | 5 不好意思对病毒确实不太了解，
10kb是我的整个质粒大小，RNA应该比10kb小，包装应该没问题么？ |
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j****x
发帖数: 1704 | 6 Lentivector的包装极限在10kb左右，事实上超过6kb以上就得拼人品了。包装效率和包
装大小成几何反比，大小增加一个kb，效率就可能下降一个数量级。10kb的插入片断，
劝你不要考虑了，太碟中谍了。。。 |
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c********u
发帖数: 250 | 7 transgenic mouse southern blot, 做了几个星期了还没出来,首要的问题如图，坑爹
的genomic DNA 用HindIII切了24个小时，60v 跑了6个小时，就给我跑成这副鬼样子，
大家提DNA， 溶DNA，切，跑胶有什么trick没？ 还有一个问题是，我的目标条带有
10kb，DIG probe, 我老板说10kb太大了，2-5kb最好，那我这种情况有可能成不？
真心求教，酌情发包子，谢谢。 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 8 我是snowyday说的老式酶切连接的老疙瘩了。你这个3KB应该是小菜一碟。上面有人提
到的Q5不错。那个GC-melt对付genomic DNA很好，唯一提醒的是primer（match的部分
）长一点，我一般25-28nt. 在加GC-melt的情况下，annealing的温度适当比用普通Taq
低点，3-5度。
genomc DNA可以用Qiagen的blood and tissue kit提取.一般12-well plate，一个well
就够用20-50次PCR了。
我一般把要PCR的fragment在网上扫描一下酶切位点，重点在don't cut和single cut
list。3kb应该很容易找到合适的位点。然后看自己的vector找合适的酶，加到pcr
primer的5’end。一般情况下，我会在酶点外再加4 nt,很多酶是不能切直接裸露在5’
外的位点的。所以，你的primer该是：4nt-酶点-25ntmatching seq. 3kb,很多情况下
可以用两个不同的酶来克隆。Sal I是老鼠和人genome里少见的酶位点，我几乎每次都
能用上。其他的看运气，识别8 ... 阅读全帖 |
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r**********e
发帖数: 587 | 9 What's the average length of contig in Pacbio?
I remember like 10KB?
Maybe I'm too out-dated
If it's only 10KB....well think about human chromosome1, 100000kB level? |
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发帖数: 1 | 10 最近导师让我包装很多腺病毒， 其中有一个基因很大，8kb，另外再加上启动子和GFP
，整个加起来快10kb了，。。。我记得腺病毒的transgene packaging capacity 不超
过8 Kb。请问各位老师我这个快10kb的片段能用腺病毒包出来吗。。。。？最后结果是
我压根儿就得不到病毒还是说可以包装出病毒但是病毒的效率特别低？谢谢啦。 |
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h*****n
发帖数: 2023 | 11 你能举个例子什么东西（可以食用的）的副作用会在10代以后出现？
从实际观察上，没有发现转基因表达的蛋白有副作用。
从生物学理论上，没有任何分析软件预测出转基因在DNA,RNA还是蛋白水平比其他的食
物蛋白会更有毒性。大米基因组有394Mb, 玉米是2500MB, 转基因DNA最多10kb，算上多
拷贝，转基因只占万分之一或者十万分之一。从推算看，即使转基因序列表达miRNA,也
只占万分之一到十万分之一，没有理由表明这（十）万分之一比其他绝大多数更特别。
而且目前还没发现转基因序列表达miRNA. 生物体内的RNA在生物死亡也会很快降解。
在蛋白水平也一样，转基因表达的蛋白也只占总蛋白的万分之一或者更少（已经考虑多
拷贝因素）。如果人体内存在受体，即使万分之一也不能吃，就像毒蘑菇，河豚之类。
这种情况反应会很快。
所有反对转基因的证据全是“或许有”。甚至或许有的理论也不是很成熟的。
那篇植物miRNA进入人体并且作用于人体功能的论文，中国人做的实验，发在中国人办
的杂志（CNS都拒了），我仔细看了，漏洞很多。引用该文的也是一些不入流杂志。目
前还有其他组发表类似的结果。需要指出的是，该... 阅读全帖 |
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y****g
发帖数: 36950 | 12 一般很多改图软件存图时为了减小图像占用硬盘空间尺寸会把EXIF信息和缩略图都删掉
的。这样就不会有以前相机拍照留下的缩略图了。凡事针对网络上应用的图像处理APP
都会这么减小尺寸，10KB也是流量啊
：我记得美图秀秀缩略图不是原图
：【 在 yugong (愚公挖坑) 的大作中提到: 】 |
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发帖数: 1 | 13 英特尔公司CEO Brian Krzanich认为未来大数据将会对世界产生重大的影响，有可能会
给世界带来巨大的变革。Krzanich很喜欢谈论自己对未来的展望。他预计，未来大数据
将会改变每一个行业，以及每一个人的生活。
Krzanich表示：“上世纪90年代的时候，石油改变了世界。它为汽车提供了动力，为整
个化学产业提供了原料。而在我看来，数据将会在未来起到石油曾经起到的作用。它将
会改变这个世界上大多数的行业。”
5年前，Krzanich成为了英特尔公司的CEO，自此以后，他就一直努力带领这家公司朝着
新的方向前进，他将这个方向称为“数据中心战略”。这意味着英特尔开始将它们的业
务范围变得更加多元化，它们这几年相继进入了人工智能、无人驾驶和物联网等行业。
而这些行业有一个共同点，那就是它们都需要以大量的数据作为依托，英特尔要用自己
生产的各种原件来利用这些数据。英特尔的这个新战略对于它们来说还有另外一个影响
，那就是对于自己赖以成名的看家本领——个人电脑处理器——它们的专注度有所降低。
好在它们的这个战略为它们带来了不错的效果。去年，尽管PC的出货量进一步降低，但
是英特尔的营收... 阅读全帖 |
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G***n
发帖数: 877 | 14 sorry, sorry，I think the input is any string with the size at 10KB. |
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l****i
发帖数: 230 | 15 多谢大家的bless，刚刚recruiter通知，Amazon决定给我offer了。看来攒人品太重要
了。
Amazon一般PhD毕业research scientist或SDE给多少钱啊？有知道的透露一下
现在手头还有6、7个onsite，决定拖一阵子再答复，有什么技巧吗？ 谢谢大家了，等
决定了offer散尽家财发包子。
另外，昨天面了MS，貌似也准备给offer了，等一下上面经。
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fresh PhD;面试research scientist position
1.Job talk一小时，audience七八个人，主要是interviewer
2.老印SDE，问了一些research的问题，然后coding，判断二叉树是不是BST，因为题目
都很简单答得比较顺利，老印SDE表示非常满意
3.老印director，lunch interview，瞎聊，问我“如果amazon要想在竞争者中脱颖而
出做得更好怎么办”我答“要hire top talents”，... 阅读全帖 |
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s*********5
发帖数: 514 | 16 这个是不是要先用SHA-2（better and stronger than MD5)把所有document搞出一个
unique hash value, 然后搞个hash table, 通过ID找SHA-2. 再做个reverse lookup
table, 每个SHA-2都列出其相应的ID list
6.两个白人SDE，主要是其中一个在面，另外一个自始至终没说话。
问题: 有一个大的catalog，总共有500Million个entry，每个entry内容是 （ID，
document），每个document大小约10KB，不同的ID对应的document可能相同，怎样设计
一个程序，对每个给定的一个ID，找出与该ID对应着相同的document的所有其他ID。
Follow Up: 如果每台机器内存只有1GB，硬盘100GB，怎么做 |
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s****y
发帖数: 3437 | 17 现在每个月 70 不算税费
换verizon 110
坐火车上班没网络太痛苦了。sprint 3g--10kbs, no 4g signal.. |
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s****e
发帖数: 1984 | 18 恢复crossfit了？你们box只做WOD吗？我这个box每天都先来个strength,每节课都凑足
一小时。
09/19/1250-40-30-20-10KB swings (20lb)AB mat situpsSlam balls(15lb)Finish:
29:56 min
★ Sent from iPhone App: iReader Mitbbs Lite 7.56 |
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b******k
发帖数: 1874 | 19 你叫may等版主做个合集,然后用cterm等下载全文,很小的txt文档,不会大于10kb. 没有
合集的话,一篇一篇比较麻烦一点.
可能还有别的办法?w |
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u******a
发帖数: 7843 | 20 qq中转站, 在美国上传很快, 下载慢的惊人(小于10kb/s), 没有mac客户端...国内上传
下载都很快.
adrive, 没怎么试, 界面是英文的, 家人不乐意用.
dbank, 和qq中转站一样, 美国上传快, 下载慢的惊人. 国内速度都很快.
amazon s3没试, 不过他那个clouddrive还不错, 不过界面是英文, pass
yousendit 100M的limit太小了点.
最后竟然用的是windows mesh live. 有mac客户端, 和dropbox很像, 设置好之后没有
ui, 同步文件夹就好了. 速度在中国美国都尚可. 5g免费空间, 没有单个文件大小限制
.
上次谁说mobileMe下个月免费来着? |
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l********k
发帖数: 14844 | 21 windows自己大约在20kB/s左右。开chrome的时候，在resource monitor里看到有七八
个写chrome缓存目录的线程，每个写入速度大约都在10kB/s以上。 |
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l********k
发帖数: 14844 | 22 用客户端同步，我估计我的上载速度能有10kB/s就不错了... 照这个速度，除了少量文
本文件之外基本没法忍啊。只同步少量文本，dropbox哪怕阉割到500M也够用啊。
搭过owncloud的来说说，以你们的经验，上下载速度能达到多少呢？ |
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B********t
发帖数: 65 | 23 试过T610拨学校的dialup，倒不断线，就是慢，10kb/s |
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N****w
发帖数: 21578 | 25 靠，安装下载速度只有 10kB/s。。。 :(
欧洲真惨。。。 |
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h*******x
发帖数: 12808 | 26 ubuntu的server今天支持不住了，一帮人去下载。。
我这边只有10KB/s，平时都是500-1000KB/s的。最后只好用bt来搞了，很快。 |
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d******a
发帖数: 32122 | 27 emule里边上传设成10KB/s，就可以理论上无限下载了
讯雷不能做到？ |
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m*z
发帖数: 3102 | 28 check file size if 10kb -100kb. 那file 不对~~ |
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n********k
发帖数: 2818 | 29 Finally u came:)))...I also have a question in this case, so will the
efficiency of desired targeting much lower, or
not really with your experience... Another question is what if the middle
fragment is like 10kb or even more....I
was thinking it would take two recombination events to get them in...then
the efficiency would be really low...
recombination
may
maximize
floxed |
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H****N
发帖数: 997 | 30 Hey how is it going? To your first question, the efficiency will be lower,
but not that much lower. Say if you have 3 kb on the side and 2kb in the
middle, you may have half the efficiency of what you would without the
insertion. As to the second question, if you have a 10kb fragment in the
middle, the chance of getting the desired recombination may be very low. It'
s just my gut feeling and I don't have any actual experience with a long
middle arm. If I were you, I would give it a try, if the |
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h*******0
发帖数: 14 | 31 Qiagen的柱子主要是回收10kb以下的。加1倍体积的isopropanol并不能帮助回收这样大
的质粒（试过）。你试过这么大的质粒么？谢谢。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 32 乘着这会儿人气高，求教一个PCR中遇到的问题哈，说实在的这是第一次遇到这么诡异的PCR问题，
这么多年下来大大小小各式各样的PCR都做过，扩增大于10kb都没有遇到过不知道如何trouble
shooting的时候。
最近从某个E.coli plasmid里PCR一个非E.coli的origin X(这个plasmid既有Ecoli的
origin又有另外某个细菌X的origin X，既可以在E.coli里维持也可以在细菌X里维持)。这个
origin X有3.6kb长，照理说用plasmid做模板，3.6kb也不算多长，应该不会太麻烦；可是做下
来跑胶就是干干净净，没有条带，没有primer dimer，没有非特异产物，什么都没有（当然如果模
板plasmid加多一点，能看到模板）；annealing温度梯度，还有别的optimize都做了，还是一
样；还有过用linear plasmid做模板，还是一样。
另外还设计了这个3.6kb区域的5个sequencing primer，因为一直P不出来，就有点怀疑这个
E.coli plasmid，因为是别的实验室给我们的，送去测序以后没有 |
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c*****e
发帖数: 619 | 33 有文献说是shake,不知道怎么操作。还有说是autoclave,
想问问有人做过吗？ 哪个克操作性最强。
谢谢 |
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c*****e
发帖数: 619 | 39 我是做fish,这个断的DNA用来做blocking DNA的
谢谢 |
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f*******e
发帖数: 628 | 40 觉着拿细口的 pippet tip 上下 pippet 一定次数，就可以了。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 42 当然可以酶切，但是需要找个6-7个base pair的cutter |
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z*****k
发帖数: 86 | 43 HydroShear DNA Shearing Device |
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i*********0
发帖数: 915 | 44 我怎么记得做fish一般用500-1000bps做block呀。 |
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c*****e
发帖数: 619 | 45 我做GISH, 跟fish有点不一样。 发现还是autoclave最好 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 46 5 kb不长
随便扩扩基本上都能出来啦
当然模板特别难扩那是例外
Takara的LA-Taq是好，不过拿来扩5kb的实在有点大材小用
我用它扩>10kb的 |
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s********n
发帖数: 2939 | 47 几天听了一个3rd generation的sequencing技术，非常牛，号称能够直接单分子测序，
而且每个read很长（10kb），而且效率非常高，只要一天就可以完成人基因组的测序（
对比：454和illumina要7天），公司好像叫Pacific Bioscience。 |
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