t*******o
发帖数: 516 | 1 最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
伤ssDNA分子。
试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
概是60%。我得用50个柱子才行。
在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
多谢了。 |
B*****6
发帖数: 21 | 2 乙醇沉淀？
【在 t*******o 的大作中提到】
: 最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
: 有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
: 掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
: 伤ssDNA分子。
: 试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
: 概是60%。我得用50个柱子才行。
: 在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
: 只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
: 暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
: 多谢了。
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M******g
发帖数: 152 | |
r********d
发帖数: 58 | 4 用Amicon,买分子量cut off 3000那种，一管子15ml,一次离心就可以同时装6管还是8管
【在 t*******o 的大作中提到】
: 最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
: 有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
: 掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
: 伤ssDNA分子。
: 试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
: 概是60%。我得用50个柱子才行。
: 在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
: 只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
: 暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
: 多谢了。
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f****e
发帖数: 679 | |
t*******o
发帖数: 516 | 6 多谢楼上几位。
乙醇沉淀考虑过， 怕DTT和乙醇弄不干净，影响下一步的应用。
dialysis需要的时间比较长，可能需要overnight才能除干净。已经reduced的oligo可
能又被氧化了。不过可以考虑。
desalting受体积的影响，需要大量的柱子。或者请问有什么比较大的柱子能一次
desalting比较大的volume? 还是说需要自己pack柱子？
超滤的话有什么装置可以推荐的吗?
【在 f****e 的大作中提到】
: 超滤，G25柱脱盐，透析都可以
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g*****x
发帖数: 3283 | 7 amicon 15
100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的
【在 t*******o 的大作中提到】
: 多谢楼上几位。
: 乙醇沉淀考虑过， 怕DTT和乙醇弄不干净，影响下一步的应用。
: dialysis需要的时间比较长，可能需要overnight才能除干净。已经reduced的oligo可
: 能又被氧化了。不过可以考虑。
: desalting受体积的影响，需要大量的柱子。或者请问有什么比较大的柱子能一次
: desalting比较大的volume? 还是说需要自己pack柱子？
: 超滤的话有什么装置可以推荐的吗?
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A******y
发帖数: 2041 | 8 True, Amicon spin column is the best way if you don't want to do dialysis.
【在 g*****x 的大作中提到】
: amicon 15
: 100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的
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t*******o
发帖数: 516 | 9 Amicon还真不行。我能找到的最小的3KDa, 过滤5KDa的ssDNA，基本上都会漏掉。
【在 g*****x 的大作中提到】
: amicon 15
: 100 mL算个屁的大量啊，我点进来想回TFF的
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N****n
发帖数: 294 | 10 你是一次性的实验，还是要重复？cost不一样，方法会不同。
【在 t*******o 的大作中提到】
: 最近在研究如何大量buffer exchange ssDNA。
: 有一批ssDNA, 大概10mg/mL, 100mL的样子。分子量大概5kDa，里面有100mM DTT需要除
: 掉。请问有什么办法可以快速有效的buffer exchange除掉DTT，而不怎么稀释浓度和损
: 伤ssDNA分子。
: 试过ZeBa column, 一个最大的柱子一次最多也就能过大概2mL*10mg/mL=20mg。yield大
: 概是60%。我得用50个柱子才行。
: 在AKTAexplorer上试过GE Hitrap Q and Hitrap DEAE的阴离子交换柱. 1mL的柱子大概
: 只能结合15-20mg DNA.样品会被稀释到大概3-4mg/mL.
: 暂时想不到什么其他有效的办法。版上高人众多。有过类似经验的能否介绍一下经验？
: 多谢了。
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g*****x
发帖数: 3283 | 11 那自己买1 kDa的UF membrane去TFF吧
【在 t*******o 的大作中提到】
: Amicon还真不行。我能找到的最小的3KDa, 过滤5KDa的ssDNA，基本上都会漏掉。
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t*******o
发帖数: 516 | 12 就一次性的实验。所以如果是disposable的东西最好。
【在 N****n 的大作中提到】
: 你是一次性的实验，还是要重复？cost不一样，方法会不同。
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t*******o
发帖数: 516 | 13 UF还真没用过。请问如果我想买500Da cutoff, vol 50-200mL 的超滤膜，哪里能买到
， 有什么可以推荐的吗？
【在 g*****x 的大作中提到】
: 那自己买1 kDa的UF membrane去TFF吧
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g*****x
发帖数: 3283 | 14 Koch, 500 Da我不知道属于他们UF还是NF
也未必有现成的cartridge
【在 t*******o 的大作中提到】
: UF还真没用过。请问如果我想买500Da cutoff, vol 50-200mL 的超滤膜，哪里能买到
: ， 有什么可以推荐的吗？
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t*******o
发帖数: 516 | 15 anyway, Thanks a lot!
【在 g*****x 的大作中提到】
: Koch, 500 Da我不知道属于他们UF还是NF
: 也未必有现成的cartridge
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