gamma-tubulin staining的问题 - Biology版

本页内容为未名空间相应帖子的节选和存档，一周内的贴子最多显示50字，超过一周显示500字访问原贴

Biology版 - gamma-tubulin staining的问题

相关主题
● 问一个　ＩＦ　的问题	● DNA 在什么情况会从细胞核到细胞质
● 细胞核和细胞质RNA定量	● micronulei 到底是一个什么样的存在
● 细胞核/细胞质标志带白用哪个好？	● 请问有没有好的immunofluorescence on tissue cultures cells的protocol?
● [合集] Gamma-tubulin - centrosome : a question about "stick-like"	● 请教大牛：有什么好的centrosome marker啊
● 请教：脊髓免疫荧光应该用什么抗体看组织结构？	● 大家碰到过膜蛋白在胞质中染色的吗？
● 求分离细胞核和细胞质蛋白的方法	● EGFP免疫荧光固定？
● 在细胞核中的蛋白调节autophagy?	● 为啥做个phalloidin染actin都做不出来[求助]
● 忘了，懒得去查了。求明白人解答	● best gamma and alpha tubulin antibodies for IF?

相关话题的讨论汇总
话题: tubulin话题: gamma话题: staining话题: 信号话题: 固定

进入Biology版参与讨论

(共1页)

z********i
发帖数: 610

最近在细胞里面做了几次gamma tubulin staining，用了不同的固定方法，甲醇固定后
centriole 信号很强，细胞核中gamma-tubulin信号很弱，细胞质中的信号强一些。看
文献好像是这样。
但是换成PFA固定后centriole信号比较弱，还是能看到了。奇怪的是细胞核中的信号强
一些。到底哪一个染色的结果真实一些？
我还共染了另一个蛋白，带FLAG tag不同的固定方法，得到的结果也不一样。多谢！

f*****f
发帖数: 195

细胞本身蛋白就是高度动态的，不同固定，permeabilization方法对蛋白定位本身影响
，以及目标抗原暴露都会有区别，而且IF中，抗体不一定能识别细胞中所有的蛋白pool。
很多膜相关蛋白定位会受到methanol破坏，中心体蛋白结构很致密，methanol
fixation 往往信噪比好些，但不可一概而论。
具体蛋白定位的确定包括内源的抗体，不同tag固定，荧光tag live状态下都可以参考。

【在 z********i 的大作中提到】

: 最近在细胞里面做了几次gamma tubulin staining，用了不同的固定方法，甲醇固定后
: centriole 信号很强，细胞核中gamma-tubulin信号很弱，细胞质中的信号强一些。看
: 文献好像是这样。
: 但是换成PFA固定后centriole信号比较弱，还是能看到了。奇怪的是细胞核中的信号强
: 一些。到底哪一个染色的结果真实一些？
: 我还共染了另一个蛋白，带FLAG tag不同的固定方法，得到的结果也不一样。多谢！

(共1页)

进入Biology版参与讨论

相关主题
● best gamma and alpha tubulin antibodies for IF?	● 请教：脊髓免疫荧光应该用什么抗体看组织结构？
● Ki67 Antibody for mouse Tissue staining	● 求分离细胞核和细胞质蛋白的方法
● 请教3T3 cell做immunostaining的问题	● 在细胞核中的蛋白调节autophagy?
● Lysosome staining	● 忘了，懒得去查了。求明白人解答
● 问一个　ＩＦ　的问题	● DNA 在什么情况会从细胞核到细胞质
● 细胞核和细胞质RNA定量	● micronulei 到底是一个什么样的存在
● 细胞核/细胞质标志带白用哪个好？	● 请问有没有好的immunofluorescence on tissue cultures cells的protocol?
● [合集] Gamma-tubulin - centrosome : a question about "stick-like"	● 请教大牛：有什么好的centrosome marker啊

相关话题的讨论汇总
话题: tubulin话题: gamma话题: staining话题: 信号话题: 固定

#	版面	帖数(主题数)
-	全站	4871 (796)
1	Military	3777 (569)
2	Stock	341 (51)
3	Joke	117 (17)
4	History	116 (3)
5	Automobile	100 (9)
6	USANews	55 (9)
7	Midlife	45 (1)
8	Headline	41 (41)
9	Dreamer	33 (13)
10	FleaMarket	32 (20)
11	Living	30 (7)

boards

未名新帖统计// 7月16日

历史上的今天