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1
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z********i
发帖数: 610
1
最近在细胞里面做了几次gamma tubulin staining,用了不同的固定方法,甲醇固定后
centriole 信号很强,细胞核中gamma-tubulin信号很弱,细胞质中的信号强一些。看
文献好像是这样。
但是换成PFA固定后centriole信号比较弱,还是能看到了。奇怪的是细胞核中的信号强
一些。到底哪一个染色的结果真实一些?
我还共染了另一个蛋白,带FLAG tag不同的固定方法,得到的结果也不一样。多谢!
f*****f
发帖数: 195
2
细胞本身蛋白就是高度动态的,不同固定,permeabilization方法对蛋白定位本身影响
,以及目标抗原暴露都会有区别,而且IF中,抗体不一定能识别细胞中所有的蛋白pool。
很多膜相关蛋白定位会受到methanol破坏,中心体蛋白结构很致密,methanol
fixation 往往信噪比好些,但不可一概而论。
具体蛋白定位的确定包括内源的抗体,不同tag固定,荧光tag live状态下都可以参考。
【在 z********i 的大作中提到】
: 最近在细胞里面做了几次gamma tubulin staining,用了不同的固定方法,甲醇固定后
: centriole 信号很强,细胞核中gamma-tubulin信号很弱,细胞质中的信号强一些。看
: 文献好像是这样。
: 但是换成PFA固定后centriole信号比较弱,还是能看到了。奇怪的是细胞核中的信号强
: 一些。到底哪一个染色的结果真实一些?
: 我还共染了另一个蛋白,带FLAG tag不同的固定方法,得到的结果也不一样。多谢!
1
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