e*******c
发帖数: 1479 | 1 老板忽发奇想， 不用血浆/血清做ELISA, 要我为他做western， 做了一边，直接将血
浆变性上样， 跑SDS-PAGE. western在50多的位置太多的蛋白模糊不清， 有无作过的
同学给给经验
谢谢 |
y****y
发帖数: 123 | 2 要除albumin的
我也喜欢western不喜欢elisa
non spec这个事儿不好办 |
A******y
发帖数: 2041 | 3 You need to concentrate and get rid of salts. Google: Amicon Ultra 4-10000
NMWL. |
t**l
发帖数: 109 | 4 你的1st and 2nd antibody 还有样品是什么种的，血清中可能会有IgG吧，2nd
antibody应该是那种light chain specific
50KDA的位置正好是IgG heavy chain 的位置。
还有就是rabbit的antibody要比goat的好用。goat很脏，普通的BSA和MILK根本block不
了。 |
r******g
发帖数: 600 | |
e*******c
发帖数: 1479 | 6 我用的是鼠的血液样品， 抗体用的是兔的， 为何会在50多的位置出现大量的模糊带，
不会是重链 |
