a*********n
发帖数: 2526 | 1 我想测两个endogenous protein interaction
protein A 25 KD, protein B 50 KD,
想用 protein A 作 IP, WB to 检测 protein B.
手头有两个蛋白的抗体, 都是 mouse IgG.
问题是,protein B正好是 50 KDa, 和 mouse IgG的重链正好重合, IP和WB如果都用
Mouse的抗体,50KD 抗体就会带来很强的信号,使得无法检测 protein B的信号.
请问 Co-IP 高手, 这种情况如何解决?
谢谢 |
m*********r
发帖数: 49 | 2 非高手，楼主这个和我最近做的有点类似。我是把抗体crosslink到protein A/G beads
上，IP之后用酸洗脱，heavy chain几乎很少洗脱下来。不知道有没有帮助。 |
s******s
发帖数: 13035 | 3 有专门的识别native的二抗，就是你run在SDS-PAGE里面的mouse ab识别不了，
只识别wb的抗体。你去google吧，我也不记得哪个公司
【在 a*********n 的大作中提到】
: 我想测两个endogenous protein interaction
: protein A 25 KD, protein B 50 KD,
: 想用 protein A 作 IP, WB to 检测 protein B.
: 手头有两个蛋白的抗体, 都是 mouse IgG.
: 问题是,protein B正好是 50 KDa, 和 mouse IgG的重链正好重合, IP和WB如果都用
: Mouse的抗体,50KD 抗体就会带来很强的信号,使得无法检测 protein B的信号.
: 请问 Co-IP 高手, 这种情况如何解决?
: 谢谢
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o**4
发帖数: 35028 | 4 trueblot，
Ebioscience的二抗，
有专门的识别native的二抗，就是你run在SDS-PAGE里面的mouse ab识别不了，只识别
wb的抗体。你去google吧，我也不记得哪个公司
【在 s******s 的大作中提到】
: 有专门的识别native的二抗，就是你run在SDS-PAGE里面的mouse ab识别不了，
: 只识别wb的抗体。你去google吧，我也不记得哪个公司
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d****7
发帖数: 109 | 5 try ImmunoCruz secondary ab from Santa Cruz
it only recognise native IgG, not denatured IgG, so you won't detect heavy
and light chains
【在 a*********n 的大作中提到】
: 我想测两个endogenous protein interaction
: protein A 25 KD, protein B 50 KD,
: 想用 protein A 作 IP, WB to 检测 protein B.
: 手头有两个蛋白的抗体, 都是 mouse IgG.
: 问题是,protein B正好是 50 KDa, 和 mouse IgG的重链正好重合, IP和WB如果都用
: Mouse的抗体,50KD 抗体就会带来很强的信号,使得无法检测 protein B的信号.
: 请问 Co-IP 高手, 这种情况如何解决?
: 谢谢
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a*********n
发帖数: 2526 | 6 谢谢各位，投桃报李，我又作了一些研究，jackson immuno卖 light chain specific
fluor 2nd antibody, 可以直接用 odessey WB 去看50 KD 的protein. |
d****i
发帖数: 2346 | 7 Warning: BSA and dry milk may contain IgG which will react with this
antibody. Use of BSA and/or dry milk to block or dilute this antibody may
increase background and/or reduce secondary antibody titer.
http://www.jacksonimmuno.com/catalog/CatPages/rblc.asp |
a*********n
发帖数: 2526 | 8 I will keep it in mind. good
【在 d****i 的大作中提到】
: Warning: BSA and dry milk may contain IgG which will react with this
: antibody. Use of BSA and/or dry milk to block or dilute this antibody may
: increase background and/or reduce secondary antibody titer.
: http://www.jacksonimmuno.com/catalog/CatPages/rblc.asp
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g*********5
发帖数: 2533 | 9 marker.
http://www.jacksonimmuno.com/catalog/CatPages/rblc.asp#LCTable
specific
【在 a*********n 的大作中提到】
: 谢谢各位，投桃报李，我又作了一些研究，jackson immuno卖 light chain specific
: fluor 2nd antibody, 可以直接用 odessey WB 去看50 KD 的protein.
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g*********5
发帖数: 2533 | 10 odyssey don't use milk or BSA.
It have its own buffer from fish protein.
【在 d****i 的大作中提到】
: Warning: BSA and dry milk may contain IgG which will react with this
: antibody. Use of BSA and/or dry milk to block or dilute this antibody may
: increase background and/or reduce secondary antibody titer.
: http://www.jacksonimmuno.com/catalog/CatPages/rblc.asp
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a*********n
发帖数: 2526 | 11 115-625-174
115-625-071
【在 g*********5 的大作中提到】
: marker.
: http://www.jacksonimmuno.com/catalog/CatPages/rblc.asp#LCTable
:
: specific
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