a******s
发帖数: 37 | |
a*******a
发帖数: 1240 | 2 我也想问同样的问题。
一个质粒，如何同时表达两个ORF？
【在 a******s 的大作中提到】
: 可行吗？
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H*******i
发帖数: 196 | 3 你问的是原核/真核？
【在 a*******a 的大作中提到】
: 我也想问同样的问题。
: 一个质粒，如何同时表达两个ORF？
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a*******a
发帖数: 1240 | 4 CHO细胞里。
同时还要建稳定表达细胞株。最终目的是构建高通量药物筛选的细胞模型。
【在 H*******i 的大作中提到】
: 你问的是原核/真核？
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w*e
发帖数: 740 | 5 表达4个都可以
用2A比IRES好
【在 a******s 的大作中提到】
: 可行吗？
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a******s
发帖数: 37 | 6 2A切的效率怎么样？
【在 w*e 的大作中提到】
: 表达4个都可以
: 用2A比IRES好
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w*e
发帖数: 740 | 7 good
【在 a******s 的大作中提到】
: 2A切的效率怎么样？
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S*********s
发帖数: 304 | 8 Rudolf Jaenisch lab用T2A, P2A把四个ONSM是个factor放到了一个载体上同时表达四
个ORF.
Reprogramming of murine and human somatic cells using a single polycistronic
vector
Bryce W. Careya,b,
Styliani Markoulakia,
Jacob Hannaa,
Kris Sahaa,
Qing Gaoa,
Maisam Mitalipovaa,1, and
Rudolf Jaenischa,b,1
http://www.pnas.org/content/106/1/157.abstract
【在 a******s 的大作中提到】
: 可行吗？
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g*********5
发帖数: 2533 | |
H****s
发帖数: 301 | 10 很有意思。2A的自切割发生在细胞的什么地方？细胞质内？有没有可能在ER内，或者是
核内？如果使用在体外转录翻译系统，会在体外自切割吗？谢谢。
polycistronic
【在 S*********s 的大作中提到】
: Rudolf Jaenisch lab用T2A, P2A把四个ONSM是个factor放到了一个载体上同时表达四
: 个ORF.
: Reprogramming of murine and human somatic cells using a single polycistronic
: vector
: Bryce W. Careya,b,
: Styliani Markoulakia,
: Jacob Hannaa,
: Kris Sahaa,
: Qing Gaoa,
: Maisam Mitalipovaa,1, and
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B*******o
发帖数: 19 | 11 以惨痛的经验告诉你用IRES不能保证两个ORF的同时表达，个人也觉得2A更靠谱，同时
转录再剪切的。
【在 w*e 的大作中提到】
: 表达4个都可以
: 用2A比IRES好
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j******n
发帖数: 941 | 12
严格来说不是自切割 而是生成的氨基酸链在那个位置不能连起来而留下个nick 因此这
个分裂是在翻译延伸过程中产生的 所以是在细胞质中 体外翻译系统貌似是利用的网织
红细
胞完整的翻译组件 因此理论上2A也是可以工作的
【在 H****s 的大作中提到】
: 很有意思。2A的自切割发生在细胞的什么地方？细胞质内？有没有可能在ER内，或者是
: 核内？如果使用在体外转录翻译系统，会在体外自切割吗？谢谢。
:
: polycistronic
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j******n
发帖数: 941 | 13
我的经验是切割率大约80% 整体表达效率比IRES高 而且在某些情况下 IRES前后两个
ORF表达情况不成比例
【在 a******s 的大作中提到】
: 2A切的效率怎么样？
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H****s
发帖数: 301 | 14 赞。这个解释真是详细、简单明了。
【在 j******n 的大作中提到】
:
: 我的经验是切割率大约80% 整体表达效率比IRES高 而且在某些情况下 IRES前后两个
: ORF表达情况不成比例
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l******a
发帖数: 3339 | 15 分泌型蛋白有办法搞2个ORF吗？ 如果用一个promoter的话。
【在 j******n 的大作中提到】
:
: 我的经验是切割率大约80% 整体表达效率比IRES高 而且在某些情况下 IRES前后两个
: ORF表达情况不成比例
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