x******m
发帖数: 736 | 1 最近rna extraction很不顺，260/230ratio很低，bioanalyzer中的RIN很低。
用乙醇洗过以后，有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后，还是可以看见白色沉淀，有
点透明。有人说可能是盐，但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍，还是有。 |
x******m
发帖数: 736 | |
I***a
发帖数: 13467 | 3 同病相怜啊，
我还是用试剂盒，
我得260／280样品在 2.03－2.05之间，260／230变化就比较大 |
s******s
发帖数: 13035 | 4 我同样sample分两份，用机器自动抽，出来的260/230都可能有很大的区别
【在 I***a 的大作中提到】
: 同病相怜啊，
: 我还是用试剂盒，
: 我得260／280样品在 2.03－2.05之间，260／230变化就比较大
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I***a
发帖数: 13467 | 5 怎么处理260／230 ratio 底的样品？
【在 s******s 的大作中提到】
: 我同样sample分两份，用机器自动抽，出来的260/230都可能有很大的区别
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u*b
发帖数: 110 | 6 下游要做什么？我感觉提的浓度高时ratio就好，浓度低就很没准，但是好像没有影响
到下游实验。另外一般说是不要等沉淀全干再加水，否则不溶，还可以65度加热几分钟
帮助溶解。如果是盐的话就不知道了 |
k****o
发帖数: 589 | |
x******m
发帖数: 736 | 8 trizol
for RNA-seq. needs high integrity RNA |
p****p
发帖数: 3360 | 9 260/280怎样？有可能是蛋白污染。萃取后吸水相的时候千万千万不能贪婪。
【在 x******m 的大作中提到】
: 最近rna extraction很不顺，260/230ratio很低，bioanalyzer中的RIN很低。
: 用乙醇洗过以后，有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后，还是可以看见白色沉淀，有
: 点透明。有人说可能是盐，但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍，还是有。
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h****6
发帖数: 229 | 10 What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg? |
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x******m
发帖数: 736 | 11 rat liver.
around 90 mg.
【在 h****6 的大作中提到】
: What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg?
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x******m
发帖数: 736 | 12 最近rna extraction很不顺，260/230ratio很低，bioanalyzer中的RIN很低。
用乙醇洗过以后，有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后，还是可以看见白色沉淀，有
点透明。有人说可能是盐，但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍，还是有。 |
x******m
发帖数: 736 | |
I***a
发帖数: 13467 | 14 同病相怜啊，
我还是用试剂盒，
我得260／280样品在 2.03－2.05之间，260／230变化就比较大 |
s******s
发帖数: 13035 | 15 我同样sample分两份，用机器自动抽，出来的260/230都可能有很大的区别
【在 I***a 的大作中提到】
: 同病相怜啊，
: 我还是用试剂盒，
: 我得260／280样品在 2.03－2.05之间，260／230变化就比较大
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I***a
发帖数: 13467 | 16 怎么处理260／230 ratio 底的样品？
【在 s******s 的大作中提到】
: 我同样sample分两份，用机器自动抽，出来的260/230都可能有很大的区别
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u*b
发帖数: 110 | 17 下游要做什么？我感觉提的浓度高时ratio就好，浓度低就很没准，但是好像没有影响
到下游实验。另外一般说是不要等沉淀全干再加水，否则不溶，还可以65度加热几分钟
帮助溶解。如果是盐的话就不知道了 |
k****o
发帖数: 589 | |
x******m
发帖数: 736 | 19 trizol
for RNA-seq. needs high integrity RNA |
p****p
发帖数: 3360 | 20 260/280怎样？有可能是蛋白污染。萃取后吸水相的时候千万千万不能贪婪。
【在 x******m 的大作中提到】
: 最近rna extraction很不顺，260/230ratio很低，bioanalyzer中的RIN很低。
: 用乙醇洗过以后，有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后，还是可以看见白色沉淀，有
: 点透明。有人说可能是盐，但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍，还是有。
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h****6
发帖数: 229 | 21 What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg? |
x******m
发帖数: 736 | 22 rat liver.
around 90 mg.
【在 h****6 的大作中提到】
: What is your sample type? Tissue? blood? Sample size in mg?
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w******n
发帖数: 767 | 23 哈，我遇到过，提小鼠肝脏RNA,最后有一大坨白色的，溶不了。解决方法请按照TRIZOL
说明书严格操作。
1.裂解要充分，悬液要透明，看不到没溶的组织。
2.氯仿抽提离心时间要足够。
3.4度离心。
最后得到RNA应该是速溶的。
【在 x******m 的大作中提到】
: 最近rna extraction很不顺，260/230ratio很低，bioanalyzer中的RIN很低。
: 用乙醇洗过以后，有白色的沉淀。用buffer和水溶解以后，还是可以看见白色沉淀，有
: 点透明。有人说可能是盐，但是用isoproponal 和乙醇洗了几遍，还是有。
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I***a
发帖数: 13467 | 24 2.氯仿抽提离心时间要足够。
－－－－－一般多长时间啊？ |
l**********1
发帖数: 5204 | 25 15 min 4℃
Both
TRIzol@
//tools.invitrogen.com/Content/SFS/ProductNotes/F_071215_Trizol%20and%20Trizol%20LS.pdf
or
ISOGENE@
//www.nippongene.com/pdf/manual_english/ISOGEN_LS_2_091001.pdf
【在 I***a 的大作中提到】
: 2.氯仿抽提离心时间要足够。
: －－－－－一般多长时间啊？
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