i****t
发帖数: 58 | 1 今天提取RNA,方法是先trizol碾磨保存样品（取样品要用很长时间，不能马上提取），
然后解冻加chloroform（200ul/1ml Trizol）离心取上清液,再直接用RNeasy kit提取
（就是先ethanol再...）。得到的RNA，260/280很好，但260/230较低。大家能否给点
建议，能怎样纯化一下，得到的RNA量较低（35ng/ul for 25 ul）？RNA是用来做qPCR
的，担心是不是phenol而影响酶活性。谢谢 | y****i
发帖数: 2194 | 2 260/230经常是trizol有残留 洗column的时候小心一点
用离心机比vacuum要容易弄干净一点
不过你做qpcr而已 不管是量还是质量上来说 都足够了
qPCR
【在 i****t 的大作中提到】
: 今天提取RNA,方法是先trizol碾磨保存样品（取样品要用很长时间，不能马上提取），
: 然后解冻加chloroform（200ul/1ml Trizol）离心取上清液,再直接用RNeasy kit提取
: （就是先ethanol再...）。得到的RNA，260/280很好，但260/230较低。大家能否给点
: 建议，能怎样纯化一下，得到的RNA量较低（35ng/ul for 25 ul）？RNA是用来做qPCR
: 的，担心是不是phenol而影响酶活性。谢谢
| s******s
发帖数: 13035 | 3 担心就再chloroform抽一下， rneasy。我估计没问题，260/230这个指标
有时候我用机器做，同样的aliquot会差很多
qPCR
【在 i****t 的大作中提到】
: 今天提取RNA,方法是先trizol碾磨保存样品（取样品要用很长时间，不能马上提取），
: 然后解冻加chloroform（200ul/1ml Trizol）离心取上清液,再直接用RNeasy kit提取
: （就是先ethanol再...）。得到的RNA，260/280很好，但260/230较低。大家能否给点
: 建议，能怎样纯化一下，得到的RNA量较低（35ng/ul for 25 ul）？RNA是用来做qPCR
: 的，担心是不是phenol而影响酶活性。谢谢
| i****t
发帖数: 58 | 4 Thanks for your reply,yetiti and shakuras! |
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