z**********8
发帖数: 766 | 1 从微量培养细胞中抽提RNA，没有问题，RIN大于9.2
从微量病人骨髓分选细胞中抽提，少量介于8-9，大多3-8，质量不足以继续测序（for
RNAseq）。
Nanodrop测的浓度都介于20-几百ng/ul，现在浓度不是我最大的问题，RNA降解造成的
质量问题无法解决。
尝试了qiagen的两个kit： Allprep DNA/RNA/Protein 80004；Allprep DNA/RNA 80204
，两个没有大的区别，都是从培养细胞中没问题，抽提病人样品就不行。在犹豫是不是
只能用RNAeasy kit？
问了好几个qiagen的tech support，也分别尝试了他们的方法，均不能提高RNA质量
请教哪位达人有私人珍藏经验可以分享一下吗，多谢了！ |
C*******e
发帖数: 4348 | 2 试试Ambion的kit？
还有上RNAlater
for
80204
【在 z**********8 的大作中提到】
: 从微量培养细胞中抽提RNA，没有问题，RIN大于9.2
: 从微量病人骨髓分选细胞中抽提，少量介于8-9，大多3-8，质量不足以继续测序（for
: RNAseq）。
: Nanodrop测的浓度都介于20-几百ng/ul，现在浓度不是我最大的问题，RNA降解造成的
: 质量问题无法解决。
: 尝试了qiagen的两个kit： Allprep DNA/RNA/Protein 80004；Allprep DNA/RNA 80204
: ，两个没有大的区别，都是从培养细胞中没问题，抽提病人样品就不行。在犹豫是不是
: 只能用RNAeasy kit？
: 问了好几个qiagen的tech support，也分别尝试了他们的方法，均不能提高RNA质量
: 请教哪位达人有私人珍藏经验可以分享一下吗，多谢了！
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s******s
发帖数: 13035 | 3 我们少量sample一般是用roche的MagNA做，这个最棒，但是要有机器。
另外，有没有可能你的细胞RNA在抽提前就是降解了的。
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80204
【在 z**********8 的大作中提到】
: 从微量培养细胞中抽提RNA，没有问题，RIN大于9.2
: 从微量病人骨髓分选细胞中抽提，少量介于8-9，大多3-8，质量不足以继续测序（for
: RNAseq）。
: Nanodrop测的浓度都介于20-几百ng/ul，现在浓度不是我最大的问题，RNA降解造成的
: 质量问题无法解决。
: 尝试了qiagen的两个kit： Allprep DNA/RNA/Protein 80004；Allprep DNA/RNA 80204
: ，两个没有大的区别，都是从培养细胞中没问题，抽提病人样品就不行。在犹豫是不是
: 只能用RNAeasy kit？
: 问了好几个qiagen的tech support，也分别尝试了他们的方法，均不能提高RNA质量
: 请教哪位达人有私人珍藏经验可以分享一下吗，多谢了！
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l******u
发帖数: 936 | 4 这个机器美国卖多少钱？
【在 s******s 的大作中提到】
: 我们少量sample一般是用roche的MagNA做，这个最棒，但是要有机器。
: 另外，有没有可能你的细胞RNA在抽提前就是降解了的。
:
: for
: 80204
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s******s
发帖数: 13035 | 5 价格不知道。你可以看看facility里面有没有
【在 l******u 的大作中提到】
: 这个机器美国卖多少钱？
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z**********8
发帖数: 766 | 6 谢谢各位回复！
问过我们的facility，没有MagNA，老板不可能现在去买 ：（
细胞离心后的沉淀已经冻存在-80，当时没有加lysis buffer或RNAlater，现在只能抽
提RNA前立即放在干冰上加RLT buffer。
有人有qiagen kit的经验吗？是不是用RNAeasy只抽RNA会比抽DNA和RNA更好？ |
l******u
发帖数: 936 | 7 骨髓细胞的RNA质量本来就不高，我们实验室从老鼠骨髓抽的都不高，何况病人样本。
Qiagen只抽RNA的kit质量更好，买个RNeasy Micro Kit
【在 z**********8 的大作中提到】
: 谢谢各位回复！
: 问过我们的facility，没有MagNA，老板不可能现在去买 ：（
: 细胞离心后的沉淀已经冻存在-80，当时没有加lysis buffer或RNAlater，现在只能抽
: 提RNA前立即放在干冰上加RLT buffer。
: 有人有qiagen kit的经验吗？是不是用RNAeasy只抽RNA会比抽DNA和RNA更好？
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z*********8
发帖数: 1203 | 8 你加bme在RLT里面了没有？
【在 z**********8 的大作中提到】
: 谢谢各位回复！
: 问过我们的facility，没有MagNA，老板不可能现在去买 ：（
: 细胞离心后的沉淀已经冻存在-80，当时没有加lysis buffer或RNAlater，现在只能抽
: 提RNA前立即放在干冰上加RLT buffer。
: 有人有qiagen kit的经验吗？是不是用RNAeasy只抽RNA会比抽DNA和RNA更好？
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z**********8
发帖数: 766 | 9 加了，照着protocol做的，你觉得这是导致降解的原因？
【在 z*********8 的大作中提到】
: 你加bme在RLT里面了没有？
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z*********8
发帖数: 1203 | 10 bme可以抑制RNase的activity，不过既然加了，我觉得是样品开始的时候就没有存储好
的感觉，你在liquid nitrogen里面snap freeze了么？或者你加RNAlater或者trizol了
么？其实，我个人感觉cell里面提RNA还算不是最难的，有些tissue是真心难！ |
