大家帮忙看看这个GFP融合蛋白怎么了？ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 大家帮忙看看这个GFP融合蛋白怎么了？

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H***3 发帖数: 61	1 我的情况跟前一段时间讨论的一个情况不同。转基因植物携带overexpression promoter+gene+c terminal GFP，转到野生型里建立过量表达突变体。基因是核编码的叶绿体蛋白，蛋白N末端一个小酞段引导蛋白 targeting到叶绿体内行使功能。根据抗性筛选到homozygotes,confocal下检测到GFP信号在叶绿体里，非常阳性。DNA genotyping和RT-PCR检测到基因插入正常，mRNA正常，现在的问题是western用anti－GFP抗体无法检测到全长蛋白，只有GFP大概27kD左右的信号。因为是未知蛋白，没有特异性抗体，突变体性状也没有发表过，所以无法确定是否融合蛋白正确表达。我唯一能想到的是蛋白合成后，送到叶绿体内被降解了。可是即使有降解，不会全都降解吧。请大家给点意见，好不容易建立的突变体，实在不想放弃。
y******n 发帖数: 8667	2 降解 is very possible.
H*g 发帖数: 2333	3 How big is the linker region between your gene of interest and the GFP?
H***3 发帖数: 61	4 20 amino acids. Is it important?

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