请教genotyping的问题 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 请教genotyping的问题

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n*******l 发帖数: 75	1 我刚开始做小鼠，所以从genotyping做起。现在问题来了。第一次用相同的kit，primer做了结果挺好的。结果我repeat的时候，用同样提取的基因组DNA竟然做不出了（PCR产物几乎看不见）。我试了不同公司的kit ，结果一样。我保存基因组DNA的时候是-20，是不是反复冻融，DNA降解了呢。GENOSOME是加入 buffer和proteinaseK overnight，然后85度1小时。用上清做的PCR。另外，我用别人提取的基因组DNA是做出来的PCR结果的。今天又来了一批新样品，我重新提取了基因组，然后做，什么也没有啊，阳性对照说明我的反应体系没有问题。难道，我提取的方法出问题了么？这批是老鼠的手指头。实在想不通那里出问题了。好发愁啊。
v***a 发帖数: 1242	2 nuclease contamination? kit 【在 n*******l 的大作中提到】 : 我刚开始做小鼠，所以从genotyping做起。 : 现在问题来了。第一次用相同的kit，primer做了结果挺好的。结果我repeat的时候， : 用同样提取的基因组DNA竟然做不出了（PCR产物几乎看不见）。我试了不同公司的kit : ，结果一样。 : 我保存基因组DNA的时候是-20，是不是反复冻融，DNA降解了呢。GENOSOME是加入 : buffer和proteinaseK overnight，然后85度1小时。用上清做的PCR。 : 另外，我用别人提取的基因组DNA是做出来的PCR结果的。 : 今天又来了一批新样品，我重新提取了基因组，然后做，什么也没有啊，阳性对照说明 : 我的反应体系没有问题。难道，我提取的方法出问题了么？这批是老鼠的手指头。 : 实在想不通那里出问题了。好发愁啊。
D*a 发帖数: 6830	3 很多人用的简易方子，包括kit，都是dna至少扔四度一个月的。为啥要提基因组dna？都是随便消化消化就行了。

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