h*****G
发帖数: 113 | 1 大家好。
做一个实验，需要co-stain cell surface marker 和intracellular protein,然后拍
照。细胞是adherent 的。
因为担心fixation和permeabilization会影响cell surface marker,所以准备先活细胞
染 cell surface marker，然后在fix，permeabilize染intracellular protein.
我的问题是可以活细胞染 cell surface marker， 马上fix，然后再染 2nd antibody
anti-cell surface marker吗？
还是必须活细胞染 cell surface marker，再染2nd antibody anti-cell surface
marker， 完了才能fix？
谢谢。 |
s********s
发帖数: 67 | 2 没干过，不清楚。我用surface biotinylation 看蛋白是不是在surface，效果不错。
antibody
【在 h*****G 的大作中提到】
: 大家好。
: 做一个实验，需要co-stain cell surface marker 和intracellular protein,然后拍
: 照。细胞是adherent 的。
: 因为担心fixation和permeabilization会影响cell surface marker,所以准备先活细胞
: 染 cell surface marker，然后在fix，permeabilize染intracellular protein.
: 我的问题是可以活细胞染 cell surface marker， 马上fix，然后再染 2nd antibody
: anti-cell surface marker吗？
: 还是必须活细胞染 cell surface marker，再染2nd antibody anti-cell surface
: marker， 完了才能fix？
: 谢谢。
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p****e
发帖数: 105 | 3 刚染了小鼠血液白细胞，可能有点类似，先染surface marker，(有些surface marker
和fix不兼容）wash,然后fix and permeabilize cells, wash, 最后intracellular
staning. 强类推荐BD cytofix/cytoperm kit。their manual at: http://www.bdbiosciences.com/external_files/pm/doc/manuals/live/web_enabled/00-6088-559311-B.pdf
Good luck
antibody
【在 h*****G 的大作中提到】
: 大家好。
: 做一个实验，需要co-stain cell surface marker 和intracellular protein,然后拍
: 照。细胞是adherent 的。
: 因为担心fixation和permeabilization会影响cell surface marker,所以准备先活细胞
: 染 cell surface marker，然后在fix，permeabilize染intracellular protein.
: 我的问题是可以活细胞染 cell surface marker， 马上fix，然后再染 2nd antibody
: anti-cell surface marker吗？
: 还是必须活细胞染 cell surface marker，再染2nd antibody anti-cell surface
: marker， 完了才能fix？
: 谢谢。
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h*****G
发帖数: 113 | 4 Thanks.
你染完cell surface marker以后马上fix，然后再染2nd anti-cell surface marker
还是染完cell surface marker，再染2nd anti-cell surface marker，fix，然后再
intracellular staining的？
marker
【在 p****e 的大作中提到】
: 刚染了小鼠血液白细胞，可能有点类似，先染surface marker，(有些surface marker
: 和fix不兼容）wash,然后fix and permeabilize cells, wash, 最后intracellular
: staning. 强类推荐BD cytofix/cytoperm kit。their manual at: http://www.bdbiosciences.com/external_files/pm/doc/manuals/live/web_enabled/00-6088-559311-B.pdf
: Good luck
:
: antibody
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p****e
发帖数: 105 | 5 我只染了一次CD8，没有2nd anti-cell surface marker
【在 h*****G 的大作中提到】
: Thanks.
: 你染完cell surface marker以后马上fix，然后再染2nd anti-cell surface marker
: 还是染完cell surface marker，再染2nd anti-cell surface marker，fix，然后再
: intracellular staining的？
:
: marker
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h*****G
发帖数: 113 | 6 sorry. 我的意思是secondary antibody anti-CD8.
还是你的CD8本身是conjugate的？
Thanks。
【在 p****e 的大作中提到】
: 我只染了一次CD8，没有2nd anti-cell surface marker
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p****e
发帖数: 105 | 7 我用的dye labeled anti-CD8.
【在 h*****G 的大作中提到】
: sorry. 我的意思是secondary antibody anti-CD8.
: 还是你的CD8本身是conjugate的？
: Thanks。
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h*****G
发帖数: 113 | |
