b**********8
发帖数: 349 | 1 最近要做一个inducible shRNA 的stable transfection，采用的细胞株之前已经做过
一遍稳转，G418 resistance。现在改用Hygromycin B筛选新的稳转株，已经挑了将近
100个克隆了，一个阳性的都没有挑到，很郁闷。想问下有经验的战友们，已经做过一
轮稳转的细胞株，再做新的稳转，是不是难度特别大？什么原因呢？难道是我人品太差
？ |
a*******o
发帖数: 16 | 2 和转的基因、细胞都有关系吧，以前实验室做过twist和hRAS共转的稳转细胞株，很好
做，但是其他的相对就很麻烦，有的就做不出 |
s******s
发帖数: 13035 | 3 hygro不太好用呗
【在 b**********8 的大作中提到】
: 最近要做一个inducible shRNA 的stable transfection，采用的细胞株之前已经做过
: 一遍稳转，G418 resistance。现在改用Hygromycin B筛选新的稳转株，已经挑了将近
: 100个克隆了，一个阳性的都没有挑到，很郁闷。想问下有经验的战友们，已经做过一
: 轮稳转的细胞株，再做新的稳转，是不是难度特别大？什么原因呢？难道是我人品太差
: ？
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h*****n
发帖数: 2023 | 4 应该没有问题。我曾经共表达5个质粒（稳定表达）。 |
R***R
发帖数: 166 | 5 可参考iPS诱导。 多个病毒或者质粒载体感染，按理是互相没有影响的 。 |
t****0
发帖数: 439 | 6 提高病毒浓度。
也许你转的shRNA是lethal的？ |
b**********8
发帖数: 349 | 7 我没有用病毒转，而是直接转的质粒，而且这个shRNA是tet-on inducible的，没加
tetra的时候shRNA是不表达的。
【在 t****0 的大作中提到】
: 提高病毒浓度。
: 也许你转的shRNA是lethal的？
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