V********n
发帖数: 305 | 1 有没有什么技术是可以Screen 细胞膜上蛋白表达情况的。比如表达了哪些，表达量高
低等等，类似Array一样的技术。
能有高手帮忙一下么？先谢谢了。 |
i***R
发帖数: 663 | 2 Fluorescent dye tagged antibody + FACS assay
蛋白得有能被识别的tag |
V********n
发帖数: 305 | 3 这个就是FACS吧，能系统的screen所有膜蛋白么？ |
o**4
发帖数: 35028 | 4 没做过这些，
但是我想，你可以提细胞膜蛋白，然后用质谱测蛋白含量就可以做到了。
【在 V********n 的大作中提到】
: 这个就是FACS吧，能系统的screen所有膜蛋白么？
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V********n
发帖数: 305 | 5 多谢！
嗯，质谱也没办法分所有蛋白吧。不然，就没有antibody array一说了。俺主要是想做
一个膜蛋白的筛查工作。 |
K*F
发帖数: 120 | |
i***R
发帖数: 663 | 7 Biotinylation surface protein--> pull down --> MS / Elisa / Western etc. |
V********n
发帖数: 305 | 8 多谢楼上各位。查到一篇Nature genetics的paper做的类似工作。Biotin label或者直
接抽膜蛋白跑２D胶也是很好的办法。 |
o**4
发帖数: 35028 | 9 质朴应该可以测所有蛋白了，
可以用silac 或者 iTRAQ 标记蛋白
【在 V********n 的大作中提到】
: 多谢！
: 嗯，质谱也没办法分所有蛋白吧。不然，就没有antibody array一说了。俺主要是想做
: 一个膜蛋白的筛查工作。
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p****p
发帖数: 3360 | 10 膜蛋白疏水氨基酸多，trypsin酶切的片断可能很大。质谱覆盖的范围相对要小，所以鉴定要难些。不知道有没有其他蛋白酶比较好得可以解决这个问题。
【在 o**4 的大作中提到】
: 质朴应该可以测所有蛋白了，
: 可以用silac 或者 iTRAQ 标记蛋白
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n***w
发帖数: 2405 | 11 可以把paper名字告诉一下嘛。。。
谢谢！！！
【在 V********n 的大作中提到】
: 多谢楼上各位。查到一篇Nature genetics的paper做的类似工作。Biotin label或者直
: 接抽膜蛋白跑２D胶也是很好的办法。
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V********n
发帖数: 305 | 12 nature genetics • volume 25 • may 2000
PMID: 10802657
Large-scale identification of secreted and membrane-associated....
The idea is perfect! |
K******S
发帖数: 10109 | 13 that's in year 2000. 2D gel is almost a dying technique in US now, although
lots of labs in europe are still doing it.
【在 V********n 的大作中提到】
: nature genetics • volume 25 • may 2000
: PMID: 10802657
: Large-scale identification of secreted and membrane-associated....
: The idea is perfect!
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K******S
发帖数: 10109 | 14 with sequencing information from MS/MS, you don't need high sequence
coverage. A few well identified peptides are enough to identify a protein.
以鉴定要难些。不知道有没有其他蛋白酶比较好得可以解决这个问题。
【在 p****p 的大作中提到】
: 膜蛋白疏水氨基酸多，trypsin酶切的片断可能很大。质谱覆盖的范围相对要小，所以鉴定要难些。不知道有没有其他蛋白酶比较好得可以解决这个问题。
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