m******5
发帖数: 1383 | 1 目的片断连进载体以后，双梅切验证，发现酶切产物比PCR目的片断大：（目的片断
500bp, 跑出来接近800）
请问这种情况正常么？
等测序结果还要三天……忐忑阿 |
b******n
发帖数: 4225 | 2 可能连进了两个拷贝的目的片段吧
你看看两个酶切位点是不是cohesive
【在 m******5 的大作中提到】
: 目的片断连进载体以后，双梅切验证，发现酶切产物比PCR目的片断大：（目的片断
: 500bp, 跑出来接近800）
: 请问这种情况正常么？
: 等测序结果还要三天……忐忑阿
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n***w
发帖数: 2405 | 3 同意ls。可能连了2个copy。。。另外backbone切干净了吗？ |
s********n
发帖数: 2939 | 4 个人比较倾向于用colony PCR screening，通量比双酶切高不少。 |
m******5
发帖数: 1383 | 5 PCR screen的都是positive的……
噢，送出去测序了，另外只好重新来了，刚到一个实验室，感觉所有系统都还不熟悉。
以前这种连接三天就搞定了 |
n***w
发帖数: 2405 | 6 PCR不如酶切好，稍有污染，PCR容易出现false postive...
我做fusion protein都好几个月了。。。现在就是把这个大片段连到backbone里去老是
得不到正确的克隆。。。。 |
m******5
发帖数: 1383 | 7 ntgxw 这个id看着好眼熟……
【在 n***w 的大作中提到】
: PCR不如酶切好，稍有污染，PCR容易出现false postive...
: 我做fusion protein都好几个月了。。。现在就是把这个大片段连到backbone里去老是
: 得不到正确的克隆。。。。
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s********n
发帖数: 2939 | 8 可能个人偏好不同，PCR优点在于通量高，而且很大提高正确率，自从以前做的一个低
效率克隆（1/20）后我就都改用PCR screening了。
【在 n***w 的大作中提到】
: PCR不如酶切好，稍有污染，PCR容易出现false postive...
: 我做fusion protein都好几个月了。。。现在就是把这个大片段连到backbone里去老是
: 得不到正确的克隆。。。。
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