C********4
发帖数: 308 | 1 一个条件性细胞剔除模式小鼠的诞生 (2013-02-22 18:10:22)转载▼
标签： talen 创业 大鼠基因敲除 基因敲除 杂谈 分类： 个人随笔
对于基因敲除（gene knockout）小鼠大家并不陌生，比如我们想要研究一个基因
在体内的功能，我们就可以把这个基因从小鼠体内敲除掉。而有的时候我们除了关心一
个基因的功能外，还想知道表达这个基因的细胞在体内是干嘛的。比如，我们想知道B
细胞是干什么的，胰岛细胞是干什么的？我们可以从小鼠体内把这些细胞清除掉（也叫
细胞剔除，cell depletion），一看不能产生新抗体了，或是胰岛素没了，血糖升高器
官衰竭了，我们就可以恍然大悟说：“你看，胰岛细胞是产生胰岛素的，B细胞是产生
抗体的”。然后就可以发文章到CNS（Cell, Nature, Science）了。当然这些都被别人
发现过了，是我们没有赶上好时代呀。
那怎样才能在体内把一群细胞清除掉呢？方法可能很多，但也真不多。这里我讲一
个非常简单的方法，就是白喉毒素介导的细胞剔除。白喉毒素（Diphtheria toxin, 简
称DT）大... 阅读全帖 |
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b**********8
发帖数: 349 | 2 新手，最近在做一个质粒的稳定转染至肝癌细胞，大概步骤如下，6孔板中转染，24小
时后按1:50的比例传至10cm dish中，（大约1~2万个细胞），再等24小时开始加药筛选
，没隔3天换液维持，至第9天前后开始出现大量细胞死亡，并出现镜下明显可见的
colony，至第12天左右出现肉眼下明显可见的colony，于是用黄色tips直接在肉眼下挑
取单个colony，分别转移至96孔板中培养，并逐渐放大至24孔板，然后进行鉴定。至今
挑了大概40个colony，仅有一个阳性，但是继续放大培养两代后阳性反应突然丢失。
现在我有两个问题,
1）阳性反应突然丢失的原因可能是什么？细胞不纯？阳性细胞被其他细胞取代？筛选
出colony并放大培养的最初几代过程中，是否一定不能中断选择药物？哪怕只有两三天
的中断？
2）在网上翻了些帖子，发现有的人会在挑出单个colony培养贴壁后在做有限稀释，挑
取单克隆，这样做是不是会是拿到真阳性克隆的机会更大？可不可以按照这样的思路来
做，先用我上面的挑取，培养并鉴定出一批（视运气好坏多少不等）有阳性反应的
colony（姑且认定这个colony里面含有我想要... 阅读全帖 |
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c**n
发帖数: 73 | 3 我是用serial dilution做的稳定细胞转染
得到阳性细胞后曾经试过把G418的浓度降低一半
阳性虽然还在，但是表达量降低将近一半
查过网上论坛，发现这个是epigenetical modification
于是重新用高浓度的G418，再次得到高表达的阳性细胞。
所以取决于你转染的质粒对细胞的毒性，药物有可能会很重要，即使在你得到阳性细胞
后。 |
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w*********n
发帖数: 439 | 4 多谢大虾
我们把心肌细胞消化出来以后放在体外培养,然后在培养液里面加入BrDU，发现有BrDu
阳性细胞
如果给小鼠注射BrdU，FACS发现只有心脏里面的杂细胞是Brdu阳性， 心肌细胞几乎没
有。 |
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b**********8
发帖数: 349 | 5
多谢回复，能否提供您关于serial dilution的更详细的信息，比如什么时候dilution
，转染后第二天？还是如我帖子中描述的挑到阳性colony后再dilution？
另外，重新用高浓度的G418后再次得到高表达的阳性细胞，请问这个细胞和之前浓度降低一半表达量也降低一半的细胞是同一批吗？ |
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b********e
发帖数: 50 | 6 这个估计楼上有几位根本就没看懂或根本没仔细看。常做动物实验的肯定就能明白区别
。说rosa-GFP-dta鼠，这个小鼠一出生全身是绿的。用Cre后去掉GFP, Dta表达，细胞
直接死掉。楼主这个小鼠是有Cre的细胞才表达GFP, 但细胞不会死。只有给DT这些细胞
才死。至于rosa启动子，LZ说了设计的时候是为了跟踪DTR阳性细胞。什么时间说rosa
能够survive了？我们实验室有很多cre鼠，我觉得这是非常有用的一个，至少在某些方
面比楼上提到的几个有优势。
B |
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c**n
发帖数: 73 | 7 很久之前所以既不清楚了
但肯定是转染后过了好几天
用的是polyclonal的细胞作dilution
在dilution之前并没有经过挑阳性细胞这步
我用的是corning 的single cell cloning protocol
你google就能找到
是同一批细胞.
dilution
降低一半表达量也降低一半的细胞是同一批吗？ |
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j****x
发帖数: 1704 | 8 如果用的是VSVG，那么这种形态是非常典型的，多个细胞聚集成团，形态变圆，
由于VSVG的细胞毒性造成的。
不过看来你的包转效率不够高啊，否则的话感染之后一般满屏都是阳性细胞根本
不用去怀疑是不是没有被过滤掉的273T |
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d***r
发帖数: 108 | 9 请教大牛，老鼠用OVA peptide 免疫后， 脾脏T细胞数量应该有变化吗？怎么我的CD3
阳性细胞数老是变来变去？文献也查不出个结果，请指教。谢谢！ |
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z*******2
发帖数: 2643 | 10 (-)阴性是人体细胞的正常状态
(+)阳性是人体细胞的非正常状态
雌激素受体，孕激素受体， PS2蛋白,转移抑癌基因等因素呈阴性，正常。
P21 抑癌基因， PCNA周期蛋白， P53 抑癌基因， HER-2/neu基因等因素呈阳性，
非正常。
一．指导乳腺癌内分泌治疗的标志物
1．ER（雌激素受体）、PR (孕激素受体)：ER、PR的检测实现了内分泌预见性的治疗。
乳腺癌一线内分泌治疗ER、PR均阳性者有效率为60%～70%。ER阳性PR阴性或ER阴性PR阳
的乳腺癌患者有效率20%～30%；ER阴性病人有效率仅为5%左右。说明ER、PR阳性的乳腺
癌患者对内分泌治疗尤为显著。
ER、 PR不仅是一项很重要的乳腺癌内分泌治疗的预先性标志物，而且也是一项预示预
后的标志物。恶性程度较低的高分化乳腺癌组ER、PR阳性率明显高于低分化癌组；淋巴
结转移组ER、PR阳性率低于无转移组；ER、PR阴性者预后差。研究表明ER、PR均为判断
乳腺癌患者预后较好的指标。
2．AR (雄激素受体)：AR检测水平与孕酮类药物有效率呈正相关，而与PR水平无关。乳
腺癌中AR大多与ER、PR同时表达，只有少... 阅读全帖 |
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c*******u
发帖数: 12899 | 11 ☆─────────────────────────────────────☆
fsdf (fsdf) 于 (Thu Aug 16 15:21:41 2012, 美东) 提到:
看到版上讨论，想问一下到底什么叫乙肝，什么是传染性的。
我一个朋友是hbs antigen 阴性， 但是hbs－antibody 阳性，但是她喂奶喂到小孩一
岁。这是ok的吗？
（朋友医生说她得过，好了所以才有抗体。 她都不知道。 这种母乳有危险吗？）
☆─────────────────────────────────────☆
bravesonny (烦啊) 于 (Thu Aug 16 15:30:08 2012, 美东) 提到:
antibody阳性表示有抗体，免疫的，不是乙肝
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Hedwig (暗夜精灵) 于 (Thu Aug 16 15:49:37 2012, 美东) 提到:
基本生物知识不行啊~
乙肝病毒携带是抗原antigen阳性，抗体antibody阳性是好事儿，北美生的bb打乙肝疫
苗... 阅读全帖 |
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c*******u
发帖数: 12899 | 12 ☆─────────────────────────────────────☆
littlehei (嘿嘿) 于 (Thu Mar 10 19:27:29 2011, 美东) 提到:
上大学新生入学体检的时候第一次检查出来，众目睽睽下几个肝感觉阳性的同学给点名
，被校医区别对待了，甚
至游泳卡也过了好久才拿到。。。当时只觉得无地自容，感觉被歧视了。
//幸好后来好像没有再这么被当众羞辱过。出国的体检，工作以后每年的体检都没有很
多废话。
后来我自己一直很注意这个方面的话题。得知我父亲年轻的时候得过乙肝，家里的孩子
成为乙肝病毒携带者也是
十有八九的事。虽然医学上说这个病毒携带是不可治愈也不可逆转的，还是相信民间偏
方吃了不少中药。小三阳
还是小三阳，姐姐是大三阳的，据说一度变成小三阳，现在不知道。因为美国好像没有
大小三阳的说法。
一直风平浪静的直到怀孕。第一trimester血结果出来以后，产科医生似乎有点紧张。
然后州政府的health
department给我打电话，说要把我登记在案。让我LG去打肝炎预防针，说小孩出生的几
个小时内得打第一针预防
针，期间各种血液体液样... 阅读全帖 |
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D*****r
发帖数: 1239 | 13 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: longwoodwalk (长木行走), 信区: Biology
标 题: 讲讲我的生物创业过程
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 8 09:21:11 2013, 美东)
我因为最近一直在中国，所以来这里很少了。这次回美国来再到这个版，读帖子觉
得非常亲切，不管是积极的还是消极的，都还是那样熟悉。一时心血来潮就想写点自己
的经历，希望对学生物的朋友有点帮助，或者至少知道还有别的路可以试试。没想到会
有这么多的网友读了，并得到了这么多的祝福与鼓励。非常感谢大家。尤其是好多朋友
还给了非常具体的建议，包括知识产权建议（这些我们已经意识到并跟一个知识产权律
师事务所签订了服务协议）、公司运作方法建议、未来公司应该发展的方向等等。这些
都让我受益匪浅。现在不是我的帖子给大家鼓励了，而是我从大家的回复中获得了很多
的灵感，这对我后面把公司做好非常有益处。
本来在这里是写着玩儿的，以我以前的经验来看，读者应该不过几百人或最多1、2
千人。现在看到这么多人来读，并已经有人把这个帖子转到了国内微博上，我还真有... 阅读全帖 |
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a****y
发帖数: 1035 | 14 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: longwoodwalk (长木行走), 信区: Biology
标 题: 讲讲我的生物创业过程
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 8 09:21:11 2013, 美东)
我因为最近一直在中国，所以来这里很少了。这次回美国来再到这个版，读帖子觉
得非常亲切，不管是积极的还是消极的，都还是那样熟悉。一时心血来潮就想写点自己
的经历，希望对学生物的朋友有点帮助，或者至少知道还有别的路可以试试。没想到会
有这么多的网友读了，并得到了这么多的祝福与鼓励。非常感谢大家。尤其是好多朋友
还给了非常具体的建议，包括知识产权建议（这些我们已经意识到并跟一个知识产权律
师事务所签订了服务协议）、公司运作方法建议、未来公司应该发展的方向等等。这些
都让我受益匪浅。现在不是我的帖子给大家鼓励了，而是我从大家的回复中获得了很多
的灵感，这对我后面把公司做好非常有益处。
本来在这里是写着玩儿的，以我以前的经验来看，读者应该不过几百人或最多1、2
千人。现在看到这么多人来读，并已经有人把这个帖子转到了国内微博上，我还真有... 阅读全帖 |
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L***s
发帖数: 133 | 15 做了只转基因小鼠，lox-STOP-lox-gene-EGFP，EGFP是fuse在gene的C末端，target的
位置是ROSA26。
体外细胞试验很好, Cre转染后大量的GFP表达，功能也没问题，该基因不toxic。
好了，小鼠做好后，与Nestin-Cre line 杂交后，兴冲冲做了IHC (rabbit GFP Ab, invitrogen) ，结果很失望，发现GFP表达弱，且阳性细胞少；同样的Cre line 和ROSA26-YFP杂交后，同样的染色，YFP表达很强，阳性细胞很多。
帮忙分析一下原因
1. Fusion protein的问题？可能是fusion protein 表达量低？或是表达量可能并不那
么低，但在PFA fix时导致fusion protein被mask了，所以IHC看不到，证据是lox/lox
比lox/+的阳性细胞要多些。试了citrate buffer antigen retrieval (pH6, 95C,
15min)， 结果更差，一点阳性细胞也没有了。其他可行的antigen retrieval 方
法？
2. 因为target的位置... 阅读全帖 |
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u***r
发帖数: 4825 | 16 https://finance.sina.com.cn/china/gncj/2020-03-12/doc-iimxxstf8510629.shtml
2020年03月12日 19:14 第一财经
这项新研究提出，新冠病毒可能通过与泌尿系统细胞的ACE2阳性细胞结合，损伤病
人的肾脏和睾丸。
3月12日中午，湖北省政府网站发布了一则防控科普文章《感染新冠肺炎的适龄男
性应进行生育力检查》，信息来源显示为华中科技大学同济医院生殖医学中心李豫峰教
授团队。不过目前这篇文章在湖北省政府官网已经无法显示。
第一财经记者从同济医院获悉，这则提醒其实来自于南京医科大学附属苏州医院泌
尿外科樊彩斌等近日在预印本平台medRxiv上传的一篇论文，此论文提出了新冠病毒的
两个潜在目标：肾脏与睾丸。
新冠病毒感染以肺炎为主，一些新研究已经指出新型冠状病毒感染也可能攻击肠道
、肝脏等器官。鉴于一些抗病毒药物本身就具有一些肾毒性，加上病毒可能以肾脏为靶
点，该团队建议在新冠病人的临床治疗期间进行肾功能评估和特殊护理。
论文摘要提到，一些研究表明有些新冠肺炎病人除呼吸系统损伤外，还出现了肾功
能异常甚至肾损伤，... 阅读全帖 |
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B*D
发帖数: 5016 | 17 从北朝转的
http://www.cctvdream.com.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=51
ge%3D1
注：由于之前实验室有同事认为本文对之前实验室的研究细节有泄密嫌疑，因此文章做
了删节处理。当然，公开发表的文献懂行的读者能猜出这些此处已删除的背面都是什么
，就请大家给个面子，不要人肉了。前面一段主要是让大家直观了解一下现代尖端生物
研究中上下游的长度，QA，QC的复杂性和研发技术平台的长期性。花十年，2-3代博士生
打造世界一流技术平台的艰辛，真的很不容易。这也从一个侧面阐述了“引进即落后，
追也追不上”的怪圈的产生原因，并通过一个例子来讲述怎样打破怪圈，建立世界一流
技术平台。
小议生物学研究中的技术平台的作用
上个月，我以前的实验室（后文为了描述方便，称为北大实验室）发表了一篇Cell的封
面文章，这是一个非常难得的成果。关系挺铁的哥们发了好文章，让人激动不已。关于
这篇文章的科学意义，Cell有专文评述，网上也有很多文章讨论，这里就不多谈了。笔
者特别欣慰的是，这篇文章标志着北大实验室相关技术平台达到世界一流水平。这个技
术平... 阅读全帖 |
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o***s
发帖数: 42149 | 18 在紫外线灯的照射下，转基因克隆猪的脚趾会发出绿色荧光。付兴华 摄
这几天，云南农业大学动物科学技术学院实验区的猪圈热闹非凡，原来，这里刚培育出了10头转基因克隆猪。
这些小猪，在阳光下与普通的小猪没有什么差别，全身呈灰白色，刚从猪圈里抓出来时，还嗷嗷叫唤个不停。随后，研究人员将它们放进没有一点光线的小暗室后，一开紫外线灯，却发现这些小猪的猪蹄部位竟然散发出绿色的荧光……
解密猪蹄为何会发荧光
身体里拥有水母的基因
主持这个课题研究的魏红江教授向晚报记者介绍，这些小猪就是转基因克隆猪了，它们的基因不全部来自父母亲，一个或多个基因是来自其他生物体。经鉴定，共有10头刚出生的小猪被确定为转基因克隆猪。
什么是转基因克隆猪呢？众所周知，自然界中每个生物体都固有不同的生命特征，而保持这些生命特征的物质就是细胞核中的基因。生物体的基因一般都来源于父母。当人们把一种生物的基因片段加入到另外一种生物中时，就诞生了转基因生物，比如在玉米的基因中加入昆虫基因。
云南农业大学动物科学技术学院的这项研究，是在学校和曾养志教授的大力支持下，与该校高士争教授合作开展的，由高教授提供Leptin基因。
魏红江团队首... 阅读全帖 |
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n******g
发帖数: 17225 | 19 匿名用户
251 人赞同了该回答
以下内容均为答主所了解到的实际情况，有争议的地方会注明，尽量做到客观事实的陈
述，不夹私货。
就评论简述一下布病。
布病是布氏杆菌病的简称，我国乙类传染病（和结核艾滋一个级别）。患者感染布氏杆
菌后发病，发病后表现为肝脾肿大，波浪热，关节疼痛等。严重的可导致不孕不育，即
影响生育。因为它为细胞内寄生菌，所以可导致患者终身带毒（你可以理解为和hiv感
染细胞情况很相似，但不全是，此处只为方便理解，不严谨）。
1.感染者的首次发现（此节暂有争议，可当小分支看，不是主线）
2019年11月中旬左右，所里面有课题组做实验，关于转基因小鼠的，小鼠一直未怀孕，
就怀疑小鼠有问题，进行解剖。检测发现小鼠有感染布氏杆菌。然后做实验的几位同学
就紧急去医院检测，第二天拿到结果显示血清学阳性，2人阳性。
所里态度：没得说，肯定是压着，毕竟人少。
2.更多感染者的发现
上周日（2019年11月24日），有大约8个左右的血清阳性患者（基本上是小鼠事故实验
室的人，也有其他团队的），然后就有学生恐慌在兰兽研学生服务群里发言，要所领导
给个交代。所领导不但不作为，且还人身攻击学生... 阅读全帖 |
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s******a
发帖数: 472 | 20 实在不好意思，又把这个帖子顶起来。
从国内回来一个月了，一直在转我的BAC DNA，一直在失败。
我想总结一下失败的经验，并且继续求教大家：
我需要转染的细胞是Hepa 1-6，小鼠肝癌细胞，8-well plate 每孔种10000个细胞 ，
第二天转染。固定lipofectamine用量（量大毒性大），优化的主要是DNA和
lipofectamine的比例。每孔转10 ng 到数 ug之间的range都试过，没有能够work的。
用普通质粒作为阳性对照，转染效率相当高，80-90%是有的。
这篇nature method文章用lipofectamine转BAC到小鼠ES细胞，10 cm2 的碟用10 ul
lipo转150-350 ng BAC DNA（protocol在supplementary，但是有typo，写的是150-350
ug）。我和文章作者email也联系过，他们转染的效率也只有1-2%。
所以现在唯一能确定的是转BAC DNA（我的约250kb）还是比普通质粒要难很多的。目前
对于lipo2000也已经没有idea了。
我现在开始尝试电转，第一次参数不合适细胞全死... 阅读全帖 |
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s******a
发帖数: 472 | 21 实在不好意思，又把这个帖子顶起来。
从国内回来一个月了，一直在转我的BAC DNA，一直在失败。
我想总结一下失败的经验，并且继续求教大家：
我需要转染的细胞是Hepa 1-6，小鼠肝癌细胞，8-well plate 每孔种10000个细胞 ，
第二天转染。固定lipofectamine用量（量大毒性大），优化的主要是DNA和
lipofectamine的比例。每孔转10 ng 到数 ug之间的range都试过，没有能够work的。
用普通质粒作为阳性对照，转染效率相当高，80-90%是有的。
这篇nature method文章用lipofectamine转BAC到小鼠ES细胞，10 cm2 的碟用10 ul
lipo转150-350 ng BAC DNA（protocol在supplementary，但是有typo，写的是150-350
ug）。我和文章作者email也联系过，他们转染的效率也只有1-2%。
所以现在唯一能确定的是转BAC DNA（我的约250kb）还是比普通质粒要难很多的。目前
对于lipo2000也已经没有idea了。
我现在开始尝试电转，第一次参数不合适细胞全死... 阅读全帖 |
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y******m
发帖数: 143 | 22 用鼠艾滋目前有很多争议，虽然文章中用人源化小鼠模型，但是很让人疑惑的是鼠艾病
毒并不感染人细胞，但是在文章中可以看到肝细胞的感染。另外在图像学的结果中，其
实阳性率是非常低的，蓝色的一块基本上是色差中最低的一档，也就是说图像中的绝大
部分是假阳性，真阳性绝大部分聚集在胸腺部分，但是问题是这是鼠病毒，那却是人的
胸腺！另外不同的小鼠的感染率是不同的，而且在鼠病毒对照中可以看到病毒感染的图
像鉴别有随时间衰退的过程，如何证明阳性组是同水平的感染和同时间的感染是一个挑
战。并且图像成型很有讲究，选择不同的设置成像很容易做出一个假阳性的结果。 |
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发帖数: 1 | 23 重复了之前的实验，依然可以有结果。而且做了各种对照，确实没有对照组发现阳性结
果。
但是细胞扩增时候，没有发现阳性。因为是从一个孔转到175 里面，扩增了几次，估计
丢失不少细胞。依然决定做继续提取细胞。
同时决定直接在10厘米的盘里直接转染，不扩增了。
只要可以拿到一点阳性细胞，就可以测序了。
很明显，可以重复实验的。 |
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h****u
发帖数: 168 | 24 不用担心啊。这本来就是各人隐私，不告诉谁都是合理的。
乙肝病毒阳性和乙肝患者是不一样的。乙肝病毒本身是在肝细胞内的，如果病毒不是处
于复制期，肝细胞完整性不会被破坏，血液中的病毒滴度非常低，日常生活不会传染给
别人，尤其是配偶如果具有乙肝病毒抗体，就更不会被传染了。所以LZ不用特别担心的。
乙肝表面抗体是阴性的人需要接种乙肝疫苗，获得保护性抗体。LZ老公应该去检查乙肝
抗原抗体的情况，然后决定是否需要打乙肝疫苗。
病毒的复制会破坏肝细胞，这样，病毒会释放到血液中，这样，就具备了比较强的传染
性。在生产的过程中，有可能通过血液和体液感染婴儿。但是在怀孕期间，医生应该会
给你做详细的检查，检查病毒是否处于复制期，这个只需要和你的医生好好交流就行了。
不过只要妈妈是乙肝病毒阳性，婴儿出生后都应该尽早接种乙肝疫苗第一针，并且需要
打乙肝免疫球蛋白来帮助宝宝阻断病毒，这一点非常重要。 |
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z*******2
发帖数: 2643 | 25 这份卵巢透明细胞腺癌的病历写清楚了：
(1) 她的内分泌的标志物(雌激素受体，孕激素受体， PS2蛋白)均阴性,正常。
(2) 她的癌预后的标志物P21 抑癌基因， PCNA周期蛋白， P53 抑癌基因，
HER-2/neu基因等因素呈阳性,非正常。
我的帖子已经注明了，预后的标志物 (反映肿瘤生物行为的一些标志物) 能更准确地判
断癌症的病程和结局。她的病历显示多数预后标志物显示阳性，这是身体对癌症细胞生
长的一种自然应对措施。特别是P53基因突变与多种肿瘤的发生有关，随着肿瘤的进展
，P53蛋白表达阳性率明显升高。她的P53抑癌基因正好呈现阳性，所以她应该赶快找肿
瘤科医生治疗。
这跟您说的内分泌的标志物ER对治疗预后都没太大意义，是一致的。 |
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发帖数: 1 | 26 最后还得老老实实回到做重组蛋白这条老路上来
成都--(BUSINESS WIRE)--三叶草生物制药，一家全球临床阶段，致力于创新及变革性
生物制药研发的生物制药公司，今天宣布在哺乳动物细胞内成功表达 “S-三聚体” 新
型冠状肺炎病毒（2019-nCoV）重组蛋白疫苗，并在成都高新区政府和成都市公共卫生
临床医疗中心的大力协助下，用新获得的 “S-三聚体” 抗原在多例病毒感染患者康复
后血清中检测到病毒特异性抗体。重要的是，三叶草是全球第一家披露一个新冠病毒疫
苗候选物可以被病毒感染患者的抗体所识别，这一结果表明 “S-三聚体” 重组抗苗保
留了新冠病毒S-蛋白抗原天然的结构，因此 “S-三聚体” 疫苗有望在人体中诱导保护
性的免疫反应。
如同HIV（艾滋病毒）, RSV（呼吸道合胞病毒）及 Influenza Virus （流感病毒）的
表面抗原结构一样，这次在中国武汉发现的新型冠状肺炎病毒2019-nCoV也是RNA病毒，
其表面抗原S蛋白也具有天然三聚体结构，病毒通过其三聚体抗原（S蛋白）与宿主细胞
表面ACE2受体结合，从而进入人体细胞，导致发烧、肺部感染等疾病。
在中国科学... 阅读全帖 |
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b******s
发帖数: 5365 | 27 接触凋亡不久，做Annexin V-PI staining 看到有Annexin V-PI+的细胞群。按理说
PI阳性的细胞胞膜一定不完整，Annexin V也会结合上去的啊，是什么导致这样的细胞
群？
我想来想去觉得可能是debris，但问题是我看的结果是凋亡而不是活细胞，这种情况下
gate( flow cytometry)基本上设了thresh hole后绝大多数events都要收集的，是不是
这样造就了这么一群“细胞”？哪位比较熟悉flow 和apoptosis的牛人请指点以下，谢
谢！ |
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w***b
发帖数: 86 | 28 谢谢！！！
问题2 我明白了。
对问题1，你是说PPD+CXR（ChestX-Ray吗)可以确诊结核病吗？可是老年性结核病的CXR
不是和肺癌的CXR很像吗？
老太太现在被怀疑有肺癌，专家的意思高度怀疑是肺癌，没有肺结核。
我想确认的是：如果影像+病理结果确认是肺癌，之前的PPD阳性是否说明完整的病情应
该是肺结核并发肺癌？而不只是肺癌？恳请你的建议，万分感谢。
1.PPD皮试（有鸡蛋大的包）阳性，可以说明有active的结核菌，这个结论对吗？难道
PPD也可能有假阳性？
PPD is just a screening test, a screening test means higher sensitivity,
with an acceptable specificity, which means there are many false positive
cases. That's why CXR is warranted to check the presence of active TB.
2.PET可以确诊有没有癌细胞，但不能确认小细胞癌或非小细胞癌，这个结论对吗？
t |
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n***p
发帖数: 7668 | 29 http://zhidao.baidu.com/question/1147921
结核菌素皮试结果如何判断:通常在前臂掌侧皮内注射5 IU
PPD, 经48—72小时检查局部反应,凡硬结直径平均＞5MM为阳性.
6—10mm=+；11—20mm=++；＞20mm=+++；局部发生水泡=++++。
3 PPD皮试阳性说明什么:结素皮肤反应是迟发型细胞超敏反应.它是抗原(结核菌
或卡介苗)进入机体使机体的免疫T淋巴细胞致敏，并大量分化增殖。当已致敏的机体再
次遭受到抗原入侵时，致敏淋巴细胞就会与之结合，引起变态反应性炎症。表现在结核
菌素注射部位形成硬结甚至发生水泡、坏死。结素试验阳性表明机体曾经受到结核菌感
染或接种过卡介苗，也表示机体对结核菌有一定免疫力。但也有少数免疫力低下的人（
约5%）呈阴性或因技术原因而呈现假阴性。通常接种卡介苗后，若PPD皮试阴性，说明
接种失败。
4 如何判断PPD阳性的临床意义：
⑴PPD皮试阳性表示对结核杆菌具有敏感性，反应越强，受到结核菌感染的可能性越大
。通常直径＞15mm或有水泡，认为是新近受到感染。但皮试阳性并不意味着就... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 30 断子绝孙?研究发现:新冠病毒可攻击肾脏和睾丸
澎湃新闻/科学网 2020-02-17 8:42
除了导致肺炎，一些新研究已经指出新型冠状病毒感染也可能攻击肠道、肝脏等器官。
而南京医科大学附属苏州医院泌尿外科樊彩斌等近日在预印本平台medRxiv上传的一篇
论文又提出了两个潜在目标：肾脏与睾丸。
鉴于一些抗病毒药物本身就具有一些肾毒性，加上病毒可能以肾脏为靶点，该团队建议
在新冠病人的临床治疗期间进行肾功能评估和特殊护理。
此外，医生应该注意到可能的睾丸组织风险，对年轻患者的生育能力进行适当的评估和
干预。
值得注意的是，发在预印本平台上的论文尚未经过同行评议，也未在正式期刊上发表。
论文摘要提到，一些研究表明有些新冠肺炎病人除呼吸系统损伤外，还出现了肾功能异
常甚至肾损伤，其背后的机理尚不明确。
该团队研究了三份既有的临床数据，分别包含6名、41名和99名患者。第一个样本是一
起家庭聚集性感染，其他两项数据集则显示，新冠病毒感染者中有3%至10%出现了肾功
能异常，表现为肌酐或尿素氮升高。此外，7%的患者出现了急性肾损伤。
那么，新冠病毒是否会影响泌尿和男性生殖系统呢？该研究团队使用... 阅读全帖 |
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w***b
发帖数: 86 | 31 外婆两个月前咳嗽就医，做了CT（有阴影）和PPD皮试（有鸡蛋大的包），被诊断为肺结核。吃了两个
月的抗菌药，再次照CT，阴影扩大。转到大城市专家门诊，专家说“不是肺结核，从图像看，是肺癌”要
求做血检，支气管电子镜，PET检查。
请问：
1.PPD皮试（有鸡蛋大的包）阳性，可以说明有active的结核菌，这个结论对吗？难道PPD也可能有假
阳性？
2.PET可以确诊有没有癌细胞，但不能确认小细胞癌或非小细胞癌，这个结论对吗？
叩谢大家 |
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c********e
发帖数: 496 | 32 1.PPD皮试（有鸡蛋大的包）阳性，可以说明有active的结核菌，这个结论对吗？难道
PPD也可能有假阳性？
PPD is just a screening test, a screening test means higher sensitivity,
with an acceptable specificity, which means there are many false positive
cases. That's why CXR is warranted to check the presence of active TB.
2.PET可以确诊有没有癌细胞，但不能确认小细胞癌或非小细胞癌，这个结论对吗？
there are two options,
either do bronchoscopy, biopsy or lavage, and get pathology report.
or PET first and then surgery, send the sample for a quick pathology report
during the operat |
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s********g
发帖数: 176 | 33 1 跟很多其他疫苗不同，注射卡介苗并不能防止你感染结核，只能减轻感染结核以后的
严重程度，这一点对小孩子尤其有意义
2 诊断结核目前还没有什么特异性很强的实验室检查，抽血查T细胞那个并没有多大的
帮助，很多阴性的，最后还是结核，阳性的也不代表你一定是结核
3 卡介苗注射后可以导致PPD结果阳性，但一般不会强阳性，不知道这个孩子的结果是
阳性还是强阳性 这个判断主要看手臂上的泡有多大，强阳性提示感染结核的可能性大
，但也只是可能性，因为没有症状，还需要医生进一步判断，比方说扩大检查范围，因
为结核并不只是肺结核，还有其他部位的结核感染，另外x光诊断效能偏弱，也可以考
虑肺CT，这里很考研医生的综合分析能力，很多人只是继续观察就好了，不过美国医生
这方面经验偏少，加上又是传染病 有点宁可错杀1000不能放过1个的意思
4 抗结核治疗没有那么恐怖 确实有一些人出现严重的肝功能异常，但是少部分，一般
问题不大，注意持续监测肝功能，如果不能耐受尽早停药换药
， |
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u*********6
发帖数: 119 | 34 ER，PR阳性或者阴性只是显示肿瘤细胞的一个特性，与人体细胞的正常还是非正常状态
无关。一般来说，如果癌细胞的雌，孕激素受体为阳性，在化疗上可以选择激素类药物
，对肿瘤有杀伤作用；如果这些受体为阴性，激素类药物作用不大。 |
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m******e
发帖数: 459 | 35 大牛没空，菜鸟来也。
免疫以后T细胞expansion/activation，细胞数增加到peak之后下降，你说的细胞数变
来变去是指这个吗？不知道你的具体实验条件和目的，你关心的是CD3阳性总细胞数，
还是CD4/CD8的细胞数？是transfer的OT-I/OT-II细胞吗？ |
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h****g
发帖数: 439 | 36 两组，研究某阳性区域占全部区域的百分比。 请问，%的值能不能做T test，如果可以
，用双尾还是单尾呢？
同样的还有，流失分析出来的，某阳性细胞数占全部细胞数的百分比，能不能用t test
, 单尾还是双尾？
谢谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 37 我们也有类似经历，不过幸运的是我们转进去的只是一个单独的GFP
reporter, 看不到就拉倒了，反正有其他方法来知道哪个是transgenic老鼠.
我们的感觉是很多转进了老鼠内部的基因会有可能被体内的机构关起来不让
表达，或者表达大大降低。
你的情况，最好是这样：
１。把组织提出来做western blot
2. 用anti-GFP 来加强荧光。
我们一向都用Roche mouse anti-GFP，他家的抗体stock solution稀释得比较高，所以
用的时候不能稀释太多(所以比较不经用），但是特异性比较高。
invitrogen) ，结果很失望，发现GFP表达弱，且阳性细胞少；同样的Cre line 和
ROSA26-YFP杂交后，同样的染色，YFP表达很强，阳性细胞很多。
lox |
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f***4
发帖数: 886 | 38 这个很正常的。
检查一下你的TARGET载体构建和ROSA-YFP是不是一样，就是说整合在ROSA的位点是不是
一样。
现在存在的ROSA-YFP要比ROSA-GFP表达强很多倍，解释的原因很多，很多人同意就是整
合的位点不一样。
invitrogen) ，结果很失望，发现GFP表达弱，且阳性细胞少；同样的Cre line 和
ROSA26-YFP杂交后，同样的染色，YFP表达很强，阳性细胞很多。
lox |
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n********k
发帖数: 2818 | 39 also fusion-GFP sucks most of time...
invitrogen) ，结果很失望，发现GFP表达弱，且阳性细胞少；同样的Cre line 和
ROSA26-YFP杂交后，同样的染色，YFP表达很强，阳性细胞很多。
lox |
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l*********i
发帖数: 332 | 40 how in vitro experiments are done exactly? details.
what kind of cell, what exactly construct have you used?
invitrogen) ，结果很失望，发现GFP表达弱，且阳性细胞少；同样的Cre line 和
ROSA26-YFP杂交后，同样的染色，YFP表达很强，阳性细胞很多。
lox |
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b******s
发帖数: 5365 | 41 恩，和好几个做了很多年flow的人讨论了一下，这其实并不少见。
主要是被我们实验室一个号称一直做cell death的德国博士后唬住了，那家伙意正严辞
地宣称不可能PI 进去了annexin V还染不上 ，让我这个刚开始做apoptosis的菜鸟迷惑
了一下。
我做flow的时候用了fluorence intensity thresh-hole, 用的gate也是离了一点距离
到原点，按理说应该把最小的碎片给排除了，这种PI单阳性的细胞是不是死亡的时候胞
膜出现了PI可以穿透而Annexin V不能进入的小孔？或者是Annexin V在细胞内和PS结合
不完全造成染色阴性？ |
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a******a
发帖数: 283 | 42 我做了一些，水解细胞，溶液直接加入pcr系统去。结果发现出现的都是假阳性信号。
当然我是读取taqman荧光信号来衡量pcr结果的，不是跑胶。
解释是，nucleases直接切掉probe上的fluorophores，所以出现的荧光信号都是假阳性。
那么对我来说，我这个系统（依靠读取荧光信号来判断pcr结果的）就最好先加tris
buffer和proteanse K来除掉nucleases，再水煮一下样品灭火protease K或者其他的酶
。之后加入PCR系统。
看看怎么样，这个方案可好？ |
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w*********n
发帖数: 439 | 43 本人在做新生小鼠心肌细胞的增殖.主要用BrdU标记然后用BD的FITC-BrdU的kit染色，
然后做FACS。
发现基本不work，没有BrdU阳性的心肌细胞。但是在荧光显微镜能看到BrdU染色的心肌
细胞，请问有没有大虾作类似的心肌细胞研究？
多谢， |
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n**********s
发帖数: 228 | 44 就是这个纠结啊，一开始看到结果，直接就想到是copy number 的原因， 但是我觉得
用上面那位同学的解释似乎更合理些，heterozygous的细胞，表达GFP那条allele是随
机的，因此GFP positive的细胞数目有个变化范围。
用copy number来解释，感觉不太有说服力，我觉得是不是平均单个细胞的GFP荧光强度
总体来说，homo比heterozygous平均强一些，用这个来解释更合理些？
是直接的显微镜下拍摄照片进行的荧光计数，设定个阈值，高于的就算阳性，因为这个
实验相当于验证这个敲入模型的准确性，所以才做的一个相当于“对照”性质的实验。 |
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e********t
发帖数: 1865 | 45 打过BCG疫苗大多皮试阳性，并不代表你有TB，是机体对疫苗的反应，有的人反应强，
一生都有记忆细胞在，有的人反应弱，过些年没了或不能探测，皮试会变阴性，很多其
他国家以前也打的，我就有一个墨西哥的，一个日本的同事因为疫苗皮试阳性，照X 光
没事一般不处理，但是美国这边不打疫苗，无知的医护也不少，才会让吃药。真想查就
验血，那个和疫苗无关。 |
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b***e
发帖数: 125 | 46 我们在小鼠里敲除一个基因后，做TUNNEL assay,发现retina的inner nuclear layer呈
阳性（上图箭头处），而control则是阴性（下图箭头处）。 但有个同事说是假阳性，
因为真正的阳性细胞应该看上去偏小，呈小点状，而且组织结构应该会mess up,但我这
个retina，看这结构还很完整，不像apoptosis.大家说呢？谢谢。 |
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s*******d
发帖数: 370 | 47 CD34+主要从cord blood或bone marrow分离得到， cord blood增殖快，分化也快，也
就是说CD34阳性细胞会迅速转化成阴性细胞，用标准培养体系培养一周后可以从90%降
到10-20%。 Bone marrow 稍微慢一点，买这个细胞一般很贵，自己分离的话其实也不
难，但是没有经验自己摸索可能得费些时间。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 48 你的目的基因6k，再加上efgp marker就要奔7k去了。
首先很难表达（也许可以表达）其次很难包装。
如果过表达以后对细胞生长有不利影响则很难拿到纯population。
我做过3.xk的基因+ires gfp感染mES细胞，阳性率只有2%。
facs能得到50%阳性细胞，养几代后二次facs时发现阳性率又掉到10%
折腾了几个月最后放弃了。
也许你可以考虑用bac的方法做过表达稳定株
你去看一下Kristian Helin的tet1文章。记得他稳转了全长6k多的TET1，
TET1很长，我们尝试了很久始终不能有效表达。
当时他来我们实验室转的时候问过他这个问题，好像他是用bac解决的，记不清了。 |
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r********r
发帖数: 1460 | 49 【 以下文字转载自 NextGeneration 讨论区 】
发信人: recrusader (:)), 信区: NextGeneration
标 题: 怀孕检查CMV virus是阳性
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Dec 3 14:33:04 2010, 美东)
好像一种叫细胞巨化病毒，网上查了一下，好像容易导致婴儿畸形，但是医生没有太看
重这个指标，有没有遇到这个情况，谢谢 |
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发帖数: 1 | 50 11日，身处舆论中心的河北科技大学副教授韩春雨再次接受科技日报采访，并对此作出
回应。对于13个科研人员实名公布无法重复实验，他依然认为细胞污染的可能性最大。
至于谁重复出了实验，他暂不方便透露。“请求大家再有一点耐心。我还是之前的说法
，很快将会有新的消息。”韩春雨说。
他表示，此前他也考虑过假阳性的可能，但目前来就他掌握的信息基本可以排除这种可
能。
他同时表示，科学是渐进的。“目前关于Ago的基础研究太少了，它是广泛存在于微生
物的一种防御机制，很多机制不明可能是重复性差的主要原因。中国科学界应该致力于
解决这些问题，使它变得更好，这是我特别想说明的。希望实名公布的科学家一起参与
解决这些问题。”他说。
对于有科学家建议他公开重复实验过程和数据的要求，他表示，愿意和前来沟通的科学
家交流。（科技日报石家庄10月11日电）记者 李艳 操秀英 |
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