b******s
发帖数: 5365 | 1 接触凋亡不久，做Annexin V-PI staining 看到有Annexin V-PI+的细胞群。按理说
PI阳性的细胞胞膜一定不完整，Annexin V也会结合上去的啊，是什么导致这样的细胞
群？
我想来想去觉得可能是debris，但问题是我看的结果是凋亡而不是活细胞，这种情况下
gate( flow cytometry)基本上设了thresh hole后绝大多数events都要收集的，是不是
这样造就了这么一群“细胞”？哪位比较熟悉flow 和apoptosis的牛人请指点以下，谢
谢！ |
i*******n
发帖数: 48 | 2 some stage of necrosis show Annexin V-PI+ staining
Annexin V 是35KD的蛋白
PI是小分子染料
他们对于膜的通透性的要求是不一样的
【在 b******s 的大作中提到】
: 接触凋亡不久，做Annexin V-PI staining 看到有Annexin V-PI+的细胞群。按理说
: PI阳性的细胞胞膜一定不完整，Annexin V也会结合上去的啊，是什么导致这样的细胞
: 群？
: 我想来想去觉得可能是debris，但问题是我看的结果是凋亡而不是活细胞，这种情况下
: gate( flow cytometry)基本上设了thresh hole后绝大多数events都要收集的，是不是
: 这样造就了这么一群“细胞”？哪位比较熟悉flow 和apoptosis的牛人请指点以下，谢
: 谢！
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b******s
发帖数: 5365 | 3 恩，和好几个做了很多年flow的人讨论了一下，这其实并不少见。
主要是被我们实验室一个号称一直做cell death的德国博士后唬住了，那家伙意正严辞
地宣称不可能PI 进去了annexin V还染不上 ，让我这个刚开始做apoptosis的菜鸟迷惑
了一下。
我做flow的时候用了fluorence intensity thresh-hole, 用的gate也是离了一点距离
到原点，按理说应该把最小的碎片给排除了，这种PI单阳性的细胞是不是死亡的时候胞
膜出现了PI可以穿透而Annexin V不能进入的小孔？或者是Annexin V在细胞内和PS结合
不完全造成染色阴性？
【在 i*******n 的大作中提到】
: some stage of necrosis show Annexin V-PI+ staining
: Annexin V 是35KD的蛋白
: PI是小分子染料
: 他们对于膜的通透性的要求是不一样的
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s*****g
发帖数: 7857 | 4 PI+ ANN V-
也有可能是ANN V 抗体(连FIC)的不work了(时间长了,污染了...).(我就遇见过)
当然,如果apoptosis多,也有可能少量的PI+ ANN V-
建议用新KIT再做一次.
【在 b******s 的大作中提到】
: 恩，和好几个做了很多年flow的人讨论了一下，这其实并不少见。
: 主要是被我们实验室一个号称一直做cell death的德国博士后唬住了，那家伙意正严辞
: 地宣称不可能PI 进去了annexin V还染不上 ，让我这个刚开始做apoptosis的菜鸟迷惑
: 了一下。
: 我做flow的时候用了fluorence intensity thresh-hole, 用的gate也是离了一点距离
: 到原点，按理说应该把最小的碎片给排除了，这种PI单阳性的细胞是不是死亡的时候胞
: 膜出现了PI可以穿透而Annexin V不能进入的小孔？或者是Annexin V在细胞内和PS结合
: 不完全造成染色阴性？
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t*****P
发帖数: 36 | 5 很多ANX V-FITC试剂盒效率很低
可以考虑ANX V-EGFP |
