S******9
发帖数: 2837 | 1 诱导完内皮特异性的小鼠，准备做原代脑皮质内皮细胞培养证实，有没有做过的前辈可
以分享一下？
先谢谢 |
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S******9
发帖数: 2837 | 2 谢谢，没找到链接？找到是人的脑皮质内皮细胞培养的 |
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a******a
发帖数: 283 | 3 你们一般用来养原代细胞的培养器皿是什么牌子的？容易贴壁吗？ |
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d*******w
发帖数: 45 | 4 刚开始养一种需要在collage-coated的petri-dish上生长的细胞,trypsin之后,细胞变
圆,可是不论怎么冲洗,就是掉不下来,这种情况怎么办啊?现在暂时用刮下来的方法,感
觉效果不时很好. |
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s*****3
发帖数: 41 | 5 最近在用293T表达外源蛋白,然后用抗体检测蛋白表达水平。 不知道为什么细胞的
viability非常低，我用7-AAD 染色，viability只有50%。请教实验室前辈这可能是什
么原因导致的呢？
我通常 seed 293T cells the day before transfection at the density of 0.5
million/well (6-well plate).
In the afternoon next day transfect 293T cells with plasmids using FugeneHD.
About 36 hours later, detach cells with trypsin and then stain with the
primary antibody on ice for 30 minutes and then incubate with PE-conjugated
secondary antibodies on ice for 30 minutes. FACS analysis is done
immediate... 阅读全帖 |
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d***y
发帖数: 8107 | 6 有钱又愿意花钱，实验室又有多余的地方，建个细胞培养间不是问题；找个有细胞生物
学背景的博后就行 |
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I***W
发帖数: 218 | 7 一直都是做低等真菌和细菌，没有做过人类细胞。但现在课题需要做一些人基因检测和
蛋白在不同cell line里表达的实验。
具体课题是这样的，有一个感兴趣的人类基因，现在想了解一下它在不同细胞系可能的
表达情况。有一些问题，
1. 现在人类基因组有多少不同的版本？有不同人种的基因组吗？比如黄种人，白人和
黑人？
2. 由于实验室没有细胞培养的条件，想直接购买一些样品，比如tissues，cells，
cell lysates和total RNA，哪个公司比较好？我看到ScienCell，IMGENEX和Asterand
有，但是不知道哪个比较好？有没有同修用过？
3. 有没有比较好做多抗公司可以推荐？
4. 如果做western的话，选择哪些proteins做controls比较好？
5. 如果想验证transcription，用Northern，microarry还是realtime PCR好？
新人虚心求教，望各位大牛不吝赐教！
万分感谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 8
一直都是做低等真菌和细菌，没有做过人类细胞。但现在课题需要做一些人基因检测和
蛋白在不同cell line里表达的实验。
具体课题是这样的，有一个感兴趣的人类基因，现在想了解一下它在不同细胞系可能的
表达情况。有一些问题，
1. 现在人类基因组有多少不同的版本？有不同人种的基因组吗？比如黄种人，白人和
黑人？
2. 由于实验室没有细胞培养的条件，想直接购买一些样品，比如tissues，cells，
cell lysates和total RNA，哪个公司比较好？我看到ScienCell，IMGENEX和Asterand
有，但是不知道哪个比较好？有没有同修用过？
都差不多。谁便宜买谁的
3. 有没有比较好做多抗公司可以推荐？
4. 如果做western的话，选择哪些proteins做controls比较好？
actin, tubulin
5. 如果想验证transcription，用Northern，microarry还是realtime PCR好？
少量基因用northen or realtime PCR,
大量基因用microarray
新人虚心求教，望各位大牛不吝赐教！
万分感谢... 阅读全帖 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 9 BD 的这个70um很好用，
一次性，用完就扔了，没有准备和清洁的麻烦。
细胞要消化到1-2cell，才可以轻松滤过，5-10个细胞团 就会阻塞得很厉害 |
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m*******e
发帖数: 90 | 10 在细胞培养间用，看看细胞状态什么的就可以了。
一定要倒置相差显微镜么？
普通的正置光学显微镜看得清吗？
Thanks |
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m*******e
发帖数: 90 | 11 如果用普通显微镜观察细胞培养瓶里的细胞会怎样？
是会完全看不清吗？
非常感谢。 |
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m*******e
发帖数: 90 | 12 在细胞培养间用，看看细胞状态什么的就可以了。
一定要倒置相差显微镜么？
普通的正置光学显微镜看得清吗？
Thanks |
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m*******e
发帖数: 90 | 13 如果用普通显微镜观察细胞培养瓶里的细胞会怎样？
是会完全看不清吗？
非常感谢。 |
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s********x
发帖数: 472 | 14 大部分影响细胞生长的gene都会这样，细胞变weak了，常常是某个growth factor
pathway 坏掉。
当然也许有未知的神奇机制。 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 15 用collagen IV and febronectin coat plate，大家都提前coat, dry 了再铺细胞么？
我上次这么做结果plate的周边细胞长得不好。 |
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v********a
发帖数: 646 | 16 请问大家都是怎样从96孔～12孔板上收获细胞，用来裂解做WB?
不考虑靶蛋白的丰度，一般24孔板用多少微升裂解液裂解，并从中取多少跑SDS-PAGE?
Thanks. |
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a******r
发帖数: 786 | 17 我觉得细胞量可能不够做wb
我用那种大dish的也就做个五六次次吧 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 18 6-wellplate， 0.2 m 细胞，一般我用80 ul， 最后能有300 ug totalprotein， 大约
是15次wb。 |
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W****7
发帖数: 426 | 20 我觉得是分化的脂肪细胞。应该没问题，你染色的protocol很成熟？我一般固定一下，
65度染色15分的。最好能说说你的实验细节。 |
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y****i
发帖数: 2194 | 21 我可以负责任的告诉你 不知道这个是什么囊泡但肯定不是lipid droplet
这囊泡往往是你过分stress 细胞之后出现的
比如加病毒浓度太大，加药太猛之类的
10天够长了 你这个照片看起来就是没有分化
你还不确信的话可以测AP2 或者adiposin, adiponectin, 的mRNA或者蛋白 |
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K**********e
发帖数: 188 | 22 讲各种规格的培养皿有多少面积，一般用多少培养基，长满了一般有多少细胞……等等。
以前用过，很好！
现在找不到了。记得他们家网页上有的。
谁知道吗？谢谢！ |
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l*****o
发帖数: 6 | 23 把细胞培养在P75瓶子，大约20％－30％满得时候（取决于细胞系种类），给P75瓶子灌
满培养液, parafilm封好瓶子口，然后用胶带固定好放在泡沫塑料保护的fedex盒子里；
注意1）计算好时间，北美周一／二发出，保证国内周五前受到；
2）国内通关手续应该事先办理好。
good luck! |
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o**d
发帖数: 3080 | 24 换别的293T来试试，貌似你的这一株细胞有问题。 |
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b*********g
发帖数: 19 | 25 谢谢回答，可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?
我自己空想，也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。 |
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b*********g
发帖数: 19 | 26 谢谢回答，可是培养箱中的CO2是5%啊,它的作用不就是维持培养基的酸性吗?
我自己空想，也觉得应该是无氧条件对细胞造成的伤害。 |
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c****t
发帖数: 76 | 27 Warburg effect?肿瘤细胞的能量来源主要是无氧糖酵解而不是氧化磷酸化. |
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s*********t
发帖数: 600 | 28 怎么做到避免感染？
一直加预防支原体的抗生素，就像细胞培养基始终要加PEN-STREP双抗一样，可以吗？ |
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F*Q
发帖数: 3259 | 29 细胞培养在substrate上向周边生长并扩张（当然也向上也生长），在周边的生长区域
是否有一个专用名词？比如说growing zone/area 什么的？ 多谢！ |
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w***a
发帖数: 133 | 30 hepg2就是随便养养都不会死的
原代细胞要养也不困难 就是体力活
不能用普通的加血清medium 要配一打东西混合的cocktail来养
如果不用类似于myc之类的东西让他永生，他是只会死不会分裂的 |
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J******9
发帖数: 736 | 31 谢谢，不知道这个可否重复使用？做原代细胞用。。。我在国内都是用的不锈钢滤网 |
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r**********g
发帖数: 15 | 32
我把细胞消化的挺好， 但就是做不成细胞株， 最多道6－7代就死了， 有什么诀窍吗
？ 谢谢 |
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J******9
发帖数: 736 | 33 thanks, BUT how to tell 细胞要消化到1-2 cell ? to get single cell solution |
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O******e
发帖数: 4845 | 34 不要去片面追求消化彻底。时间过长只会对细胞造成不必要的伤害。 |
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s********x
发帖数: 472 | 35 我个人倾向于crispr ， 速度比talen快很多 ， 不用合成那些dna repeats。
说到突变，细胞培养的突变恐怕更多，而且也没有那么巧就影响实验。
我做遗传，用enu ems 化学诱变 背景突变不知道多少，还不是一样分析。 |
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v***a
发帖数: 1242 | 36 我用过fibronectin，跟据说明做的：
coat了干一个小时，然后用水冲洗一下，马上养细胞。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 37 感谢两位！如果用杂交瘤细胞接种小鼠生产腹水是不是抗体浓度会更高？纯化起来是不
是更方便？ |
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D***a
发帖数: 516 | 38 腹水抗体浓度高，但你想过老鼠的感受吗？你就做点western，细胞上清足够你用了。 |
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d***s
发帖数: 1062 | 40 t细胞3天以后要expand换plate，我们用的是plate bound的抗体，所以3天以后就没有
anti-CD3了 |
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d***s
发帖数: 1062 | 41
太感谢了。一直有这个问题，养T细胞为什么medium里要加2-me。 |
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s********n
发帖数: 248 | 42 没加beta ME吧，另外fbs得用好点的细胞才长的好 |
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m******o
发帖数: 8504 | 43 看上去我曾经碰上过这样的污染。不过我当时是全扔了，没考虑怎么去折腾着弄死他，
我们实验室另外一个博后，倒是折腾了很久，因为他有一些KO的细胞，结果没用，最终
选择重新弄新的KO |
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h***e
发帖数: 7320 | 44 看到这东西尽量赶快收细胞，还能有点valid的数据，晚了连数据都不可靠了 |
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b***g
发帖数: 516 | 45 细胞系HT1080培养的时候用的，请指教，谢谢！ |
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t*****a
发帖数: 308 | 46
用ultra low igg的血清培养杂交瘤
Protein a/g的spharose. |
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发帖数: 1 | 47 狂犬病毒分四代：第四代转基因狂犬比疫苗最安全，保护率最高。
1. 脑组织疫苗
1.1兔脑组织疫苗 1885年，巴斯德首次用兔脑脊髓制备成狂犬病弱毒苗，并应用于一个
被疯狗咬伤14处的9岁男孩治疗，并取得成功。
1.2 羊脑组织疫苗 1911年，Semple将羊脑组织悬液于37℃，经0.5%~1%酚固定，β-丙
内酯灭活后，制备了Semple疫苗。1925年，Hempt通过补加乙醚处理，进一步保证了
Semple疫苗的无毒性。
新生鼠脑疫苗 1955年，Fuenjalidat和Palacios将狂犬病毒脑内接种3~5
日龄新生鼠制备了新生鼠脑疫苗，过去40多年中，南美洲广泛应用此疫苗。
脑组织疫苗注射次数多，剂量大，抗体产生慢，抗体水平低，含有神经麻痹因子，易引
发变态反应，WHO提出尽快停止使用该疫苗。
2. 禽胚疫苗 1955年Peck制备了鸭胚疫苗，1959年，Powell和Cubertson改进其生
产工艺，制备的疫苗中含有10%经β-丙内酯灭活的鸭胚组织悬液。禽胚疫苗抗体效价低
，但引起变态反应的可能心血来潮小。目前在亚洲、非洲、南美... 阅读全帖 |
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w*******e
发帖数: 15912 | 48 https://www.douban.com/group/topic/84864760/?author=1
这块肉的主体不是在草场上长大的，不会叫，也不会跑，它是在容器中，靠“吃”营养
液长大的，但它确实像一块真正的肉。在未来10年内，你很有可能吃到这样的肉。这件
事听上去有点超现实，但它却是一些企业投下大钱，一批科学家殚精竭虑想要实现的目
标。为什么要这么努力地做这种“反自然”的事呢？
历史――丘吉尔和NASA是先驱
“人造肉”的历史不长。第一个提出这个概念的是科幻作家拉斯维兹。在他的小说
《双星记》中，“合成肉”是火星人引入地球的合成食品之一。更进一步的概念，则是
丘吉尔在20世纪30年代提出的。他曾经说过：“再过50年，我们就不用再做‘为了吃个
鸡胸、鸡翅，就把整只鸡养起来’这种荒唐事了。我们可以在合适的介质里分别培养它
们。”
科学家们真正开始认真对待“人造肉”这个想法还是在干细胞培养技术产生之后。
最早想要用这种方法生产食用肉的是NASA（美国国家航空航天局）。他们有非常实用的
考虑：未来的太空旅行可能要用好几年的时间，如何解决宇航员的吃肉问题呢？在空间
有限的飞行器里养猪肯... 阅读全帖 |
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w*****d
发帖数: 57 | 49 http://china.caixin.com/2016-03-03/100915256.html
继鲁白打破沉默，直指张生家夺占其研究课题之后，张生家也投文财新网，坚称磁遗传
学是其研究组的成果。北大、清华校方至今未公布学术调查结果
【编者按】五个月前的一篇有关磁遗传学的论文，引发中国两所顶尖大学清华和北大的
三位研究人员间的论战。两方阵营一方指对方“抢发论文”“夺占课题”，另一方回应
对方“抢夺成果”。遗憾的是，北大、清华校方在进行学术调查后，至今未公布学术调
查结论。
2015年9月15日，中国科学院主办双周刊《科学通报》英文版发表了一篇关于动物磁感
应受体蛋白方面的论文，通讯作者为北京大学-清华大学生命科学联合中心学术带头人
张生家。然而，这篇论文的刊发引发了巨大争议。
北京大学生命科学学院学者谢灿认为，张生家违背了学术道德，在谢灿发现磁感应
蛋白（MagR）的原始论文尚未发表之时，用从谢灿处获得的MagR，未经同意私自“抢发
”了有关MagR应用的论文，并未给自己以合理的作者署名。
10月16日，清华停止了张生家入职的手续办理。张生家表示，没有调查结论就解聘
对他来说是不公正... 阅读全帖 |
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w*****d
发帖数: 57 | 50 http://china.caixin.com/2016-03-03/100915256.html
继鲁白打破沉默，直指张生家夺占其研究课题之后，张生家也投文财新网，坚称磁遗传
学是其研究组的成果。北大、清华校方至今未公布学术调查结果
【编者按】五个月前的一篇有关磁遗传学的论文，引发中国两所顶尖大学清华和北大的
三位研究人员间的论战。两方阵营一方指对方“抢发论文”“夺占课题”，另一方回应
对方“抢夺成果”。遗憾的是，北大、清华校方在进行学术调查后，至今未公布学术调
查结论。
2015年9月15日，中国科学院主办双周刊《科学通报》英文版发表了一篇关于动物磁感
应受体蛋白方面的论文，通讯作者为北京大学-清华大学生命科学联合中心学术带头人
张生家。然而，这篇论文的刊发引发了巨大争议。
北京大学生命科学学院学者谢灿认为，张生家违背了学术道德，在谢灿发现磁感应
蛋白（MagR）的原始论文尚未发表之时，用从谢灿处获得的MagR，未经同意私自“抢发
”了有关MagR应用的论文，并未给自己以合理的作者署名。
10月16日，清华停止了张生家入职的手续办理。张生家表示，没有调查结论就解聘
对他来说是不公正... 阅读全帖 |
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