r***l
发帖数: 593 | 1 板上有养小鼠T细胞的大虾吗？
自己从小鼠脾脏分离的T细胞，用RPMI+10%FBS+100IU/ml IL2培养，最开始用cd3/28
beads active过，总是养几天之后越来越少，最后大部分都死光了！
哪位大虾有经验能给讲讲吗？多谢多谢！ |
d***s
发帖数: 1062 | 2 t细胞3天以后要expand换plate，我们用的是plate bound的抗体，所以3天以后就没有
anti-CD3了 |
r***l
发帖数: 593 | 3 不好意思，我没有太看懂。
你是说你是用含有cd3的plate培养t细胞，每三天换一次新的plate是吗？
我是用cd3的beads培养的，应该也可以吧！
我只是不知道为什么会死
【在 d***s 的大作中提到】
: t细胞3天以后要expand换plate，我们用的是plate bound的抗体，所以3天以后就没有
: anti-CD3了
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m*****u
发帖数: 15526 | 4 细胞密度是多少？naive T细胞培养必须维持高密度。太低就会死。
【在 r***l 的大作中提到】
: 板上有养小鼠T细胞的大虾吗？
: 自己从小鼠脾脏分离的T细胞，用RPMI+10%FBS+100IU/ml IL2培养，最开始用cd3/28
: beads active过，总是养几天之后越来越少，最后大部分都死光了！
: 哪位大虾有经验能给讲讲吗？多谢多谢！
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r***l
发帖数: 593 | 5 一般1-2million/ml
【在 m*****u 的大作中提到】
: 细胞密度是多少？naive T细胞培养必须维持高密度。太低就会死。
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d***s
发帖数: 1062 | 6 这里有个protocol
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rja&uact
=8&ved=0ahUKEwisk66luqDKAhXCcz4KHTo1BREQFggjMAE&url=https%3A%2F%2Fwww.
miltenyibiotec.com%2F~%2Fmedia%2FImages%2FProducts%2FImport%2F0001700%
2FIM0001732.ashx%3Fforce%3D1&usg=AFQjCNGxOYzu-FibwCkj4r0ffpR1XkHtog&sig2=
0QDlDda_LvxB7tCvLLyJIg |
q**s
发帖数: 285 | 7 try add 2-mercaptoethanol in medium if you didnot add
The role of 2-mercaptoethanol in the stimulation of spleen cell cultures:
increased uptake of cystine into the TCA-soluble pool
Immunol Lett. 1982 Apr;4(4):193-7. |
d***s
发帖数: 1062 | 8
太感谢了。一直有这个问题，养T细胞为什么medium里要加2-me。
【在 q**s 的大作中提到】
: try add 2-mercaptoethanol in medium if you didnot add
: The role of 2-mercaptoethanol in the stimulation of spleen cell cultures:
: increased uptake of cystine into the TCA-soluble pool
: Immunol Lett. 1982 Apr;4(4):193-7.
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r***l
发帖数: 593 | 9 谢谢大家的回复！
也很好奇这个2-me.
【在 q**s 的大作中提到】
: try add 2-mercaptoethanol in medium if you didnot add
: The role of 2-mercaptoethanol in the stimulation of spleen cell cultures:
: increased uptake of cystine into the TCA-soluble pool
: Immunol Lett. 1982 Apr;4(4):193-7.
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s********n
发帖数: 248 | 10 没加beta ME吧，另外fbs得用好点的细胞才长的好 |
