w*********g
发帖数: 30882 | 1 外国专家首次用皮肤细胞培养出人类精卵细胞 “人造人”更进一步？
发表时间：2014-12-26 11:33:19
字号：A-AA+
关键字: 皮肤细胞人造人人类精卵细胞人造精子培养人造精子人造卵子合成精子不孕不
育人造精子
让皮肤细胞变身精子卵子，你会想到什么？据美国媒体报道，12月24日出版的学术杂志
《细胞》上发表学术论文称，英国剑桥和以色列团队合作率先实现完全体外培养出成熟
精子和卵子细胞。研究人员不仅首次将皮肤细胞完全在体外诱导成为诱导干细胞，并使
其分化成人类原始生殖细胞，同时发现了体外培养诱导的关键基因SOX17基因。
这一发现意味着，人类距离“人造人”仅一步之遥，因为此前科学家仅在老鼠干细胞上
做过试验，人类细胞体外培养尝试的成功率极低。不过，这一尖端技术虽有助于造福不
孕不育家庭，但受制于道德和法律方面的隐忧，研究略有停滞。另外，如果这一方法确
实有效，可能会引发一些麻烦，如不知情的情况下，某个男性或女性的皮肤细胞可能会
被合成精子或卵细胞，出现在黑市上……
人类皮肤细胞可制造精子和卵细胞 “人造人”更进一步？
人工培育生殖细胞
据报道，英国剑桥大学和以色列魏茨曼... 阅读全帖 |
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e********r
发帖数: 353 | 2 美国公司寻找中国大陆抗体，蛋白质合成，细胞培养等供货方。
1，抗体。有定制特殊抗体合成的能力，我们可无偿提供技术帮助。
2，蛋白质合成（大分子药物）和纯化。我们可提供表达质粒和技术帮助。
3，特殊手术器械（不锈钢和其它特种钢）的制造。我们提供图纸和技术要求。
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股东）。 更多具体要求，站内联系并请提供国内公司的联系办法。能提供网站最好。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 3 细胞培养小白，想看点比较基础的书补一下知识，求推荐点书/资源？比如分化细胞和
干细胞，胚胎细胞的不同点啊，针对不同点需要加什么样的培养基啊什么的。能介绍各
种成分的作用和对细胞影响的最好，不是照着做protocol大全。
多谢~ |
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e********r
发帖数: 353 | 4 美国公司寻找中国大陆抗体，蛋白质合成，细胞培养等供货方。
1，抗体。有定制特殊抗体合成的能力，
2，蛋白质合成（大分子药物）和纯化，
3，特殊手术器械（不锈钢和其它特种钢）的制造。
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可美元或人民币支付，也可考虑给于少量知识产权。 具体站内联系。 |
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b*********g
发帖数: 19 | 5 如果拧紧细胞培养瓶瓶盖，不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours，这种状态给
细胞造成的是哪种stress？？
缺氧？
积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)
细胞自己代谢过程中产生的有害气体？ |
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b*********g
发帖数: 19 | 6 如果拧紧细胞培养瓶瓶盖，不让里面空气与培养箱中的空气交换24 hours，这种状态给
细胞造成的是哪种stress？？
缺氧？
积聚的碱性pH? (因为二氧化碳进不去)
细胞自己代谢过程中产生的有害气体？ |
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q**********0
发帖数: 335 | 7 用于细胞培养的incubator可以用来作细菌培养吗？谢谢！ |
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d****i
发帖数: 2346 | 8 打算去买一个杂交瘤细胞收集上清然后纯化抗体做western。
请教几个问题，请内行指点一下。
1. 杂交瘤细胞培养的时候需要血清，也含有IgG，纯化的时候会造成干扰，怎么排除这
个干扰？
2. 哪家公司的kit好用一些？
谢谢！ |
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m*****u
发帖数: 15526 | 9 细胞密度是多少？naive T细胞培养必须维持高密度。太低就会死。 |
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b******k
发帖数: 1874 | 10 各位细胞培养的时候有过图片中的真菌（？）污染吗？就是那些黑球，像厨房用的钢丝
球的样子。
用什么抗菌素可以清除掉呢？
我现在的这些细胞比较宝贵，不能够扔掉重来。谢谢先了 ：）
该死，图片贴不上来;
--下一个帖子链接里的照片中的钢丝球或者葡萄，很像我的污染物。 |
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e******n
发帖数: 193 | 11 如果你做细胞培养，pm我下把，
可能可以多点零花钱
谢谢 |
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J******9
发帖数: 736 | 15 需要做原代细胞培养，其中组织消化之后，过200目（75um）筛网，然后收集过滤液离
心。
请问：BD cell strainer, which one will be fine, 70 or 100 um ? |
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W*T
发帖数: 241 | 16 准备做小鼠的脑皮质原代内皮细胞培养，不知道要如何进行？
有没有做过的前辈或者所在的实验室做这个的，能否分享一下protocol？
感谢 |
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h******y
发帖数: 351 | 18 Corning把BD的细胞培养产品都买了。两家变一家了。 |
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发帖数: 1 | 19 我有一个实验室用的细胞培养相关试剂，想批量生产销售，想知道下如何工业批量生产
和包装？或者哪个公司外包生产？群里有哪位老师和专业人士可以指导一下，非常感谢！ |
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a***s
发帖数: 21 | 20 如下是产品介绍，请版上高人看看是否可靠。谢谢！
http://www.chinagene.com/healthmore.asp?cpfl=1010&id=183
依托“家蚕生物反应器”技术研发的“美基美态”是利用人类基因在体外截取，与
家蚕杆状病毒进行重组，使人类基因保留自己的生理功能和活性，然后在中试实验室复
制成母液，接种于“家蚕生物反应器”中转录培养，运用先进的生物技术进行包裹制成
的口服生物制剂，可补充人体免疫系统所需的“粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子”，全
面恢复人体免疫力！
通过“家蚕生物反应器”技术生产的高科技生物制剂“美基美态”掌握了当今生
物科技的核心技术，是中华民族的骄傲。
“美基美态”胶囊富含“粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子”，抗菌肽和溶菌酶等
活力DNA成分及天然活性蛋白，因含有人类基因片段，可直接被人体吸收利用，能迅速
激活人体免疫系统，修复人体受损细胞，延缓机体衰老。
【规格】200mg/粒x45粒/瓶x2瓶/盒
【食用量及食用方法】每日3次，每次1粒
【美基美态】独有的四大作用
（一）免疫系统发动机，壮... 阅读全帖 |
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s****y
发帖数: 89 | 21 我用B16F10细胞来做美白的实验。大概就是b16f10细胞培养一段时间会变黑，期间我加
某种药物，看细胞是否会变白。
我现在有个一直解决不了的问题，我用10%FBS DMEM培养细胞，我发现一旦培养基颜色
变黑后24小时内所有细胞都会逐渐悬浮到培养基里（我认为就是死亡了）。悬浮的细胞
我收集起来，离心一下，会发现这些细胞颜色都变黑了，而还没悬浮起来的细胞（也就
是在培养皿底部正常生长的细胞）颜色却是接近淡黄色的。
我的主要目的和想要的结果是培养基颜色变黑后，细胞不会逐渐死亡，且关键一点是把
细胞从培养皿底部弄下来后颜色要是黑色的。因为我得用黑色的细胞做为对照组之类的
，但是不可能用悬浮的死了的细胞做实验。
有没有可能？应该怎么办呢？3,4 个月了都没解决 |
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j****x
发帖数: 1704 | 22 关于这个问题，刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较，“结论”是和缺氧无关
当时的培养瓶盖还是老式的，不带filter需要自己拧开一个角度的那种，同时养的三种
细胞293/Huh7/Hela，用的invitrogen的普通DMEM培养基，不含hepes。有一次传细胞的
时候没留神盖子全部拧紧，结果第二天发现所有培养基全部变碱，293/Huh7贴壁出现严
重问题，漂浮大量“死细胞”，活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题，一切正
常。拧开瓶盖之后不到24小时，多数“死细胞”重新贴壁，细胞形态恢复正常，培养基
颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧，继续培养差不多48小时，所有细胞生
长一切如常，这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸，即便拧紧瓶盖，培养基也不
会变碱的过分。
我的“结论”是，某些细胞（293/Huh7）对培养基pH比较敏感，尤其是在悬浮后等待贴
壁的时候，而有些糙的比如Hela就不敏感，而缺不缺氧，大部分细胞不在乎，尤其是在
短时间内 |
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s*******1
发帖数: 18 | 23 分子生物学项目经理
岗位职责：
1.负责与国外客户沟通，为国外客户提供分子生物相关产品和服务的售前售后技术支持
工作，维护客户关系；
2.负责分子生物相关产品和服务的市场调研工作，与国内外优质厂商洽谈OEM合作，采
集整理产品和服务的相关信息；
3.制定工作计划，定期进行工作总结；
4.高效完成上级领导交待的其它工作任务；
职位要求：
1.分子生物学，细胞生物学，生物化学，免疫学，微生物学，医学等相关专业，硕士及
以上学历；
2.具有实验室项目研究经验，熟练掌握分子生物学实验技术及理论知识；
3. 英语六级水平以上，能够熟练进行英语交流和报告写作，能以英语作为工作语言与
国外客户进行无障碍交流，熟练掌握Office 2010办公软件；
4. 较强的事业心及责任心，能够在快节奏的环境中工作，吃苦耐劳，有较强的承担压
力能力。
细胞生物学项目经理
岗位职责：
1. 负责公司细胞生物学方面的产品及服务项目的运作及管理；
2. 熟知公司产品应用，为客户提供产品信息及应用咨询；
3. 落实项目的进度目标，保证项目的正常实施，优质高效地完成项目任务；
4. 做好项目的基础管理工作，保存各种文件... 阅读全帖 |
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i***s
发帖数: 39120 | 24 美国研究人员说，已经在利用皮肤细胞“制造”精子的研究中取得初步成功，完成关键步骤。受不育问题困扰的男士有望在几年内通过这种新型人工干预手段实现为人父的梦想。
相关研究报告由《细胞报告》月刊发表。
击破关键
新华网报道，美国匹兹堡大学医学院詹姆斯·伊斯利博士带领研究小组，用多种化学品混合物“回拨”皮肤细胞的生物钟，把它们变成功能与胚胎干细胞类似的细胞，接着使用营养物质培养成圆形细胞。
伊斯利说，这是用皮肤细胞“制造”精子过程中最困难的一步。先前，已经有研究人员成功地用胚胎干细胞“造”出精子。这些研究结果可以为伊斯利博士团队接下来的研究提供借鉴，也就是说，他们距成功可能只有几步之遥。
伊斯利博士团队使用的皮肤细胞全部来自男性。他们也曾经尝试使用女性皮肤细胞，但没有成功。
伦理之争
今年早些时候，以色列与德国研究人员在实验室中利用老鼠生殖细胞“造”出精子。与用老鼠生殖细胞或胚胎干细胞相比，用男性皮肤细胞制造精子有无可比拟的优势。
老鼠生殖细胞来自老鼠，胚胎干细胞通常来自胚胎，与之相比，利用皮肤细胞培养精子在伦理上更容易为人接受。因为这种细胞可以从想圆“父亲梦”的成年男性身上采集，由它“制造”... 阅读全帖 |
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w***b
发帖数: 89 | 25 基因敲除后的细胞在低密度 （5x10^4/6 well plate）培养下 细胞生长出现问题 远远
不如野生型细胞生长得好 而细胞在高密度 (1.5x10^5/ 6 well plate)培养条件下，两
株细胞没有明显的差别。
对于其中可能的原因，请问大家有啥建议， 非常感谢。 |
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t******y
发帖数: 716 | 26 有时候细胞培养就是一团浆糊。
按理说人体绝大部分细胞都是终末分化细胞，而这些细胞基本上丧失了分裂能力。
但是我们用来研究的培养细胞都是有分化能力的细胞，而且大部分还是肿瘤细胞。
我们基于这些细胞的研究，很多表面上已经了解透彻的调控途径，实际上距离体细胞的
真实情况水分很大。 |
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m*********7
发帖数: 5207 | 27 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: mitbbs2715 (好吃不懒做), 信区: WaterWorld
标 题: iPS细胞可再生人类肝脏
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 11 06:47:17 2012, 美东)
日本横滨市立大学研究人员日前宣布，他们利用能发育成各种组织和脏器的诱导多功能
干细胞（iPS），在小鼠体内培育出了体积小但能正常发挥功能的人类肝脏。这一成果
有望用来为肝功能不全的患者培育供移植的脏器以及开发新的治疗药物。
横滨市立大学教授谷口英树带领的研究小组利用人类iPS细胞培育出即将发育为肝细胞
的肝前体细胞，然后在其中加入生成血管和组织所必需的血管内皮细胞和间充质细胞。
再经过数天培养后，研究人员将生成的直径约5毫米的组织移植到小鼠头部。
数天后，移植到小鼠体内的组织内部出现了血管网络，两个月之后，开始合成人类特有
的蛋白质并能发挥分解毒素的功能。研究人员确认，该组织已具备与肝脏类似的功能。
此前虽有研究人员利用人类iPS细胞培育出肝细胞，但是培育拥有复杂立体结构的脏器
非常困难。谷口英树表示，这是首次用iPS细胞培养... 阅读全帖 |
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C**1
发帖数: 57 | 28 需要培养肠道细胞测试病原侵染后细胞的免疫反应。想知道用哪种细胞比较合适？
Caco－2 细胞可以吗？哪位大侠有相关培养经验可以分享吗？第一次做，恳求帮助。谢
谢！ |
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m********5
发帖数: 17667 | 29 日本横滨市立大学研究人员日前宣布，他们利用能发育成各种组织和脏器的诱导多功能
干细胞（iPS），在小鼠体内培育出了体积小但能正常发挥功能的人类肝脏。这一成果
有望用来为肝功能不全的患者培育供移植的脏器以及开发新的治疗药物。
横滨市立大学教授谷口英树带领的研究小组利用人类iPS细胞培育出即将发育为肝细胞
的肝前体细胞，然后在其中加入生成血管和组织所必需的血管内皮细胞和间充质细胞。
再经过数天培养后，研究人员将生成的直径约5毫米的组织移植到小鼠头部。
数天后，移植到小鼠体内的组织内部出现了血管网络，两个月之后，开始合成人类特有
的蛋白质并能发挥分解毒素的功能。研究人员确认，该组织已具备与肝脏类似的功能。
此前虽有研究人员利用人类iPS细胞培育出肝细胞，但是培育拥有复杂立体结构的脏器
非常困难。谷口英树表示，这是首次用iPS细胞培养出人类脏器并确认其功能。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 30 建立HBV expressing cell line，用HuH7大概不是个好选择，因为其分化程度低且敏感
，病毒在其中的复制效率相对较低，比不上HepG2。
此外，如果你想建立表达HBV Genotype B型的细胞系，必须要筛选细胞培养适应性病毒
株，而不能直接用患者体内分离到的毒株或者所谓基因型“标准株”，因为这些
clinical isolates在细胞培养条件下的复制能都很差，需要在体外培养条件下积攒一
系列的适应性突变才有可能在细胞系中高表达，尤其对于本身复制能力就相对差的B型
HBV病毒。目前广泛使用的几种HBV expressing cell line例如HepG2.2.15/HepG2 H1.3
等，都采取了类似的策略。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 31 1. 你放一个新材料进去又不让细胞贴上是起什么作用呢
2. 有那种传统的low adherence的细胞培养plate，可以作对照？
3. 你放这个材料进本来就不贴壁的细胞培养里去看看？ |
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k******y
发帖数: 236 | 32 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
90％
用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家! |
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l******n
发帖数: 298 | 33 谢谢楼上的。很多时候细胞死亡都是瞬时的，很快的。我们目前监测的apoptosis都是
静态的，在某一个时间点。但是细胞培养的时候是动态的，一些细胞彻底necrosis,一
些细胞aoptosiss,怎么有效的来表达呢？
还有能否给一些建议关于细胞细胞间的骨架连接和mmp 。一般细胞死亡细胞都要脱离相
互间的连接。什么细胞骨架蛋白起作用呢？ |
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l*****7
发帖数: 8463 | 34 你是刚入门？是要培养某一特殊菌株？
培养细菌用waterbath shaker或一般暖箱即可。
好一点的二氧化碳细胞培养箱可随意调控O2／CO2浓度。 |
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b*********1
发帖数: 1054 | 35 活细胞咋用干冰吗？你不是把细胞都冻死了。活细胞可以用小口的细胞培养合，长到差
不多60%的样子，然后用培养液把整个盒子灌满了，把盖子拧死，可不想平时留缝让细
胞透气的样子。然后用封口膜封死。俺的经验，三天之内可以，过了俺就不知道了。俺
们这儿的访问学者用这种办法带回国细胞，都活了。在美国内部，俺们也这样邮寄。干
冰用来邮寄冰冻的细胞，风险就是，如果干冰中途流失厉害，温度上升，大多细胞会死。 |
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t*******7
发帖数: 85 | 36 最近作原代细胞培养，老是污染。我对原代细胞培养相当自信，有7-8年的实验经验，
为什么污染，说来话长。
我刚到这个实验室的时候，试验室技术员就对我不屑于顾，说明一下，我跟他做一个项
目。一次在他的功用电脑上扫描我的实验结果，他在我的实验结果上写上了“狗皮膏药
”四个大字，它是外国人，我不知道他从那知道这几个汉字的。因为当时我拷走了我的
实验结果，并不知道这件事，后来无意中再扫描结果的时候，发现了这张图片。接着，
老板马上作了个poster把技术员以前做的结果都贴在实验室门前，作者里面只有实验员
和老板名字。再后来，他从来不把我当回事，想刁难我就刁难我，我考虑自己是新人，
还要跟他合作，也就忍了。再后来，我做出了一些好的结果，老板开始重视我，他就改
变了态度，对我表面很应承，经常拿小食物给我吃，我就乐得接受。但我说的所有事情
都要经过老板，也就是说，我卖试剂，或者哪怕芝麻大的小事，我说老板同意了，他也
不相信你，要去问一下老板，平心而论，我没有抱怨他任何事。而且每次我跟老伴办公
室讨论试验的时候，他总是跟过来，听听我们说什么，无一例外。大家相处愉快。过了
一年，他把他好朋友招过来，也是实 |
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z*******0
发帖数: 35 | 37 我用干细胞做adipocyte的differeniation, 10天左右得到了如下图片，negative
control 没有这样的结果。
但是做Oil red staining 却没有红色的结果，
请问这是为什么？ 我图片上的vacuelo 是不是fat呢？ 有没有什么其它方法能鉴定
呢？或者我的分化时间太短？？
还有就是，我平时培养细胞的时候，有时也可以看到细胞内出现空泡状的结构，
请问那是为什么呢？
http://yfrog.com/71fatfj |
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j****x
发帖数: 1704 | 38 普通Cell culture显然不是BSL2，而是和普通大肠杆菌培养一样的BSL1。（从前的分类
称为P1-4，已经统一换成目前的国际标准即BSL系统）。养普通细胞在普通实验室的超
净工作台下即可，而BSL2则要求生物安全柜。当然很多实验室使用类似BSL2下的生物安
全柜从事细胞培养，但这并不意味着该实验室就符合BSL2的要求可以从事BSL2相关病原
的操作。
BSL所要求的不仅仅是hood，而是整个实验室的配套系统及规章，包含硬件和软件。比
如密闭负压系统，合理安排的独立的空间，符合要求的消毒设备，人员培训和管理，等
等。
当然，BSL2对于操作pathogen而言只是入门级，lentivirus的致病力也微乎其微。即使
你在普通实验室内进行（有很多国内的实验室和公司都是这么干的）造成的潜在危害也
很小。我提醒LZ的意思主要是基于德国这边相关规定和审查的BT性，因为小聪明而吃大
亏的先例是有的。这也是基于对自己负责任的态度。
说到BT的规定和审查，举一个例子。曾经来我们这里审查的时候，直接翻出新发表的一
篇paper，指着其中一个实验，要求看实验原始记录。找到原始实验记录本后查出具体... 阅读全帖 |
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f******s
发帖数: 440 | 39 搜搜Celline bioreactor, 高浓度细胞培养
给lab scale用的
如果不够的话，养10L不常养就用shaker flask或者spinner bottle. 买个wavebag
system 就用一次是吃饱了撑的
到了10L要考虑过滤细胞，titer多高，跑多大柱子还是batch, 有没有FPLC...如果能提
高titer会事半功倍，试试不同cell line, 培养液...
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.3 |
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r***l
发帖数: 593 | 40 板上有养小鼠T细胞的大虾吗？
自己从小鼠脾脏分离的T细胞，用RPMI+10%FBS+100IU/ml IL2培养，最开始用cd3/28
beads active过，总是养几天之后越来越少，最后大部分都死光了！
哪位大虾有经验能给讲讲吗？多谢多谢！ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 41 大概能得到几千到几万个胚胎细胞，每个细胞比通常的细胞培养的细胞体积要大，每个
细胞大概有0.175 ng左右的total RNA。一千细胞个就是175 ng total RNA，一万个就
是1.75 ug。RNA提取出来后准备做RNA-seq。
对于这个范围的总RNA，用kit过柱子提取RNA好，还是用TriZol，TriReagent等比较好
？还看到有推荐用Phase lock gel，这个效果怎么样？
谢谢啦！ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 42 大概能得到几千到几万个胚胎细胞，每个细胞比通常的细胞培养的细胞体积要大，每个
细胞大概有0.175 ng左右的total RNA。一千细胞个就是175 ng total RNA，一万个就
是1.75 ug。RNA提取出来后准备做RNA-seq。
对于这个范围的总RNA，用kit过柱子提取RNA好，还是用TriZol，TriReagent等比较好
？还看到有推荐用Phase lock gel，这个效果怎么样？
谢谢啦！ |
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r***l
发帖数: 593 | 43 不好意思，我没有太看懂。
你是说你是用含有cd3的plate培养t细胞，每三天换一次新的plate是吗？
我是用cd3的beads培养的，应该也可以吧！
我只是不知道为什么会死 |
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s*********t
发帖数: 600 | 44 终于遇到传说中的支原体污染了，郁闷到吐血 。。。
准备养很多很多细胞做蛋白纯化的，养到一半状态越来越差，无数死细胞漂着，细胞瘦
瘦的，很多小泡泡。PCR检测是支原体污染了 。。。。
扔掉了50个15cm的dish的ES细胞 。。。。
浪费了好多试剂和时间啊。
请教到底该怎么避免支原体污染？是不是我操作的时候不小心？要注意哪些事情？
我看实验室还有人不带手套伸进超净台传细胞呢 。。。
我还需要扔掉哪些东西啊？培养基，trypsin，gelatin，都需要扔掉吗？ |
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L****S
发帖数: 76 | 45 可能主要会是缺氧。
CO2 是维持培养液PH (7.4),但是一般培养液都会加入NaHCO3 和HEPES,而且HEPES对酸
碱度的调节作用受CO2 浓度影响小。
细胞自己代谢过程中产生的有害气体？我觉得要看觉体细胞的数目 （细胞数/ml培养液
或者细胞数/cm2）还有细胞的耐受程度。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 46 这两年视觉研究的地震不少，
rd8这个新的突变于12年报导出来，对搞视觉研究的震撼很大，所有实验室回去筛选有
没有这个mutation，因为这个mutation和其他的rd突变不太一样的一点是除了直接的导
致视网膜退变，还有一些其他的表型，这个突变在c57bl/6n的老鼠里，c57bl/6j的没有
事儿。以至于之前有用这个6n做的模型发在很好的期刊上的文章，作者立马回去检查，
重复，确保表型和这个突变无关。
而这段时间的地震是RGC-5这个细胞系，大家也许都听过这个细胞，这个最开始是rat
ganglion cell line，但是呢，最近发现，这个细胞系其实没有在originator's实验室
外存在过，现在流传的RGC-5实际上已经mouse origin的cone photoreceptor cell
line。。。。这个很震惊，因为从最开始到现在已经过去了10多年的时间，用这个细胞
株发表的文章也超过了200多篇，也就是说，究竟有多少结论是站得住脚的，我们无法
得知了。
所以几个vision的journal都相继出社论来警告尤其用细胞系来做实验的，建议要用in
vivo或者pr... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 47 如果前面那位兄弟只是选克隆的话(比如做stable transfected cell line)，稀释细胞
培养，然后慢慢挑就是。如果要直接从一大堆细胞选出一个符合要求的细胞，方法总结如
下。
From
Culture of animal cells: a manual of basic technique (4th edition)
(1)Sedimentation velocity at 1g
* based on cell size
*Custom-made separating funnel and baffles
*Simple technique but not very high resolution or yield
(2) Isopyknic sedimentation
* based on cell density
*centrifuge
* simple and rapid
(3) MACS
* Surface antibodies
* simple magnet and flow chamber |
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i*****g
发帖数: 11893 | 48 以前隔壁一个做iPS的实验室，他们就为这个问题焦头烂额，杀来杀去也搞不定，还买
了几种mycoplasma的药。你想想，从1个细胞最后长到10^7 以上做分析，有mycoplasma
肯定完蛋了
所以，我知道这个事情。
他们后来会议时候问美国这边，据说办法就是，不用任何pen-strep。没有pen-strep，
细胞长得非常快，你一旦发现细胞长慢了，又没有细菌污染，必然就是mycoplasma污染了
污染就扔掉 |
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g*********3
发帖数: 177 | 49 各位是否见过直接从动物身上提取血清，然后用来培养细胞的～
这样做的优势是和动物模型的生理情况比较接近，但是也有可能毒性比较大.
在网上找了下，没发现这样的protocol
如果有哪位大神做过类似的或者知道这样的protocol，给个链接.
谢谢啦～ |
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w******y
发帖数: 2504 | 50 请问大家作肝细胞体外实验的时候是用HEPG2细胞株吗？如果想原代培养的话，是否困
难？能否分享一下您的技术心得？ |
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