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c*****8
发帖数: 49 | 2 太谢谢了，附近有Aria，我再看看能不能搞到这些抗体。
我是不是流式之前，先用CD4的beads做一个MACS?
再次感谢！！ |
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q******g
发帖数: 3858 | 3 我也不太懂，随便说一下。
我想你需要观察动物的乳腺，看该蛋白是否有表达。
如果你有红色的荧光蛋白，mCherry, Tomato之类的，肯定不存在自发荧光干扰得问题
。这应该是最好的选择。
但考虑到你看的自发乳腺癌，离表皮比较近， 或许干扰比较小。这你需要查下文献。
luciferase用于活体观察没有问题。但如果你想分离乳腺细胞，做流式细胞仪分析，可
能荧光蛋白更好。 |
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h********8
发帖数: 49 | 5 据说在Cyto2013上展过，有人见过么？
应该不贵，可以搞一台在实验室玩玩，就是国产的不放心呀。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 7 自己学怎么修，然后开个公司卖service，肯定有市场。 |
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l***y
发帖数: 638 | 8 我们楼的几台BD用的非常狠，三天两头call service，难以想象没有service
agreement怎么run下去，这种钱如果不是穷到揭不开锅了千万不能省的，省了没人记你
的好，万一出问题都是你的错 |
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K******S
发帖数: 10109 | 10 Any reason to save the money? |
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b******s
发帖数: 1089 | 12 我还以为都是带sorter的呢。
那请帮忙给推荐一个最便宜的，带sorter的，能分选GFP/RFP的流式仪。谢谢！ |
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T**********y
发帖数: 559 | 15 美国军方一研究机构，US Military HIV Research Program (MHRP)/Walter Reed Army
Institute of Research (WRAIR), 现有OPEN博士后位置, 希望感兴趣的博士人员申请
. 该机构靠近DC和NIH，生活和学术都很方便。
该职位博士后将从事HIV/艾滋病免疫发病机制／抗病毒免疫／及疫苗的研究，项目由
NIH和军方课题资助。该研究机构在艾滋病领域研究处于前沿，配备完善的科研设备和
resources.
申请人应免疫学／病毒学等相关专业博士毕业，具有免疫学／病毒学实验室相关工作经
验，掌握细胞免疫学（流式细胞仪技术等）等技术，有分子和动物实验背景为佳。
待遇和其他细节详谈。
感兴趣的申请人将简历和3位推荐人的联系方式发送至：[email protected]
/* */ |
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f******g
发帖数: 1003 | 16 LSI有几台流式分选和分析仪器，既然想向干细胞方向倾斜，这两仪器必不可少 |
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h****k
发帖数: 182 | 17 不好意思，没写清楚。这个实验我用B蛋白和表达A receptor的cell line一起incubate
, 然后加识别B蛋白的二抗（带荧光），最后在流式细胞仪（flow cytometry)上跑。表
达A receptor的cell line没有被B蛋白stain. |
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h****k
发帖数: 182 | 18 不好意思。 B蛋白是纯化后的重组蛋白，我们觉得它可能是A receptor的ligand..A
receptor表达在细胞膜上，A receptor有加了tag, 用anti-tag antibody染色做流式细
胞仪检测到的。 |
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c**********n
发帖数: 177 | 19 如果非要做流式，换成B的tetramer或者pentamer做也许可以。表面受体和ligand的
affinity一般都不高，很多都是到uM级别。 |
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g*****g
发帖数: 28 | 20 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: goldegg (蛋蛋), 信区: Chemistry
标 题: 中山大学化学与化学工程学院2015年度“青年千人计划”招聘启事
发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 26 20:13:04 2015, 美东)
中山大学化学与化学工程学院2015年度“青年千人计划”招聘启事
化学与化学工程学院于1994年11月成立，其前身是创办于1924年的中山大学化学系。学
院现设有化学系、应用化学系、高分子与材料科学系、化工系等四个系、八个所和五个
中心。在2014年8月上海交通大学世界一流大学研究中心发布全球大学学术排行榜中，
中山大学化学学科全球排名64；在2014年10月 US NEWS发布的全球大学学术排行榜中，
中山大学化学学科全球排名73。
学院师资力量雄厚，拥有一支职称、学历、年龄结构合理,学术思想活跃、开拓进取、
团结合作的师资队伍。现有教授58人（博士生导师53人），副教授53人，中国科学院院
士3人，发展中国家科学院院士1人，“长江学者”特聘教授4人，“国家杰出青年基金
”获得者12人，973首席科学家1... 阅读全帖 |
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C****3
发帖数: 162 | 21 联系人：Echo Zhong +8618621600641
E-mail: [email protected]
/* */
Thanks
大分子类研发、工艺开发、生产运营：
1. 抗体研发&工艺开发总监/高级总监（上下游技术均可）
2. 细胞培养研发&工艺开发总监/高级总监
3. 抗体技术支持高级总监（熟悉抗体研发和生产技术，上下游均可）
4. 抗体生产高级总监（上下游技术均可）
5. 高级运营总监（熟悉大分子工厂运营管理，抗体、蛋白、疫苗类均可）
6.纯化研发&工艺开发总监（熟悉生物类药物纯化技术）
7.制剂研发&工艺开发总监（熟悉生物类药物制剂技术）
8. Bioassay and Biological Characterization Director (Lead bioassay
development activities.Accountable for bioassay applications for early
and late stage development programs,bioassay qualific... 阅读全帖 |
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a******1
发帖数: 10 | 22 要检测一群T细胞群体中抗原特异性CD4+或CD8+T细胞所占比例，可不可以通过将抗原
包被
在板子上，再在培养基中加入anti-CD28抗体和莫能霉素，通过流式检测IFN-g分泌来判
断，就想anti-CD3/anti-CD28刺激类似。
想知道抗原包被在板子上能不能直接刺激T细胞，而不需要APC的帮助？
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c****d
发帖数: 23 | 23 说的好听，
不砸那些钱搞垃圾科研，生产出来的设备卖给谁？
为啥仪器设备搞不上去，试剂耗材搞不出来，一方面是技术确实有欠缺，另外一方面科
研市场太细粉。一台机器中国一年就卖个100来台，研发还要一大笔钱。哪个老板来投
资搞？
而且搞到一半就会被跨国公司收购，以前苏州有家做流式的公司做的还不错，产品刚弄
出来，贝克曼就买来灭了。：）
请大 |
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a**z
发帖数: 37 | 24 中山大学光华口腔医学院附属口腔医院海外高层次人才招聘启事
我院是教育部直属重点高等院校的口腔医学教学医院、国家卫生计生委预算管理医院、
国家卫生计生委-广东省共建共管医院。近十年来，医院遵循口腔医院、口腔医学院、
口腔医学研究所三位一体的办院模式，发展成为集医疗、教学和科研为一体的现代化口
腔医院。我们提供给高层次人才的平台有：
医院为华南地区医疗规模最大的口腔专科医院
根据中国科学评价研究中心发布的《2008～2014年中国研究生教育评价报
告》显示，我校的口腔医学研究生教育排名中连续位居全国第五
我院学科在教育部第三轮学科水平评估中进入前5位
我院口腔医学被评为广东省重点学科——优势重点学科
我院口腔医学实验室为广东省唯一的省部级口腔医学重点实验室，拥有共
聚焦显微镜，体式荧光显微镜，流式细胞仪，MicroCT, 质谱仪等大型设备并视科研需
要每年定期专款购买大型仪器设备。
为进一步实施人才强院战略，加大引进高层次人才力度，促进学科发展，面向海外招聘
高层次人才和... 阅读全帖 |
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m*****e
发帖数: 253 | 25 comp细胞一定要和sample一样吗？我的样品量（培养后）太少了，只好用别的细胞（同
种刚解冻的，培养前），但是背景荧光和大小都变大了很多。我来不及准备，只好调低
了电压把细胞收了，结果很诡异。这种情况一般应该怎么办？谢谢！ |
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b*****n
发帖数: 34 | 26 可以用BD的ABC Compensation beads.设置voltage的时候用细胞就好了。 |
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e********c
发帖数: 30 | 28 RT。细胞是从流式sorting下来的，只有几千个细胞。请问用trizol直接提取RNA，然后
RT-qPCR检测特定基因的敲出效率，RNA够用吗？
有没有人这么做过呢？多谢！ |
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c******8
发帖数: 36 | 29 我们经常是自己分选到Trizol里面。你也可以放到你说的溶液里。放冰上没什么问题，
因为你所有的样品也是这样的。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 30 没事 常温就行
fbs别忘了加，不然离心不下来 |
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f******g
发帖数: 1003 | 31 你说的这些东西，像离心机，流式，显微镜，移液器，一些耗材等等，中国政府要是想
做肯定可以做。
但是问题是做这些东西的效益在哪里？？
第一，这些东西利润是很高。
第二，私人资本要是从前期科研开始干起的话，成本和价格上肯定干不过那些国际性的
大企业，BD， sigma，罗氏等等。
第三，如果国家举国机制来做，肯定能做出来，可是投了非常多的钱做出来估计卖的价
格要比别人高，毕竟前期投资在那里呢。估计成本也收不出来。
第四，这些东西对国防，领土安全没有什么影响，西方也不禁运。
第五，我们也有赚西方钱的方式。从以前的服装鞋帽，到现在的电子产品，以及航天。
第六，欧洲美国日本，也没有哪个国家什么都能做。也是互相买来卖去。
第七，这些东西是需要市场调节的。如果中国真的有非常大的稳定的市场需求。我相信
那些资本持有者不是傻瓜。华大不是已经收购美国CG公司了，华大明年估计就能用上自
己的测序仪了。 |
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i***9
发帖数: 106 | 32 恩， 既然你说的很客气，没有上纲上线，我也发表个人的看法。
你眼里看到的离心机，流式，显微镜等等，是具体的，眼前的东西。我觉得应该看到背
后的东西。首先，我声明我讲的很民科，都是我自己的理解，有些东西很不准确。
所谓背后的东西，就是基础设施，基础技术的投资和打磨。
你不能单单的看离心机就是一个离心机，它是由很多东西构成的。很民科的讲，一个简
单的离心机，对于制造轴承的钢材的要求是极其苛刻的。要做这个离心机，就需要强悍
的冶炼工业。假如你用过超高速离心的话，就知道光平衡就需要大半天时间。但是，人
家的离心机是怎么造出来的？怎么平衡的？
这些东西不是一两年能搞出来的，是靠经验极其缓慢的积累出来的。
这些所谓简单的东西的背后，是整个配套的制造业的缓慢升级过程。也是很痛苦的过程
，但是是绝对必须提高的。
第五点，我们赚西方人的钱，是以一种很苦逼的方式，服装鞋帽，能赚多少啊。人家
Illumina告诉你了，我们出HISEQ2500了，你要换代么？Iphone 6变6S了，买么？在美
国大街上跑的中国车，你见过？
日本人说，一旦开战，我们只要一个月就可以造出原子弹，并不是说着玩。人家制造业
在那里... 阅读全帖 |
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e**r
发帖数: 1144 | 33 老鼠的肺
一个一个做流式或组化太费力了
想先定性的看一下
有没有什么蛋白在inflammation后会大量增加的？ |
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N******n
发帖数: 3003 | 34 [37;1m【 以下文字转载自 [+green]shelly2003 [+black]的blog 】
【 原文由 [+green]shelly2003 [+black]所发表 】[+reset]
【 以下文字转载自 [+green]S_LifeScience [+black]讨论区 】
【 原文由 [+green]Thrush [+black]所发表 】[+reset]
一、前言
原先我是准备等到毕业的那一天，痛痛快快地哭过了之后，一口气写掉这篇文章的。其实
一直在零散时间打腹稿，差不多已经煲熟了。刚才有同样读博士读得凄凄惨惨切切的师兄
表示期待，于是一横心决定现在就写了。何况，早点让更多还没上博士这条船的弟妹们看
到，提醒他们读博要谨慎谨慎再谨慎，能多挽救一个像我们哥俩这样不是读博的料的孩子
，也好。
文章原先是分八篇发表的，现整理为一整篇，每一部分加上原先的标题。
有几点要说明的：
1.或许有人嫌太长了不想看，或许我的观点片面甚至偏激，或许我的经历太特殊而不具备
代表性。但是无论如何，请点进来看的每一位想要读博士的朋友，还包括尚未高考的小朋
友和他们的爸妈们，切记，在做出选择之前做... 阅读全帖 |
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s***c
发帖数: 1664 | 35 有没有人对flow cytometry的工作有兴趣， BD在san jose有几个opening。一年
contract。虽然是合同工，但想进工业界的话，也许是个机会。PHD也行。会流式基本
操作就好，不一定要三年经验。
直接联系这个猎头， 9198876786 ext. 4135. [email protected]
/* */。 她挺靠
谱的，本人拿到过offer，但一些原因去不了。
Position Details:
Job Title: System Verification Specialist
Duration: 12 Months
Location: San Jose CA 95131
Job Description
· Participates in system verification testing for complex medical
diagnostic products and systems. The systems generally include a combination
of hardware, reagents ... 阅读全帖 |
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a******1
发帖数: 10 | 36 几乎天天做流式，个人经验告诉你PE/CY5和APC最好不要混一管，补偿太大，要用
percp5.5和APC的，不知道版上回复可以用的，是个人亲身操作过，还是凭推测？ |
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发帖数: 1 | 37 大家好， 想开发一个小的医疗仪器，寻求合作
需在实验室工作，用到流式细胞仪，有应用磁珠分选的经验。
站内联系
谢谢 |
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发帖数: 1 | 38 你们是在什么细胞系里边做的呢？
这个筛选标签是可以去除的，比如在两侧加入TTAA和piggyBac的ITR，得到这种带有标
签的细胞之后，过表达piggyBac的转座酶，就能够去除掉不留下任何的痕迹。这个是没
有问题的。
通过这种方法我已经拿到了isogenic人干细胞系，表型也已经找到。现在我在博三，还
有一年半的时间，我想来试试这个combination不同荧光，如果我同时需要导入多个基
因的突变，如果针对每个基因设计的模板都带有不同的荧光，那么我最后只需要用流式
细胞筛选，直接筛到几个点同时突变的细胞系，按理说应该是非常有用的。前一段时间
，日本和荷兰的两个实验室同时在人的肠上皮细胞系中导入四个或者五个突变去模拟
Colorectal Cancer，以验证之前所发现的跟这种癌相关的基因突变究竟怎么导致癌变。
homozygous |
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s******r
发帖数: 1245 | 39 TALEN用双色的思路应该是发在cell还是csc上的，那是几年前了，所以idea本身不算是
很innovative。你在质粒上加个蓝色做负筛选，这个不知道有没有人做过，要没有的话
可以试试，如果你在那几个大牛实验室可能会发的还可以，不过看你在这儿问这些估计
不是，所以期望别太高。流式的时候不是几个颜色就照几次的，一道光照上去，收的时
候split，看光源用了几个wavelength。
所谓干细胞基因编辑效率低其实是个伪命题，如果你的目的是建系多用点细胞就好了，
基本上没有拿不到的。如果你是要研究提高效率方法，那么除非新办法是改进机制的能
实现数量级上的提升，其他的修修补补不过是小打小闹，就是为了灌一瓢水。
好像我都是在泼冷水，抱歉。 |
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发帖数: 1 | 40 浙江大学生命科学研究院人才招聘
研究院概况
浙江大学生命科学研究院（Life Sciences Institute, Zhejiang University），简称
“浙大生研院（LSI ZJU）”，成立于2009年10月，由冯新华教授担任院长、管坤良教
授担任共同院长。
作为浙江大学首个海外高层次人才创新创业基地、学术特区和重点建设项目，生研院在
校长直接领导下，采用国际化的管理和运行模式，实行院长负责制和PI聘任制，在学校
授权范围内，具有相对独立的学术、人事、财务自主权和创新型的研究生培养体系。研
究院聘任数位国际著名生物科学家组成科学指导委员会，对引进人才进行学术评估，为
研究院的发展提供咨询建议。
生研院以“构建一流的人才队伍，开展一流的原创性研究，打造一流的生命科学研究基
地”为使命，瞄准国际生命科学前沿，针对国计民生重大需求，致力于揭示生命现象的
基本规律及其与人类健康相关的原创性研究。研究院成立了癌症生物学、再生医学、炎
症生物学、系统生物学和结构生物学五大研究中心以及共享技术服务平台。
生研院发展至今，已在人才队伍建设、科学研究、学术文化建设和共享技术服务平台建
... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 41 1958万元采购内容：1、流式细胞仪等设备采购；2、压力循环药品制备系统等设备采购
；3、自动灭菌器等设备采购；4、二氧化碳培养箱等设备采购；5、微滴式数字PCR系统
等设备采购；6、PCR仪等设备采购；7、超低温冰箱等设备采购；8、液氮罐等设备采购
；9、酶标仪等设备采购；10紫外分光光度计等设备采购；共10个标段。
从采购的标的来看不过是建立常规生物学实验室。这些仪器需要二千万的投入吗？ |
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发帖数: 1 | 42 借着韩春雨的光，生物版这么火。想再来跟大家探讨一下一个用流式细胞仪双荧光筛选
系统来鉴定并筛选出那种两个allele都被成功编辑的干细胞。
具体思路：
1。CRISPR-Cas9和gRNA在靶标上引入双链断裂。
2。donor模版，模版上带有两段1000bp的同源臂和突变碱基，同源臂之间带有荧光标签
（GFP，BFP，或者RFP等等），同源臂之外donor的backbone上面带有与同源臂之间不同
的荧光标签。
3。每次电转的时候转入细胞：Cas9质粒，gRNA质粒，带有GFP的donor，带有RFP的
donor（两个donor的backbone上面都带有BFP用以排除random integration）。
4。电转过后几天等细胞长到足够数量筛选细胞，GFP+/RFP+/BFP-的细胞应该就是那种
两个allele都被成功编辑的。
5。很多人担心这个荧光标签无法移出，实际上可以使用Loxp系统，筛选出来的细胞直
接过表达CRE可以把荧光标签切除，虽然会有34bp的loxp位点遗留下来，但是你可以把
这个遗留位点选在intron不影响mRNA。或者可以使用piggyBac系统做到无缝... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 43
--你肯定没有做过ssODN用于hES的编辑，做过的话，你应该知道效率有多低，不要太
trust张峰的paper，是可行，但是效率低得吓人。没有足够时间和人力，建议上筛选。
--不太care这种情况，我是收集编辑成功的细胞，效率再低，只要我流式筛选到符合要
求的细胞，就成功。不会像ssODN那样需要很愚蠢的分单细胞去挨个手工筛选，想象一
下让你筛选2000个单克隆的genotyping是哪种工作量，很多实验室筛选到2000个单克隆
还没有正确编辑的细胞。
--相比筛选2000个单克隆，你觉得哪个复杂？ 克隆质粒一个星期就可以搞定。 |
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B***v
发帖数: 113 | 44 最近有很大一笔经费，用于实验室重建和购置全新设备。很大的实验室像个department
, ~65人
想听听大家的意见有哪些很前卫的大宗设备值得购买。
研究方向是免疫系统调节，但是分子生物学，生物化学，细胞生物学的手段都要用。还
做很多transcriptomics, proteomics
流式细胞仪自不必说了FACSCanto, Fortessa,
还有confocal, multifunctional plate readers, etc.
谢谢 |
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B***v
发帖数: 113 | 45 最近有很大一笔经费，用于实验室重建和购置全新设备。很大的实验室像个department
, ~65人
想听听大家的意见有哪些很前卫的大宗设备值得购买。
研究方向是免疫系统调节，但是分子生物学，生物化学，细胞生物学的手段都要用。还
做很多transcriptomics, proteomics
流式细胞仪自不必说了FACSCanto, Fortessa,
还有confocal, multifunctional plate readers, etc.
谢谢 |
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s*****g
发帖数: 26 | 46 大家好！
我在考虑Novocyte和Accuri C6 Plus，请问有什么建议吗？因为经费有限，只能买到这
个级别的。
以前都是用的BD的，比如LSR II, Canto等。Accuri C6 Plus没有用过，经销商说是电
压不可调，对这一功能不是很了解。
谢谢！ |
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c******o
发帖数: 1184 | 47 电压不可调,基本上就没什么用了，你能保证每种细胞荧光都一个水平？
还是LSRII最省心 |
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U*******n
发帖数: 824 | 48 在导师任先达的指导下完成学位论文一个月后，李红良迎来了答辩。这也意味着他在暨
南大学药学院药理学专业的三年硕士学业即将结束。那是在2002年的5月。在《致谢》
部分，李红良说，导师三年来对他的教诲，“令学生终生受益”。
的确，这三年，师生二人的合作可谓“硕果累累”。在这本73页的硕士学位论文中列出
了期间发表的14篇文章（7篇英文，7篇中文）——除去两篇外，李均是第一作者；而其
导师则是绝大多数文章的通讯作者。
作为一名硕士研究生，李的创记录的“高产”引起一片哗然。2001年在其他绝大多数学
生还没有来得及收结果的时候，他就发论文了，而且一发不可收拾，当时就有同学举报
，药学院领导查了，但不了了之。
时光飞逝，当年的硕士“小李”，在获得北京协和医科大学博士，经历2年多国外博士
后，2008年11月从多伦多回到了武汉大学人民医院（当年3月以李红良为第一作者出版
的一篇论文随后被撤稿），并成为了教授。几年下来，李红良组建了据说是100多人的
研究团队，更有“杰青”，“长江”加身，事业可谓如日中天。
然而，2017年是他喜忧参半的一年。喜的是他一年发了5篇《自然医学》论文，忧的是
有举报人向... 阅读全帖 |
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f*******e
发帖数: 354 | 50 流式图上加点造假不大可能的，现在都怀疑这位高手的分析是不是有问题，完全是图像
软件造成的假象？pubpeer上上传的wb原图都有类似问题，都是条带的边缘pattern。现
在表示存疑。 |
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