Z******5
发帖数: 435 | 1 这两种荧光蛋白的检测机器我们动物房都有
要在C57老鼠里过表达一个基因，rtTA诱导的，然后和手头的MMTV-Cre老鼠杂交实现乳
腺组织特异性表达，看老鼠自发乳腺癌是否会增多。
现在想在基因后面加一个IRES-EGFP，或者IRES-Luciferase， 用来指示目的基因的过
表达情况。不知道加哪个好。 |
Z******5
发帖数: 435 | 2 听说EGFP观察更容易，不需要加底物。但问题是需要激发光，老鼠的自发荧光会有干扰
。虽然EGFP灵敏度比Luciferase高，但是有本底的干扰导致实际灵敏度还不如
Luciferase。
Luciferase好处是可以定量，不受自发荧光干扰。但是观察前需要腹腔或者血液注射底
物。据说灵敏度可以达到100个细胞，然后随着距离体表的深度每增加0.5cm，检测的灵
敏度升高一个数量级的细胞数。
两者可以说各有优缺点。总体感觉luciferase可能更好。但是发表出来的论文中貌似转
基因的多数都是EGFP标记，而luciferase大多是用来标记打入老鼠的外源肿瘤细胞。
这方面没啥经验，请有经验的朋友给个建议。
【在 Z******5 的大作中提到】
: 这两种荧光蛋白的检测机器我们动物房都有
: 要在C57老鼠里过表达一个基因，rtTA诱导的，然后和手头的MMTV-Cre老鼠杂交实现乳
: 腺组织特异性表达，看老鼠自发乳腺癌是否会增多。
: 现在想在基因后面加一个IRES-EGFP，或者IRES-Luciferase， 用来指示目的基因的过
: 表达情况。不知道加哪个好。
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q******g
发帖数: 3858 | 3 我也不太懂，随便说一下。
我想你需要观察动物的乳腺，看该蛋白是否有表达。
如果你有红色的荧光蛋白，mCherry, Tomato之类的，肯定不存在自发荧光干扰得问题
。这应该是最好的选择。
但考虑到你看的自发乳腺癌，离表皮比较近， 或许干扰比较小。这你需要查下文献。
luciferase用于活体观察没有问题。但如果你想分离乳腺细胞，做流式细胞仪分析，可
能荧光蛋白更好。 |
j****x
发帖数: 1704 | 4 我们一般用EGFP-Luc fusion protein，效果非常好 |
d****i
发帖数: 2346 | 5
太强了！有这个最好。如果没有，需要分离细胞或者tissue用GFP，需要活体动物水平
观察，建议用luciferase。
【在 j****x 的大作中提到】
: 我们一般用EGFP-Luc fusion protein，效果非常好
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r***z
发帖数: 19 | 6 你这个IRES-EGFP是加在最后一个外显子的终止密码子后面还是插入到最后一个外显子
中？ |
s******a
发帖数: 472 | 7 EGFP也可以定量吧，如果是过表达我想自发荧光应该不是问题吧。
同意楼上的EGFP-luc，双保险。
【在 Z******5 的大作中提到】
: 听说EGFP观察更容易，不需要加底物。但问题是需要激发光，老鼠的自发荧光会有干扰
: 。虽然EGFP灵敏度比Luciferase高，但是有本底的干扰导致实际灵敏度还不如
: Luciferase。
: Luciferase好处是可以定量，不受自发荧光干扰。但是观察前需要腹腔或者血液注射底
: 物。据说灵敏度可以达到100个细胞，然后随着距离体表的深度每增加0.5cm，检测的灵
: 敏度升高一个数量级的细胞数。
: 两者可以说各有优缺点。总体感觉luciferase可能更好。但是发表出来的论文中貌似转
: 基因的多数都是EGFP标记，而luciferase大多是用来标记打入老鼠的外源肿瘤细胞。
: 这方面没啥经验，请有经验的朋友给个建议。
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