H***e
发帖数: 223 | 1 我做的是Mycobacterium。想缺失的是TCA cycle里的一个酶的编码基因。
老板不跟我讨论实验，只要结果。 |
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H***e
发帖数: 223 | 2 我做的是Mycobacterium。想缺失的是TCA cycle里的一个酶的编码基因。
老板不跟我讨论实验，只要结果。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 3 I don't know anything about this strain. Is it a high GC content actinomyces
? The plasmid perhaps work for the strain.
For the genes involved in TCA cycle, it really depends on the enzymes.
Sometimes there are alternative pathways and metabolic flexibility. There
might also be other isoenzymes. You may add some substance to the media or
clone the similar genes with the same function from other bacteria to
restore the phenotype. |
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h*******o
发帖数: 4884 | 4 as long as NADH is produced in the TCA cycle, then complex I is it. |
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W****C
发帖数: 1937 | 5
太稀了吧 浓缩的话可以TCA precipitation |
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m******5
发帖数: 1383 | 6 you think my procedure attached for tissue lysate preparing should be OK?
I also tried TCA precipitation to concentrate tissue protein, but it still
didn't work
very |
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m**z
发帖数: 787 | 7 是在体积大浓度稀的话可以考虑先TCA precipitation |
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m******5
发帖数: 1383 | 8 求tca precipitation 组织液protocol |
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c*********r
发帖数: 1312 | 9 TCA沉淀会有选择性吗？比如某些蛋白会比其它蛋白更容易或者更不容易被沉淀，进而
导致蛋白的相对浓度变化？ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 10 简单的搜了一下，似乎TCA沉淀会有损失，而且有的蛋白可能会不溶解。。。
有机会的话试一下。 |
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j******3
发帖数: 5244 | 11 直接上wb肯定是不行的
我现在做了下预试验，从200ul里面用TCA把蛋白沉淀下来
然后全load到page gel里，这样wb是可以比较容易检测到的
我现在的想法是能不能找个啥软件，能够根据WB条带的浓度来进行个初略的定量
我知道这样不准，但是想先试试
不知道有没有这样的软件 |
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N*****h
发帖数: 324 | 12 看到的文献里大多是检测氧气的消耗，但是我们没有设备，暂时做不了。有没有其它方
法检测呢？最好是有kit。我的实验目的是想证明某个药物会抑制Glycolysis，但是可
以增加TCA cycle。十分感谢。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 13 嗯，这个是标准。用过所谓的sds-compatible kit, 叫啥RC-DC一类的，
ms第一步就是TCA precipitation |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 裂解的时候，先把细胞用dPBS洗一洗
既然你要跑总蛋白的胶，那何必用TCA沉淀呢？直接用8M Urea 裂解然后
直接上胶不更好么？这样还省得你操心phosphotase 的问题。
另外，如果你自己没有做过trpsin digestion, 不如让跑质谱的人帮你做算了。
他们一般都负责这一步的。你要自己做，万一没弄好还更麻烦。
最近要做一个质谱实验，目的是检测一个信号转导通路上的蛋白被抑制剂抑制（没有抑
制的作为对照组），病原体感染后某个器官的蛋白水平变化, 当然很希望能够看到磷酸
化蛋白的变化。
这个器官是单层细胞的，几个平方毫米大小（取50个左右的个体作为一个样品）；
我的初步实验步骤是：器官细胞在裂解液中裂解---沉淀蛋白--凝胶电泳蛋白---胶上用
胰蛋白酶分解蛋白并收集--MS 分析。
请教做过的朋友：
1）用什么溶液和方法来进行器官细胞裂解能够充分裂解细胞，又能够不影响后面的质
谱分析？
2）在裂解完细胞后，用氯仿甲醇沉淀的方法纯化蛋白两次，并除去裂解液中一些盐和
去垢剂；请问这步操作会不会造成蛋白降解，尤其是磷酸化基团的去磷酸化？
2）质谱一般的上样量为多少？ 每个样品... 阅读全帖 |
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m****M
发帖数: 360 | 15 直接TCA沉淀出我的蛋白混合物，可以拿去测序吗？还是必须事先消化一下？一个肽段
最多可以得到几个氨基酸的信息？
Thank you |
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m**i
发帖数: 47 | 18 alkaline agarose gel我一般都用0.6%的，所以特别fragile，电压一般20V左右，跑
overnight。电压太大，胶就化了。dry之前在7%TCA里泡30min，然后再dry。找个
protocol看看就知道了，也没什么特别特殊的。 |
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K**R
发帖数: 193 | 19 请问这里有什么protocol，或者kit 测试三羧酸循环里的a ketoglutarate成分吗？
多谢！ |
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T****u
发帖数: 424 | 21 LC-MS/MS
or
GC-MS/MS
lc用于分离
MS/MS用于定性及定量。 |
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d********n
发帖数: 15 | 26 it's not degradation (proteases work less efficiently at ~90C, but will be a
disaster at ~55C at which proteases have reduced activity but protein
substrates begin to open structure and give much higher accessibility), but
precipitation because proteins lose native structure under heating. This is
why SDS or LDS loading bf needs to be added before heating. 1g sds binds to
14g proteins, 10ul sds loading bf is supposed to be enough wrap all proteins
in
the sample as they are so low.
the only probl... 阅读全帖 |
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a****c
发帖数: 339 | 27 起始浓度有点低，可以先试下TCA/acetone/methanol precipitation。我用过的最好的
是Calbiochem的Proteoextract protein precipitation kit，不过即使这个Kit也需要
起始浓度至少50ug/ml。 |
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q**s
发帖数: 285 | 31 try add 2-mercaptoethanol in medium if you didnot add
The role of 2-mercaptoethanol in the stimulation of spleen cell cultures:
increased uptake of cystine into the TCA-soluble pool
Immunol Lett. 1982 Apr;4(4):193-7. |
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R****n
发帖数: 708 | 32 我在细胞系里敲出了一个histone methyltransferase,下一步想看看nucleosome
conformation change. 我想了解下有什么可行的方法？
TCA 提histone 已经做了，可不可以用这些histon组装nucleosome，似乎需要严格控制
h2a h2b h3 h4的比例. |
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g*****x
发帖数: 3283 | 33 当然要提蛋白了啊，这个用MWCO浓缩一下TCA沉淀就搞定了 |
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q******g
发帖数: 3858 | 34 我觉得肝脏是代谢的主要器官，调节TCA循环，对肝癌的影响更大些。
而且他是把化学物质直接打进肿瘤里，效果自然非常的好，临床上的可行性不大。 |
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R*******N
发帖数: 7494 | 35 实际上电路还是JSSC/TCAS,元器件还得TED/EDL, 不过看自己论文实力。自己工作还不强的时候，头2年先弄2篇EL垫着，就是最后的全文被JSSC据了，有EL也能毕业是不？ |
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R*******N
发帖数: 7494 | 36 大前年看史坦福的一牛，论文一中ISSCC，略改了几段话再中TCAS,最后加了2个版图再
发JSSC...一个工作通吃全部电路牛刊。
至今叹为神人...
, |
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f********o
发帖数: 2181 | 37 ISSCC才一页文字一页图
TCAS就算是brief也要5页吧
而且在ISSCC发的时候肯定有版图, 他们做的什么东西要放三个版图上去? |
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R*******N
发帖数: 7494 | 38 Analogue IC 算不错的吧，尤其是ADC/DAC, 做个sig-delta的结构，你就前后端、数字模拟、无线、图象、医疗整个信号处理都顺进去了。
个人感觉，比较而言，做数字是大路货，job市场越来越走淡。而且发论文很难，不要说JSSC，连TCAS都不容易。
了 |
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l****o
发帖数: 184 | 39 首先谢谢回答得这么仔细，赞一下学习精神：）
关于transfer function 我是这么推导的，见附图
Gain boosted amplifier在这里的作用就是把gm2提高了(AGE+1)倍
所以在表达式中与普通cascode 不同的地方就是多了一个(AGE(S)+1)
这个+1的部分就create another zero, 但是这个transfer function所表示出来的
Non-dominate poles 分别是the output of the gain boosted amplifier(V2)和node
v1，
这就与另外一个pole需要和zero在一起的假设相矛盾。
我不太明白我这样推倒错在什么地方，我分别看了2002年的一篇tcas 和berkeley的
lecture video,
都有相似的结果。
至于我说把gm3/c3 push到high frequency上面，这个当然要具体问题具体分析，越往
外推越好。
再次感谢帮我解答问题，，：）
amplif
amplifie |
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a*****u
发帖数: 157 | 40 体系结构方面：ISCA,HPCA,MICRO,ASPLOS,ISC等
硬件设计：DAC,DATE,ICCAD,ICCD，ASP-DAC等
另外现在FPGA方面的会议，也常有GPU的内容。主要的四个FPGA的会议是FPL,FPGA,FCCM
，FPT。
并行软件设计我不太懂，会议向PLDI应该不错。
JOURNAL我关注IEEE TRANS的多过ACM（因为我是做EE的），IEEE计算机体系结构方面最
好的应该是是TC和TPDS。另外TCAD,TCAS,TVLSI也常能见微处理器设计方面的内容。还
有一些杂志，像IEEE MICRO, IEEE COMPUTER，都有相关内容。
这个领域最好的还是会议。前面几个体系结构会议都是最顶尖的，ACCEPT RATE只有20%
或更少，比一般的JOURNAL都难发。 |
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a*****u
发帖数: 157 | 41 体系结构方面：ISCA,HPCA,MICRO,ASPLOS,ISC等
硬件设计：DAC,DATE,ICCAD,ICCD，ASP-DAC等
另外现在FPGA方面的会议，也常有GPU的内容。主要的四个FPGA的会议是FPL,FPGA,FCCM
，FPT。
并行软件设计我不太懂，会议向PLDI应该不错。
JOURNAL我关注IEEE TRANS的多过ACM（因为我是做EE的），IEEE计算机体系结构方面最
好的应该是是TC和TPDS。另外TCAD,TCAS,TVLSI也常能见微处理器设计方面的内容。还
有一些杂志，像IEEE MICRO, IEEE COMPUTER，都有相关内容。
这个领域最好的还是会议。前面几个体系结构会议都是最顶尖的，ACCEPT RATE只有20%
或更少，比一般的JOURNAL都难发。 |
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a*****u
发帖数: 157 | 42 两都属于TOP JOURNAL，还是不同方向的，用什么标准来衡量好坏是个问题。
就算在比较接近的方向里，是TVLSI好还是TCAS好，这个也没法说。 |
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s*****t
发帖数: 987 | 43
circuit system 主要还是偏circuit吧，现在的editor in chief 是搞电路的
TCAS info for author 特别说了，要突出对电路啥的联系，和Signal processing 还
是有很大差别的
不过也有信号，通信控制的文章发在上面 |
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s**********g
发帖数: 14942 | 45 我的领域主要在EE底层电路设计与分析，PhD期间集中于memory，例如DRAM SRAM
STTRAM之类，但其他相关digital circuit设计领域应该也可以（只要不是系统，综合
之类的）
同时也与化工系合作做过organic electronics。
一作论文发表在ISSCC,CICC和ISLPED，以及TCAS-I。如有相关领域的journal review机
会可以转让，不胜感激！
在此先行谢过！ |
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T***F
发帖数: 29 | 46 TCAS-I is a top journal.
JSSC is a top top journal. |
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s**g
发帖数: 66 | 47 assume one port resistor network,
total input res Rin
one element res Rx
input current Iin
current flow in Rx branch Ix
It can be proved:
sensitivity S = dRin/dRx = Ix^2/Iin^2 >= 0
Vallese "Incremental versus adjoint models for network sensivity analysis"
TCAS 1974 |
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g****d
发帖数: 86 | 48 October 11, 2004
Monday
Clarification
Case Diversity
Common Law Rationale History
Appellate Process à Local/SCA/SSC/TCA/USSC
Intro to Law Sources of Law (ranking)
Intent
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l*********e
发帖数: 158 | 49 Mine:
On-going; Genetics on chapter 3rd now. Biochemistry's metabolism part, TCA cycles now.
Today;
Have one hour to listen to Goljan's audio now. Plan to go to library for 2 hrs from 4PM.
Tomorrow;
Plan to go to library at NE Univ.
1) Try to finish genetics.
2) Try to finish biochemistry metabolism part.
3) Try to read immunology.
PS: I received an email from mitbbs that I have been approved to resign from the boarder position. Thanks a lot for all of your support and being so considerate. Alth |
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s**********r
发帖数: 178 | 50 1C Ca2+ activates muscle glycogen phosphorylase
2C pyruvate can not enter the TCA cycle. |
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