a****h
发帖数: 1012 | 1 这都是出来混还的啊。。。去年的4th qrt melt down算是还完了吧。。 |
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Y******e
发帖数: 20256 | 2 let me rank my top 6 based on their eye test, not their record.
Bama
Clemson
UGA
Oklahoma
USC
OSU
Bama is just an unlucky one to lose to Auburn at Auburn, it's a rivalry game
. Bama is still the strongest team in the entire NCAA football.The rest of
the #2-5 has quite good QBs. OSU has two RBs on the field. if they start
their backup QB, they may be better, but still, rank #6.
I told my colleagues that OSU will win, they just can't believe me. @^@
OSU can run their dame ball at 3rd and 4th qrt w... 阅读全帖 |
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w***i
发帖数: 9926 | 3 【 以下文字转载自 Living 讨论区 】
发信人: chooyu (卓奥友), 信区: Living
标 题: 装了些东西（多图)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 26 16:10:06 2012, 美东)
月前pre-wired好的线路来找老墨装几个内置音箱，结果漫天要价，我一看干脆自己装
算了。打小儿动手能力比较强，但只爱拆东西，从来没把碎东西拼一起过，更甭提木工
活了。后来趁黑五买了一堆乱七八糟工具，装好了音箱又想玩别的，慢慢一发不可收拾。
工欲善其事，必先亮车库。没碰过电，所以一步步相当缓慢。
先去lowe's找了个员工把想法一说，就把这堆东西买回来了。
先拉闸。打开灯口。
把隐蔽连接管连上，nut扭紧.
然后把灯口位置用尺寸一样的线路盒盖上.
上灯很痛苦。找到stud位置后，固定一头，另一头暂时搭在门上.
固定好以后
连灯内线，3线结构。
开始上管儿。一共8根。
最后鼓起勇气合闸，没爆炸，还巨亮。幸福的泪水。
开始弄音箱，决定用family练手，然后再media。黑五买了一堆各种锯。
把墙上pre-wire盒子拿掉,拉出线,测试音箱，连好功放的hdmi，... 阅读全帖 |
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P*****s
发帖数: 2619 | 4 【 以下文字转载自 Living 讨论区 】
发信人: chooyu (卓奥友), 信区: Living
标 题: 装了些东西（多图)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 26 16:10:06 2012, 美东)
月前pre-wired好的线路来找老墨装几个内置音箱，结果漫天要价，我一看干脆自己装
算了。打小儿动手能力比较强，但只爱拆东西，从来没把碎东西拼一起过，更甭提木工
活了。后来趁黑五买了一堆乱七八糟工具，装好了音箱又想玩别的，慢慢一发不可收拾。
工欲善其事，必先亮车库。没碰过电，所以一步步相当缓慢。
先去lowe's找了个员工把想法一说，就把这堆东西买回来了。
先拉闸。打开灯口。
把隐蔽连接管连上，nut扭紧.
然后把灯口位置用尺寸一样的线路盒盖上.
上灯很痛苦。找到stud位置后，固定一头，另一头暂时搭在门上.
固定好以后
连灯内线，3线结构。
开始上管儿。一共8根。
最后鼓起勇气合闸，没爆炸，还巨亮。幸福的泪水。
开始弄音箱，决定用family练手，然后再media。黑五买了一堆各种锯。
把墙上pre-wire盒子拿掉,拉出线,测试音箱，连好功放的hdmi，... 阅读全帖 |
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j******n
发帖数: 21641 | 5 来自主题: LeisureTime版 - 可乐的秘诀 Fluid extract of Coca 3 drams USP
Citric acid 3 oz
Caffeine 1oz
Sugar 30 (it is unclear from the markings what quantity is required)
Water 2.5 gal
Lime juice 2 pints 1 qrt
Vanilla 1oz
Caramel 1.5oz or more to colour
7X flavour (use 2oz of flavour to 5 gals syrup):
Alcohol 8oz
Orange oil 20 drops
Lemon oil 30 drops
Nutmeg oil 10 drops
Coriander 5 drops
Neroli 10 drops
Cinnamon 10 drops
Read more: http://www.news.com.au/business/secret-coca-cola-ingredient-list-found-in-newspaper/story-e6frfm1i-12... 阅读全帖 |
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d*********2
发帖数: 48111 | 7 我们小学3年级实践民主, 先富的娃从冷饮店抱了一桶大概也就是现在超市里卖的那种1
-2个 qrt的冰激凌就成功当选了.
班主任极其不爽, 两个月以后宣布改选, 我们学生都很开心, 又吃了一次冰激凌. |
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f*******t
发帖数: 7549 | 8 raw卫星图片如何处理我不知道，只能简单说下处理好后的图片的组织方式。GMaps用的
是图形学和游戏里常用的四叉树（quadtree）。基本思想就是把正方形的区域等分成4
块，分别记为qrts。比如一张图片的命名为qstsrst，说明这张图片缩放级别是7，对应
的经纬度范围也可以通过数学公式计算出来。
在网页里引用它的js控件，知道你focus在哪一点上，以及缩放级别是什么，就能依此
计算出显示区域需要load哪些图片，再从google的服务器获取。在你拖动地图或者缩放
的时候，js控件还要动态下载对应地点和清晰度的图片。
后端非常复杂，因为不仅要提供简单分割好的图片，还有对应的各种地理信息，比如道
路、交通、地标。
几个T的数据对google来说根本不算什么……GMap对外服务每秒的throughput估计是几
十到几百G。 |
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O******e
发帖数: 4845 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
cia555 (dreamer) 于 (Wed Dec 24 01:52:33 2008) 提到:
过去30年，美国的生命科学高速发展，现在除了药物研发上与欧洲平分秋色外，在基础
研究，生物科技上成了世界的龙头老大，成果累累但是采取的竟争手段也不是很温柔。
成果累累：
1. 美国主挑完成了人类基因测序（Venter Institute/Whiteheand Institute为主挑)；
2. 建立强大完整的生命科学数据库（Pubmed,MGD,UCSC genome etc）;
3. 建立了系统完整的生命医学文献资料文库（cell系列， Science, Nature分枝系列
，PNAS, Plos系列 America J.of ×××）等等。
4. 掌握了绝大部分生物核心技术（Con-focal Microscope, FACS, PCR, qRT-PCR，
第一代，第二代DNA sequencing技术，莹光标记技术，莹光成像技术，人源化的单抗制
备技术，基因芯片， ChIP技术，和欧洲，日 |
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t*x
发帖数: 1065 | 10 半年前用相同的primer,cDNA synthesis kit做的，当时cDNA只用到了0.1ug/reaction.
半年之后其他东西几乎是相同的，只不过RNA是新提的（但用的相同的kit),还有SYBR
Green Master Mix是新买的，但发现，cDNA已经用到了很高的浓度(2ug/reaction)，但
Ct值还是比以前的Ct值晚出现好几个cycle,请问会是什么原因呢？
RNA quality已经跑胶检测过了，是完整的。
会是Master Mix的问题么？是新买的啊，一直保存在-20C.
多谢大家指教！ |
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U********S
发帖数: 1896 | 11 housekeeping gene 的Ct相差达吗？ |
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t*x
发帖数: 1065 | 12 对的，18SrRNA的 Ct也相差很大。。。今天又重新做了一遍，还是这样的结果
碰到过相似情况么？？
谢谢哦～～ |
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s******y
发帖数: 28562 | 14 well, if the relative ct (your target gene over the house keeping gene)
remain the same, then there is nothing to worry about.
If you really really want to make sure, there are things you need
to check:
1. did they change the fluorescent lamp/detector in the realPCR machine?
2. Did you use the same DNA dye in the PCR reaction? (if the dye is loaded
in the premix kit, then it is not consistent between batches and cannot be
used to do direct comparison)
reaction. |
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t*x
发帖数: 1065 | 15 Thanks a lot!!! Really appreciate!
You are totally right....The relative Ct seems remain same and the dye
actually is added together with the premix. The reason why I worry this so
much is that the Ct value of my target gene is so late (>35) even though I'
ve already increase the concentration of cDNA so much. |
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t*x
发帖数: 1065 | 16 Thanks. I changed but results remain similar.
Is it okay that I load 2-4ug cDNA/reaction? I am afraid it is too much and
is so abnormal. |
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b****x
发帖数: 110 | 17 I think it is not necessary to load 2-4ug cDNA. It is too much even if you
get a relatively normal Ct value.
Checking the machine settings for all parameters is helpful. |
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t*x
发帖数: 1065 | 18 Thanks for your response.
Yeah, I also concern about that. But if I load less cDNA, there is no
amplification curve before 40 cycles at all.
The machine settings did not change at all, but I'll double check. Thanks! |
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d******r
发帖数: 124 | 19 ambiom, invitrogen or biorad?
用过的xdjms比较下吧。谢过！ |
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T****r
发帖数: 4006 | 20 ambion没用过
invitrogen，bio-rad都用过，印象中都还还不错 |
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d******r
发帖数: 124 | 21 非常谢谢
再问一句：一般用什么做internal control？ actin？GAPDH？ 还是S18 rRNA？ |
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A******y
发帖数: 2041 | 22 If you are using one-step, Quanta Biosciences kits are the best. I have
used all major brands (new Bio-rad, Applied Bio, Invitrogen, etc). Quanta
is the OEM for Bio-rad for long time. You also want to make sure that you
have two housekeeping genes and normalize your mRNA (cDNA) loads as a third
control. I like GAPDH and S18 rRNA. |
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w*******g
发帖数: 16 | 25 我们想用qRT-PCR或者western blot 来说明doxycyclin(一种antibiotic against bacteria)处理过的细胞和对照组在生理上有无明显区别，麻烦各位牛人推荐
几个合适的candidate，多谢了 |
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l******u
发帖数: 936 | 31 this is the right way.
It is not good to ramdonly select one for internal control, in my microRNA
array data, many so called "house keeping" control probes are so variably
expressed. |
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a*****g
发帖数: 543 | 33 1） NanoString吧
2）assume mRNA-cDNA linear,用your favorite gene plasmid (算molecular weight,
molecule concentration) 做serial dilution, qRT-PCR. |
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a*****g
发帖数: 543 | 35 what kind of Cre did you use?
If you happened to have SOX2-Cre, you will be able to get good KO( of target
ed site).
I'm assuming you are doing appropriate control of the genotyping, with both
WT primers and recombinant primers...
How big was the targeted exon? where is your qRT-PCR targeting? Having one p
rimer locating in the exon may help to clarify whether deletion of the exon
occurred... |
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w******e
发帖数: 1187 | 37 想test tissue RNA和2'-F RNA在plasma里的stability, 准备做qRT-PCR
side by side.
请推荐housekeeping RNA的primers。多谢！ |
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P******m
发帖数: 21 | 38 标准品是DNA，melting curve很正常，样品是RNA用random primer 做RT 来的cDNA，
melting curve有个小峰在主峰前面。样品RNA相对单一，没有non-target RNA 干扰。
貌似不是PCR的问题，是不是RT的问题，random primer做RT 造成的背景？qRT—PCR我
是新手，请人指点一下。 |
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r********y
发帖数: 18 | 39 有个问题请教大家，关于real-time PCR，由于starting materials 比较少（只有大约5000 cells），很难在reverse transcription 之前通过RNA浓度进行校正，所以我们将所以的RNA 都用了逆转录了，结果内参ct值相差很大（wt 和KO之间相差有3个cycle，不过都还低于30 个cycle）。 不知道这样的结果出来之后用delta delta Ct方法来分析是否可信？
恳请大家不吝赐教 |
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c******r
发帖数: 3778 | 40 理论上说，用delta ct算差别的前提是amplification efficiency是100%，所以一个
cycle是两倍。如果你的efficiency不是2，比如是1.85，那么3个cycle就是2^3和1.85^
3的差别，也就是说实际6.33倍的差别被当成了8倍的差别。这是你的internal control
。如果用这个去adjust你的target的差别，加上target本身的efficiency如果也不是
100%，这个真正的差别就会非常大。
第二个问题是amplification是S型曲线，就是说，在开始阶段，或者在东西很少的不在
中间一段linear范围内的时候不能用delta delta Ct。
我的意思是，cell number不是可信与否的关键，关键是amplification efficiency。
在你怀疑你的结果是否可信的时候，建议用standard curve instead of delta delta
Ct来计算。只要你的sample的Ct落在你的standard curve里面，而你的standard curve
的correlation ef |
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r********y
发帖数: 18 | 41 非常感谢，是不是说，如果primer 的amplification efficiency比较高的前提下，这
种差别是可以接受的？
另外一个问题是，您在使用standard curve的时候，每次都要重新做standard curve
还是reuse（我知道，理论上讲，应当每次都要重新做标准曲线，但是我们的target
gene 比较多，每次都要做standard curve 比较困难）
85^
control
delta
curve |
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c******r
发帖数: 3778 | 42 我想应该是可以的。
如果target比较多，每次一个个run standard curve确实很麻烦，也很浪费。
如果不得不comprimise， 我想能不能每个target先run几遍standard curve，make
sure the amplification efficiency varies in an acceptable range。这个可以直
接得出efficiency的average和std。这样以后run的时候不再run target的standard
curve，而是只run一个internal control的standard curve。通过refer你前面的
standard curve中的internal control来确定你的PCR run at optimal efficiency。
而且make sure你的target的Ct fall into你的linear range。
反正就是想点办法吧，你觉得这样行不行？
这种事情每人情况不一样，反正需要自己设计实验让它能够reasonablely convincing
就好了。 |
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r********y
发帖数: 18 | 43 我也觉得这样算是最为可行的了。谢谢大牛！
convincing |
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m**********2
发帖数: 6568 | 44 clonbar说的很详细，我补充一点。这个最终要看你的样品之间的区别。比如说处理和
对照之间如果是
成百上千倍的区别，那么你的内参和目标基因的差别就无关大局。
如果你的处理和对照之间只有一两倍的区别，或者更小，那倒不用费这个劲了。反正最
后的可信度也不
高。
我倒是经常碰到有人煞有介事的说这个比那个高20%--那就更搞笑了。
约5000
cells），很难在reverse transcription 之前通过RNA浓度进行校正，所以我们将所以
的RNA 都
用了逆转录了，结果内参ct值相差很大（wt 和KO之间相差有3个cycle，不过都还低于
30 个
cycle）。 不知道这样的结果出来之后用delta delta Ct方法来分析是否可信？ |
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w***a
发帖数: 4361 | 45 nod,大部分qPCR结果差个20～30%都是搞笑。特别是delta delta Ct方法算出来的。 |
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c******r
发帖数: 3778 | 46 nod，nod，太对了。
Ct值只给出两位数，所以最小差别是0.01个Ct，按照最后一位是不精确估计的考虑，最多只能0.1个Ct的差别可以准确区分。
2^(1+-0.1)=1.86 ~ 2.14。
就是说20%以内的差别都可能是不可避免的系统误差，没有任何意义，吼吼 |
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w******e
发帖数: 1187 | 47 thx a lot! I also assume the interaction to be robust, so I didn't
use the recommended buffer condition.... How long do you let the incubation
go? did you do NP conjugation or slide? How did you measure conjugation
efficiency? I had to use qRT-PCR everytime:(
sorry for more qs:P |
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n********b
发帖数: 27 | 48 There is a Research Associate II position opening in a Genomics-Microarray
Core in a Cancer Center in southern CA-Los Angeles Area. Please send your
resume/CV to o****[email protected], if you are interested
in it. Thanks.
See job descriptions:
Job Descriptions
Research Associate II
Functional Genomics Core
1. Perform bench work related to research projects & services using
different genomic technologies including Affymetrix GeneChip, Agilent, Roche
NimbleGen and Illumina’s HiScanSQ microarray platfo... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 49 I think you are right.
I talked with tech experts in ABI and they suggested the primer should be
the last to dispense. |
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c******r
发帖数: 3778 | 50 我觉得先加样容易cross contaminate啊？ |
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