d*****r
发帖数: 2583 | 1 ☆─────────────────────────────────────☆
Genemo (猜猜) 于 (Wed Jan 7 17:20:41 2009) 提到:
用Qiagen miniprep kit抽质粒
质粒大小 11.4kb
最后几乎没有产物
不知道是没有挂到柱子上还是挂太紧洗不下来了
不过很奇怪
不知道大家有没有遇到过
☆─────────────────────────────────────☆
CAMS (computer aided manufacturing system) 于 (Wed Jan 7 17:24:36 2009) 提到:
kit里面的各种溶液按照要求配好了吗？
☆─────────────────────────────────────☆
ppri (小地主) 于 (Wed Jan 7 17:29:26 2009) 提到:
恩，洗柱那一步的酒精加了吗?
11.4kb 大小是肯定没问题。
☆─────────────────────────────────────☆
iNGOR (葛大爷| 少灌水，多学习 |
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c*****n
发帖数: 195 | 2 哪位可以推荐一下yeast plasmid miniprep可靠的protocol？
万分感谢 |
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L******s
发帖数: 2349 | 3 加glass beads后votex，然后用e coli的miniprep kit就行 |
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h*********g
发帖数: 18 | 4 我用miniprep提取plasmid，得到的DNA太少，后悔没用maxiprep，(I cannot find the
original plasmid) 请问有什么办法补救吗？谢谢。 |
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w********r
发帖数: 1431 | 5 just re-transform your low conc. miniprep plasmid
the |
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y*****g
发帖数: 40 | 6 miniprep的elution buffer好像不是TE，还是冻起来的好。
在TE里面很稳定。 |
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C*****h
发帖数: 926 | 7 miniprep的DNA质量，再怎么也不会太差。
我的经验是，我用miniprep做的virus，比midiprep的要高。
我现在一直就是用miniprep的DNA，做virus，没有出现过问题。 |
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f**e
发帖数: 3343 | 8 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: biokold (kold), 信区: Joke
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 24 00:35:12 2014, 美东)
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 9 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: biokold (kold), 信区: Joke
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 24 00:35:12 2014, 美东)
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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a***a
发帖数: 40617 | 10 而且你说的这些东西，很多都不长久
我们这里之前有一个老中推销过很多便宜东西（miniprep kit，conical tubes之类）
用过以后都有大大小小的问题
比如miniprep kit yield不够，conical tube有发现里面不干净
最后只要有人抱怨，老板就不会用，因为相对于人工和chemical，这些都是毛毛雨小钱
除非老板穷疯了，犯不上省这个钱 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 11 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: biokold (kold), 信区: Joke
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 24 00:35:12 2014, 美东)
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换m... 阅读全帖 |
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b*****d
发帖数: 7166 | 12 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换medium。Dr. 胡又吩咐范
博道：“你如今既中了PLoS ONE，凡事要立起个体统来。比如我这行事里，都是些正经
有脸面的人，又是你的同事，你怎敢在我们跟前装大?若是实验室门口这些提质粒的，
养老鼠的，不过... 阅读全帖 |
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R*s
发帖数: 2041 | 13 ft. 你们用英文是讲不清楚了, 要不就是相互都没pay attention好好看。
GENESIS的意思是不管你用多少细胞，如果你的细胞好，antibiotics质量也好，
ligation做得也clean,那你negative control就应该很clean, 没什么clonie.
跟用了多少细胞没关系。同时ligation plates里应该有大量colonies而且
false positive的比例也应该很少。所以没必要降低细胞量。也没必要因为
clonies多而多做miniprep.
除非你切了后的vector超级sticky, 而且CIP不干净,
导致self-ligation很多（这句偶加的，呵呵）。
当然偶自己做cloning很烂，经常ligation plate才长一个，
一挑还真有insert. 哈哈，倒是省miniprep. |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 14 好久没做miniprep了，实验室换了好几茬儿kit我都不知道。
这两天想做几个miniprep来着，可是发现一堆盒子里都没有qiaprep spin column，只
在冰箱里找到一些MinElute Spin Column，不知道可不可以换着用啊？
不行的话，估计就只能订新的kit了。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 15 看起来你突变后挑菌落做的miniprep量是没问题的，可是size好像差太多了。而且双酶切只有两个酶切位点，和突变之前的质粒差别太大了。我觉得是质粒出错了，会不会转化的时候污染了其他质粒，挑错了菌落。如果miniprep出来的质粒是错的，还用原来的测序引物去测，因为引物不对，当然就测不出来了。
看了一下前面的回复，4楼的同学早就言简意赅的说过了。 |
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b**********8
发帖数: 349 | 16 多谢楼上各位分享经验。看到有人建议用miniprep，可是我要用这个质粒做转染，
miniprep的产物可以直接转染吗？
另外，降低温度可能有效，这个温度有没有具体的范围呢？室温？30度？我昨天晚上又挑了一个放在室温下摇过夜，今早来看发现培养液清亮，应该是没涨起来，刚才又把温度加到30度了，不知道行不行。 |
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W**S
发帖数: 275 | 17 今天悲摧了，generate了一批LENTIVIRUS，结果PURO SELECT之后CELL都死了，这次着
急，没做MIDI PREP，直接用MINIPREP的PLASMID做的TRANSFECTION, PLASMID的质量不
是太好，浓度很低，260/230不太好，同一批用MIDIPREP GENERATE的VIRUS没问题。请
问LENTIVIRUS不WORK会是因为PLASMID的质量不好吗？以前也用MINIPREP的PLASMID做过
，没问题。多谢！ |
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W**S
发帖数: 275 | 18 我以前也用MINIPREP，没问题。这辈子做LENTIVIRUS都没出过问题，今天不知道咋了。
对了，LAB MANAGER图便宜，最近ORDER的是NECLEOBOND的MINIPREP KIT，以前都用
QIAGEN的，这次用这个KIT提完，感觉ELUTE不像TE的感觉，像有DETERGENT是的，一弹
有很多BUBBLE，后来问LAB人，他们用这KIT都做OPTIONAL的AW BUFFER WASH，我没做。
不知道是不是这个原因。 |
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K**G
发帖数: 217 | 20 源地址：http://blog.renren.com/blog/2766/928734149
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换medium。Dr. 胡又吩咐范
博道：“你如今既中了PLoS ONE，凡事要立起个体统来。比如我这行事里，都是些正经
有脸面的人，又是你的同事，你怎敢在我们跟前装大?若是实验室门口这些提质粒的，
养老鼠的，不过是technician，你若同他拱手作揖，平起平坐，这就是坏了学校规矩，
连我脸上都无光了。你是个烂忠厚没用的人，所以这些话我不得不教导你，免得惹人笑
话。”范博道：“胡博... 阅读全帖 |
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d********0
发帖数: 534 | 21 范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换medium。Dr. 胡又吩咐范
博道：“你如今既中了PLoS ONE，凡事要立起个体统来。比如我这行事里，都是些正经
有脸面的人，又是你的同事，你怎敢在我们跟前装大?若是实验室门口这些提质粒的，
养老鼠的，不过是technician，你若同他拱手作揖，平起平坐，这就是坏了学校规矩，
连我脸上都无光了。你是个烂忠厚没用的人，所以这些话我不得不教导你，免得惹人笑
话。”范博道：“胡博见教的是。”Dr. 胡又道：“你师母也来这里做实验。她做了这
么多年lab manager，想... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 17729 | 22 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 23 13:33:06 2014, 美东)
范博做完实验回office，实验室刚来的rotation student、一块搬砖的千老俱各欢喜。
正待烧锅做饭，只见他老板Dr. 胡，手里拿着一盒miniprep柱和一瓶培养基，走了进来
。范博向他作揖，坐下。Dr. 胡道：“我自倒运，把个博后位置给与你这现世宝 ，历
年以来，不知累了我多少。如今不知因我积了甚么德，带挈你中了个PLoS ONE ，我所
以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
实验台边上坐着。Rotation student自和小本科生在细胞间换medium。Dr. 胡又吩咐范
博道：“你如今既中了PLoS ONE，凡事要立起个体统来。比如我这行事里，都是些正经
有脸面的人，又是你的同事，你怎敢在我们跟前装大?若是实验室门口这些提质粒的，
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c********n
发帖数: 225 | 23 实验流程第二步：
2. Transfection
更新前
2-1 NLS-NgAgo expressing plasmid is extracted with Wizard® Plus SV
Minipreps DNA Purification System (Promega), and is adjusted to 100 ng/μl
in 0.5x TE buffer (5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA，pH 8.0).
2-2 5’-phosphorylated ssDNA guides are dissolved to 100 ng/μl in 0.5x TE
buffer (PH 8.0). For each well of a 24-well plate, 200-250 ng NLS-NgAgo
plasmid and 100-300 ng guidesare diluted in 50 μl Opti-MEM (Gibco); 1.25 μ
l lipofectamine 2000 is diluted in 50 μl Opti-MEM.... 阅读全帖 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 24 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: biokold (kold), 信区: Joke
标 题: 转贴：《范博中Cell》， 苦逼千老写照 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 24 00:35:12 2014, 美东)
发信人: dongHei200 (医学小子), 信区: Biology
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以带个培养基来贺你。”范博唯唯连声，叫rotation student把柱和培养基收起来，在
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m*********k
发帖数: 10521 | 25 成功奖励 20 伪币的用户: aibb, allenran917, alvdena, amplifier, apple418,
bandingyuan, bds16, Bosch, bullmoney, bunnymommy, catchafish, ChiChiChi,
coco2011, demonbull, dos, oct4, dudumama219, fbormsft, feibo111, fiercehhll,
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s********r
发帖数: 312 | 26 美国这边也搞这个啊，高中生来lab实习半年到一年，随便跟个人做做玩玩，打打下手
什么的。就是混个经历，写推荐信。而且这个program是加州政府资助的，只要有高中
生去，lab还能拿到点钱，所以老板们也都比较乐意。
这个课题当然不能较真，都是拿graduate student或者postdoc正儿八经project的一部
分抄过来的。我带的那个老墨小妞就这样的，毛都不会，教了半年才能独立把miniprep
，PCR做一做。 |
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j****n
发帖数: 261 | 27 就是啊~~正巧朋友实验室里先后接待过两个这样的，然后都在加州的中学生科技竞赛里
拿了奖，后来去了名校。
所以我觉得国内还是别照搬美国那套申请大学制度了，不然富二代官二代学二代牢牢把
控住机会，屌丝更没机会逆袭。
miniprep |
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L*********2
发帖数: 10195 | 28 只能说你丫的学生太烂，嘿嘿。。。
miniprep |
|
T****u
发帖数: 424 | 29 我想要的物品:
化学生物专业的神医护士进来看看
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准备开拓市场
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看看大家的建议
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email:t***********[email protected]
msn:t***********[email protected]
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物品新旧要求:
邮寄方式要求:
买卖双方谁承担邮寄损失(Required if not code only):
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我的联系方式:
二手交易风险自负！请自行验证是否合法和一手卡！: |
|
T****u
发帖数: 424 | 30 化学生物公司初创
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A******y
发帖数: 2041 | 31 miniprep,
Is your Tier 3 university really a university? or is it a research
institution with a graduate program (hence the low ranking)? It is probably
also smaller compare to the large one like Scripps and Sloan-Kettering. I
will be very worry about its offer if it is from a small research institute
because as far as I know, a lot of them don't really have that much hard
money left. You can actually tell this by checking out if its faculties are
leaving to either bigger or state universitie |
|
T****u
发帖数: 424 | 32 我想要的物品:
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A*********r
发帖数: 2301 | 33 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: Viscount (分成两半的子爵), 信区: Biology
标 题: 生物实验室何时才能实现自动化？
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Oct 11 07:03:05 2014, 美东)
如果一个实验室配齐下列仪器 就是天堂了
miniprep质粒 Qiagen的cube 能自动提质粒
western： 自动洗膜换液机
qPCR： 96孔板自动加样机
细胞计数：细胞自动计数仪
co－IP：自动加抗体洗beads仪
除了分细胞传代好像还不能自动化吧？
电动连续加样枪 电动排枪
然后所有sds gel都买预制的， 养细菌的agar plate、LB， 各种running buffer都有
技术员配好
老鼠genotyping有技术员做
各种buffer都买商用的
省下来的时间喝咖啡灌水逛街，当个千老也不是那么难过的事情了吧
各位说说，实验室还有哪些自动化仪器？ |
|
r****o
发帖数: 105 | 34 1 design primers of ~30 bp length.
2.Use good polymerase to do PCR (herculase from stratagene is great,
a Pfu with special buffer in it to increase the fidelity)
3. add 1~3 ul Dpn I directly to the PCR reaction tube. digest it
for at least 3 hours in 37 degree
4.Desalt the PCR sample with PCR purification kit from Qiagen.
5.Transform competent E.Coli.
6. Pick up several colonies , grow small cultures and do miniprep.
7. Send the DNA to sequencing. |
|
r****o
发帖数: 105 | 35 1 design primers of ~30 bp length.
2.Use good polymerase to do PCR (herculase from stratagene is great,
a Pfu with special buffer in it to increase the fidelity)
3. add 1~3 ul Dpn I directly to the PCR reaction tube. digest it
for at least 3 hours in 37 degree
4.Desalt the PCR sample with PCR purification kit from Qiagen.
5.Transform competent E.Coli.
6. Pick up several colonies , grow small cultures and do miniprep.
7. Send the DNA to sequencing. |
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r****o
发帖数: 105 | 36 对的。我一般是这样，不加insert,长一大堆菌落，加了insert菌落少了
很多，三分之一。但是随便挑几个做miniprep 和restriction digestion,都
有insert 出来。
两个引物的酶切位点旁边要有足够多的保护碱基，我至少用六个bp.这样
对PCR产物的酶切才能充分。另外，引物合成是从3'到5',到了5'端容易出现错误，
如果保护碱基够长，即使合成在5'端出现错误，也只是改变一下保护碱基序列
而已，酶切位点的序列还是正确的。 |
|
c*********e
发帖数: 1 | 37 1. Never expect to isolate a large amount Plasmid DNA from yeast.
2. What I did is:
Incubate lytic enzyme with your yeast for an hour. Then followed the
BioRad kit miniprep protocol, start from lysis solution (equal to solutionII
in classical protocol). I guess kits from other companies are also work.
At the end, elute your DNA from matrix with 20microliter of TE instead of 100
microliter. One microliter of such extract is sufficient for a bacteria
transformation, even though it's CEN plasmi |
|
p*****n
发帖数: 981 | 38 ☆─────────────────────────────────────☆
jacinta (我不做妖很久了) 于 (Wed Jan 31 11:25:54 2007) 提到:
agar plate + kana 长出了克隆后（但是这些克隆长得很奇怪，偏小，每一个周围都有
很多更小的卫星一样的点点）。挑了一些miniprep，3ml + kana，第二天没有任何细菌
长出来！LB清澈透明！
怎么回事？原来板上的那些是假阳性？我是：Insert DNA + pGL3 (already made
before)---> StuI (blunt end) + NocI (to cut some fragment of insert DNA)-->
Klenow make blunt end--> ligation (recirculation) --> transform
如果没有recirulation的话，是不会有克隆的啊。怎么会是假阳性呢？不是假阳性怎么
解释现在不长呢？
☆─────────────────────────────────────☆
mickoal |
|
n****e
发帖数: 13 | 39 这个课题，其实也就是克隆，作了4个月了。其中出了些差错，也作了些改进，但是还
是没作出来。仍在继续中。目前也不知道问题在哪里。比如说长了很多克隆，我挑了作
菌落PCR，用的引物一条是载体的，另一条是插入片段的，能P出来，但是miniprep之后
又再作Pcr就不行了。今天再作一次，结果再看。
撇开实验不谈，现在对老板产生了厌恶情绪。其实老板是个非常nice的人，当我说我进
展不顺，他还要安慰我，推荐我去哪里散心。
我也问他要了个小课题，想以小课题 master毕业。但是刚才又听到他跟labmate（老板
是分配她跟着我克隆和小课题的）说，如果这个克隆课题作不出来，他就要cancel掉小
课题等等，因为克隆课题是个大课题，very important。云云。
这个课题作的我，真的是，人不像人鬼不像鬼啊。去年10月份进的实验室，那时是富有
激情的、一心想在生物界作下去的；但热情很快就被实验打击了。前面PCR都很好，就
卡在克隆这一块了。然后反反复复的－－直至现在，我一点都没心思再去想这个课题，
一想起来就极度厌恶反感。甚至早上醒过来的第一反应就是：怎么办？不想去想，不想
去作。
罗嗦了这么 |
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b******n
发帖数: 4225 | 40 Zymo Research的，价格是相当便宜
不过质量怎么样啊？ |
|
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g*****y
发帖数: 6325 | 43 我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗？ |
|
s******r
发帖数: 2876 | 44 这是low copu number plasmid，
可以参考qiagen的kit manual.
我把这个pET27b(+) empty vector 和 inserted vector 转入xl-10之后不论是
miniprep(2ml culture)还是midi(50ml
culture), DNA产量都很低。 而且260/230也是总是不到2.0， 请问有经验的大虾可以
帮我分析以下吗？ |
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g*****y
发帖数: 6325 | 45 我說得是miniprep DNA的260/230总是低于2。. |
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a***a
发帖数: 40617 | 46 本人多次验证，gel extraction的紫柱子吸附量起码是miniprep那个蓝柱子的2倍 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 47 看了一下Qiagen网上的faq，好像不行，虽然没提MinElute，可是估计道理一样的：
Are QIAprep and QIAquick Spin columns interchangeable?
No. While columns from the QIAprep Spin Miniprep Kit and the QIAquick PCR
Purification- and Gel Extraction Kits are based on silica-gel-membrane
technology, each is designed to work optimally within its own kit format. In
addition, the binding capacity and DNA recovery size cut-offs of the
QIAprep and QIAquick Spin columns are different. QIAprep Spin columns bind
up to 20 ug of plasmid DNA up to |
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t******8
发帖数: 478 | 48 我博士毕业临走的时候，我导师跟我说：你要做好半年什么东西都做不好的准备，新换
一个环境，很多东西要适应的。我刚做薄厚的头2个月连miniprep都做不出来，后来都
崩溃的号啕大哭了。好在我老板超级nice，没什么从他那里来的压力。 |
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m****r
发帖数: 383 | 49 在做一个targeting construct,最后一步了，试图把3'arm 和5'arm连起来，可是试了
数月了，还是不行，miniprep出来的多是些小片断。有人说可能是construct在细菌里
发生了重组，建议平板放低温，在低温下摇菌，我都试过了，无果。大家有什么建议？
多谢。 |
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R*****w
发帖数: 447 | 50 mini你也用P1,P2,P3的吗？
QIAGEN有种QuickLyse Miniprep Kit比这种快多了。我强烈推荐这种Mini kit。 |
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