w******r
发帖数: 10 | 1 听到一帮人中秋节要大办一把party,就想到这个题目。当然指的都是在美国了。偶以
前有一美白室友，只有两大嗜好，不停地看C-SPAN和周末去party。偶有时也跟去。
他们都要比偶年轻，倒也不都是新生fraternity很wild那种，可一去以后，发现互
相也没有几个熟的。小美party，两样东东是不缺的。啤酒和音乐。碰巧，这两样都
是偶喜欢的。偶那town本来就非常地homogeneous, 常常是偶一个非美白混迹其中，
全靠以酒会友。他们有时会玩若干人比谁喝的快，偶从来都是胜出，连偶自己都吃
惊，心想北大真是培养各方面的能力啊。小美party,因为人多，都是买一两个kegs,大
家拿着塑料杯，一按一按地在那儿接啤酒。偶初去的时候，很惊奇，觉得这一桶好
象永远也挤不完的。因为大家都喝酒，所以过了两三小时，bathrooms前就排起队来。
也算是一景。
说到音乐，如果是大的house那一般都是live。小美们别的不提，弄乐器，非常在行，
而且都很响闹。弄的人很high. 有一次不是live的party，偶在一堆功放和音箱旁发
现一个notebook,一问才知放的全是MP3，当场绝倒。 |
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b********s
发帖数: 6928 | 2 我是说，他大姐见到的女生90%都可以被死缠烂打给搞定，看来她见过的女生都很
homogeneous啊 |
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h*d
发帖数: 19309 | 3 发信人: strong (大拿~恭祝清华百年华诞), 信区: TsinghuaCent
标 题: 清华大学的2010
发信站: 水木社区 (Sun Apr 24 14:46:09 2011), 站内
清华大学的2010
注：本文由水木社区BBS世纪清华版（TsinghuaCent）整理，各项资料来自清华大学网
站、清华大学新闻网、北京协和医学院（清华大学医学部）网站和水木社区BBS世纪清
华版等。
正文：
本文系统总结2010年度清华大学、北京协和医学院（清华大学医学部）师生校友荣获的
各类学术和社会荣誉、学科竞赛成绩以及学校在教学科研领域中获得的各类成果和进展
。限于篇幅，在关于各类获奖成果的统计中，本文仅统计获得过一等奖、金奖（国家科
学技术奖除外）以上的成果（绩）。
*********************
一．最高荣誉
●清华大学数学科学中心主任丘成桐教授获得2010年沃尔夫（Wolf）奖，以表彰他在几
何分析领域的贡献，以及在几何和物理的多个领域都产生的“深刻而引人注目的影响”
。这是丘成桐继1982年获得菲尔茨奖后，再... 阅读全帖 |
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s*i
发帖数: 5025 | 4 为什么即使现在这说的社会还有这么样的思维？还这么大的一坨。
稍微有点常识的人，就会知道，中国是非常homogeneous的，跟美国那个年代截然不同。
在中国，差异是存在的，但多数都是积累造成的。勤奋上进总是比懒惰怨妇长久下来好
。人人平等做的很好。 |
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z*i
发帖数: 58873 | 5 这种小的其实基本就是气疯蛋糕的做法，只不过做在小莫子里。
布丁这个词英美意思不一样，咱们那个时候的叫法基本用的英式定义里最广泛的甜点的
意思。
“In the United States, pudding characteristically denotes a sweet milk-
based dessert similar in consistency to egg-based custards, though it may
also refer to other types such as bread and rice pudding.
In the United Kingdom and some Commonwealth countries, pudding refers to
rich, fairly homogeneous starch- or dairy-based desserts such as rice
pudding and Christmas pudding, or, informally, any sweet dish after the main
cour... 阅读全帖 |
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a***y
发帖数: 19743 | 6 今天终于找到了能够总结我对Metro UI的观点的评论：
1. “regarding Windows Phone ’07, Apple offers “a better-designed UI that
doesn’t continuously destroy users’ visual memory.”
2. The sameness made it impossible to find anything. Why anyone would revert
to vague and homogeneous tiles from highly identifiable icons is beyond my
comprehension. Perhaps someone thinks it’s more artsy.”
3. “People sense something is wrong. The miserable sales of the Phone 7
products reflect the user sensitivity,” Dvorak writes. “So what do... 阅读全帖 |
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f********x
发帖数: 99 | 7 The world beyond batch: Streaming 101: A high-level tour of modern data-
processing concept
http://radar.oreilly.com/2015/08/the-world-beyond-batch-streami
by Tyler Akidau August 5, 2015
Editor’s note: This is the first post in a two-part series about the
evolution of data processing, with a focus on streaming systems, unbounded
data sets, and the future of big data.
Streaming data processing is a big deal in big data these days, and for good
reasons. Amongst them:
Businesses crave ever more tim... 阅读全帖 |
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M****e
发帖数: 70 | 8 you should set constant VOLTAGE instead of CURRENT.
i use semidry from BioRad, and it works very nice for my
western. set to 15V, transfer @ RT for 1hr to 1.5hr. i never
think that all the protein could be transferred onto the
membrane. and thus to make a homogenous sandwitch is very
important, which means that you treat the gel, the membrane,
as well as the blotting paper very equally well.
think about this, it is the electric field that pushes the
charged molecules to move rather than the curr |
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M****e
发帖数: 70 | 9 i worked with long bone (i.e., femur and tibia). i wonder which
part of the skeleton that you are dealing with, as well, the
age of the mice. i flushed bone marrow out after i got rid of
the muscle. the quantity is not bad, given the fact that there
are many osteoblasts in the growth plate; however, as i have
said, the total amount should not be very high at all. so my
advice would be, try to collect several parts together, remove
the muscle in cold PBS ASAP, and homogenize (polytron) in TRI
ASA |
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f******s
发帖数: 115 | 10 可是qiagen说明书有这么一句话：
6. After storage, purify RNA using a QIAGEN kit (see Table 1, page 8).
Be sure to remove tissues from RNAlater RNA Stabilization Reagent prior to
disruption and homogenization in the RNA purification procedure. If tissues
were stored at –20°C, remove any crystals that may have formed.
他们说的”remove any crystals that may have formed“到底是往哪里remove是要还
是不要？而还有个问题，sample在rna later中放置久了会不会造成sample丢失？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 我们需要homogenize 一批量很小的放射标志过的cultured cells,
并把chromosome DNA 打碎（好来做pulldown).
但是用sonicator 或者针头都不是很好的选择，因为sonicator 容易把样品
溅出来，而针头会有很多残留，不是很适合做quantitative analysis.
我知道有一些cell shredder的小管子是用来制备RNA sample的，可以把
细胞完全裂解。不知道有没有类似的东西可以用来裂解细胞制备总蛋白的？
有没有人知道？ 谢谢了！ |
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D******9
发帖数: 2665 | 12 do you freeze the sample in liquid nitrogen or -80 first? When you
homogenize the tissue, do you also add some liquid nitrogen into it? Thx |
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S*****s
发帖数: 287 | 13 我用的老鼠大脑是以前取下来 fresh frozen 的。这样的脑子既可以用来切片也可以用
来提蛋白或者 RNA。如果你有新鲜的大脑效果应该更好。如果你只是用来提蛋白可以把
冻好的脑组织放在加了 protease inhibitor 的 RIPA 里面解冻，然后在 RIPA 里面
homogenize。你说的那个加液氮粉碎组织的我也做过，不过是把组织粉碎之后提 RNA
用的，那个还要用专门的冷冻好的 mortar pestal，蛋白不需要这么苛刻的条件。 |
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j*****y
发帖数: 94 | 14 我现在的蛋白是个his-tagged homo dimer，我想把 WT 和 active-site mutant 放在
一起组成一个heterodimer.
请问大虾有没有什么好的办法能够得到这样一个homogeneous population 的
heterodimer ?
谢谢 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 15 假设你说的是小鼠。一般是取胫骨和股骨。一共4根骨头的骨髓绝对不少。每根骨头提
出10^7细胞没有问题。应该比1盘10cm的细胞多。每次取完，放在pbs里冲散，计数看一
下。不应该象你说的产量那么少。可惜离普大太远，不然可以表演给你看。
用trizol提rna，不用过液氮。只要homogenize了，trizol可以有效保护rna。4度冰箱
里放个把星期没问题。
是不是因为液氮这样的低温影响了trizol，我就没有经验了。 |
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l*********s
发帖数: 5409 | 16 no. the power of linkage analysis is derived from the control by homogeneous
genetic background. your understanding is the opposite of the truth, imho. |
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w******e
发帖数: 1187 | 17 tissue homogenization用。要求能从liquid nitrogen里拿出来后直接用温水
冲洗然后再直接放回liquid nitrogen做下一个sample。
多谢！！ |
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o********r
发帖数: 775 | 18 Primary tumor is rarely a homogeneous population. |
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y******8
发帖数: 1764 | 19 Eventhough the population is not homogeneous, I think they share some
signature changes, which define them as tumor cells.
So, the reference did not make a strong argument.
72079, |
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s*****g
发帖数: 731 | 20 恩，用lung homogenates,我的意思是sample数目太多，造成分析起来可能太贵。比如
打病毒后测5个时间点。wild type跟mutant的病毒各一组，每组5只老鼠。这样就有5×
2×5 = 50个sample了。感觉相当费钱。 |
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b******s
发帖数: 1089 | 21 Thanks! Good explaination and I found it is similar to many other EM experts
' opinion. Actually HPF also causes artifacts and it won't be able to fix
well large samples.
My work is to find out what pathways the protein use to be secreted. One of
tools I am using now is to use immunoEM to localize proteins to sub-cellular
structures. I know the combination of multiple evidence would be important
to convince people. I will try to homogenize tissues and do the western. But
according to my PI, west... 阅读全帖 |
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w******a
发帖数: 1527 | 22 Check this one:
Reagents
* TRIzol from Invitrogen #15596-108.
* Mini RNeasy plus kit from Qiagen #74134.
* Phase lock gel from Eppendorf #2302830.
* Keep TRIzol at 4C.
* Use RNase-free tubes and tips for all steps.
* Prepare 70% ethanol using DEPC-H2O and keep it at -20C.
RNeasy plus kit contains a genomic DNA elimination column. It can replace
the DNase I digestion step of regular RNeasy kit.
1. Add 1.2 ml TRIzol reagent to cells/tissues (5~10X 106 cells/ml or 50~100
mg ... 阅读全帖 |
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z***x
发帖数: 80 | 23 I have no experience of isolating RNA from cartilage but need to do it soon.
Cartilage contains a lot of proteoglycans and glycosaminoglycans (GAGs). I
first homogenized cartilage into powders by freeze-milling. I then tried
guanidine and phenol to dissolve the cartilage powder but it was not quite
efficient. Most of the 100mg of cartilage powder was not dissolved in 2 ml
guanidine/phenol (Qiagen tissue lysis reagent).
The other question is that RNA and GAGs are both negatively charged polymers
... 阅读全帖 |
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s******s
发帖数: 13035 | 24 如果不是很sensitive的assay,试着用0.1%的triton一类
homogenize以后过0.2um的filter |
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B*****n
发帖数: 5 | 25 Anyone has inside information on this issue ?
http://www.gmwatch.org/component/content/article/11573-gm-indus
In the US, under the Federal Food, Drug and Cosmetic Act of 1938, the FDA is
responsible for ensuring that food is safe to eat, although by statute, it
regulates only food additives. By that definition, most crops are exempt
from FDA approval, although companies tasked with ensuring their products
are safe often voluntarily submit a considerable amount of information.
Certain types of co... 阅读全帖 |
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d**********2
发帖数: 103 | 26 小弟想向各位大虾问一下caspase 3/7 的问题：）
用得是promega 的 Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay kit
小弟想 用不同GFP融合蛋白转染293T 细胞然后用这个KIT监测Caspase-3/7 的活性 但
是结果很奇怪
用Staurosporine(10uM, 5H)诱导细胞凋亡所产生的信号比GFP空载转染的细胞的信号还
低。。。
所以想问问到底是什么问题。。。 |
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c********u
发帖数: 250 | 27 今天做western，blot with anti-atubulin as loading control,为毛所有其它tissue都
好就是liver一点点信号都没有啊，俺用的是RIPA buffer to homogenize tissues，谢
谢先 |
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d**********2
发帖数: 103 | 28 大虾们好。。。
小弟最近在转染293T来筛选能激活CASPASE3 的蛋白。。。
先是用了promega 的Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay来检测caspase 3
激活。。。
但是负对照和staurosporin 处理的细胞没有区别。。。
转而用santa cruz 的caspase 3 抗体（caspase-3 (H-277): sc-7148）检测p17/p19
也未果。。。只能见到全场的
caspase 3 。。。staurosporin 浓度1ug/ml, 5H 。。。都可以看到细胞明显的形态变
化了。。。甚至看到细胞内很多小
泡泡。。 (凋亡小体)？...
迷茫啊。。。各位觉得是抗体/试剂盒/细胞株还是staurosporin有问题呢？请各位不吝
赐教啊。。。。
谢谢～～ |
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s******n
发帖数: 63 | 29 这好像是第二次发咯，楼主求建议的时候最好把自己的问题简洁、严肃的描述出来，虽
说是bbs，不是什么学术场合，但是你自己都不严肃，别人又怎么会认真呢？
caspase 3的p17/p19不太好做，可能要多试几种抗体。
promega 的Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay实验组和对照组没区别：
staurosporin的浓度、刺激时间预实验要摸索一下，
caspase-3转染的浓度要低一些，稍微一过量就自激活，细胞就都死了。
另外就是设阳性对照啊，引起caspase-3激活的刺激应该不止staurosporin吧，找个最
稳定的刺激作为阳性对照。 |
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s******n
发帖数: 63 | 30 这好像是第二次发咯，楼主求建议的时候最好把自己的问题简洁、严肃的描述出来，虽
说是bbs，不是什么学术场合，但是你自己都不严肃，别人又怎么会认真呢？
caspase 3的p17/p19不太好做，可能要多试几种抗体。
promega 的Apo-ONE® Homogeneous Caspase-3/7 Assay实验组和对照组没区别：
staurosporin的浓度、刺激时间预实验要摸索一下，
caspase-3转染的浓度要低一些，稍微一过量就自激活，细胞就都死了。
另外就是设阳性对照啊，引起caspase-3激活的刺激应该不止staurosporin吧，找个最
稳定的刺激作为阳性对照。 |
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s****a
发帖数: 454 | 31 Thank you so much for replying.
I will add CHX in my homogenization.Will 100ug/ml work?
I wondered whether the height of the peak is related to the sample size and
type? I used 30mg of mouse myocardium.
Shall I pool fractions from 11 to 19 and isolate RNA for RT-PCR? |
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n*********b
发帖数: 140 | 32 Very nice discussion.
Regarding the method of CR, there are standards. There is also one or
several methods of dietary restriction.
Single diet may not be an accurate term here, but it was meant to express
the same composition of CR for cohort analysis. In almost all experiments,
researchers start CR at a very young age and maintain the same diet for the
lifespan. But there are only a few studies comparing the lifespan of lab
animals and their counterpart in wild. It is almost certain that t... 阅读全帖 |
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W*******a
发帖数: 1769 | 33 你要tweak FACS才能收集aggregate，因为它default是要把所有不是single cell
event都排除掉的。此外cell aggregate形状不规则，你很难收集一个homogenous的
sample，会有很大的样本偏差。如果你规定只收集2 cell的，倒是还可能比较纯
sort? |
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s******y
发帖数: 220 | 34 不小心被扎了，扎的不深，但是出血了。
针里是小鼠组织放在buffer里面，组织已经被homogenize过了
那个buffer里面都是好东西，dtt, sds,还有proteinase inhibitor，
我用dd water冲了，然后又用酒精冲了， 把血挤出来了一点，然后用bandage包了。
不会有问题吧，要去医院吗？
已经半个小时了，不会明早起来，手就没法用了吧？
好害怕啊.
求救！！！！ |
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b******e
发帖数: 3348 | 35 我只做过cell culture,对mouse model一窍不通，
做肿瘤westernblot的话是不是可以可以和细胞一样直接在sds-dtt buffer里
homogenize sample,煮沸 然后run, |
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w*****3
发帖数: 1582 | 36 我做过人的
For preparation of protein extracts, renal tumor tissue was pulverized with
a mortar under liquid nitrogen and suspended on ice in lysis buffer (20 mM
Hepes, pH 7.7, 0.2 M NaCl, 1.5 mM MgCl2, 0.4 mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.5
mM DTT, 100 µg/ml leupeptin, 100 µg/ml aprotinin, 10 mM
benzamidine, 2 mM phenylmethylsulphonyl fluoride, 20 mM -
glycerophosphate, and 0.1 mM sodium-orthovanadate).
然后加 sds-dtt buffer里 homogenize sample,煮沸 然后run,
跟细胞不同的是非常容易degradation. |
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p*7
发帖数: 45 | 37 这篇文章确实很有意思，角度新，结果明确。
不过说点体外话，里面一个检测干细胞主要实验就是看在老鼠里是否长成肿瘤，用胚胎
干细胞结果是阳性的，用 iPS细胞则是阴性的，然后作者发现iPS在体内引起免疫排斥
反应，结论就是iPS可能不使用于干细胞治疗。（我只是粗略看了一下，也不是干这个
的，如果有误，欢迎内行拍砖）。
另外，我的感觉是整个实验并不能用来全盘否定iPS的实际应用，恰恰相反，这表明iPS
相比胚胎干细胞的致癌的可能性更小（应为实验结果是这样）。
还有感觉还不清楚是不是每个打进去的iPS细胞都被免疫系统杀死，至少有很多实验表
明iPS不一定是 homogeneous 的，所以也得看看有没有少部分打进去的细胞是不是能存
活下来，并整合到了体内标靶组织。 |
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i**o
发帖数: 76 | 38 http://www.nature.com/nmeth/journal/v8/n4s/full/nmeth.1557.html
The method for the isolation of individual cells can vary. Picking single
cells manually using a mouth pipette is the most straightforward option30,
41, although this can be time-consuming and technically challenging. Laser-
assisted microdissection or fluorescence-activated cell sorting can also be
used to isolate a specific subpopulation of cells based on cell-surface
markers or fluorescent reporters42, 43, 44, 45. Cells of higher... 阅读全帖 |
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c***e
发帖数: 174 | 39 我的问题就是：我准备样品的时候，需要control/treated的动物的tissue一样重或者
100%取下来，最后的结果control/treated才可以比较吗？
：：理论上应该取100％，但是因为常常细胞数太多，可以homogenize之后跑同样的
percentage。比如都跑总sample的10％
flow cytometry最后的那个结果,反映的是某种polulation的cell的分布百分比,这个概
念对吗？我们每次杀动物的时候，那个tissue都很100%难取下来，每只动物都只能取下
一部分。
：：反应的是某种population 的百分比。尽量多取吧，如果tissue是均质的，你也可
以只取一部分，比如如果是肝脏细胞，但是如果你想看的population不均匀分布在
tissue里，就最好都取，才能最客观的反应在总的population里的百分比。当然你可以
不必要都跑完，原理如上。 |
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b********h
发帖数: 348 | 40 再补充1小点。没包子也没关系，因为10块钱也太少了，看不上 ：）
我的问题就是：我准备样品的时候，需要control/treated的动物的tissue一样重或者
100%取下来，最后的结果control/treated才可以比较吗？
：：理论上应该取100％，但是因为常常细胞数太多，可以homogenize之后跑同样的
percentage。比如都跑总sample的10％
--这个不一定，只要是均质的组织细胞，取够染色的细胞量就够了。因为如下所述，最
终得出的是各个细胞所占的百分比。
****需要注意每个sample染色的时候ideally是1个million，细胞太多抗体量不够，BD
抗体一般是按着1微升/1million细胞/100微升体积里.
flow cytometry最后的那个结果,反映的是某种polulation的cell的分布百分比,这个概
念对吗？我们每次杀动物的时候，那个tissue都很100%难取下来，每只动物都只能取下
一部分。
：：反应的是某种population 的百分比。尽量多取吧，如果tissue是均质的，你也可
以只取一部分，比如如果是肝脏细胞，但是如... 阅读全帖 |
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A********2
发帖数: 107 | 41 本来真的不想评论了,但是还是不小心看了一眼你给的连接,确实比较欢乐.就说一条把,
你总结的进化电线杆.您的意思是说地球是从地球上有生命开始,大家就呆在一个地方,
这个地方的自然环境条件绝对的homogeneous,然后弱的被淘汰,强的留下,大家还都坚持
着互相交配,管他行不行的,然后就只有一个物种了,这也太欢乐了吧. |
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p*******n
发帖数: 6 | 42 yes, you got my question.
The mutant comes with an Ab-resistant marker.
I am culture phage with mutant strain, and then collect the phage from
plaques by homogenizing the agar chunks. However, these phage do not produce
Ab resistant colonies on the Ab-selective plates.
I am wondering if only the lysogens can carry the mutant gene with Ab
resistance marker.
Thank you for replying me.
it |
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o*****l
发帖数: 172 | 43 系里的一个PI告诉我的，说HL-1没法像普通的293细胞那样pick single colony,因为那
样他们就长不起来了，只能挑一个cluster，如果我没有理解错的话，这样homogeneity
没法保证很理想了。不过他坚持说要建stable line还是能建的，因为他以前做出来过
。。。
当然我自己没有试过，不知道是不是这么一回事，这种事一般paper也不会写。。。
最好再找别人打听打听。。。。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 44 谢谢！
其实我是用荧光蛋白来做筛选的，所以应该比较容易一些。
homogeneity |
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s******a
发帖数: 252 | 45 Don't FACS. Even if the FACS process doesn't change the gene expression of
your cells, it may artificially homogenize your tissue. We tried sorted
cells before and got very weak data. This is not universal, but it's easier
to think about cell composition in a strong signal than to think about gene
regulation out of nothing. |
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s******e
发帖数: 370 | 46 glass homogenizer?
not sure how small your samples are... |
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w*****a
发帖数: 437 | 47 谢谢回答，10天鼠胚胎的小心脏，可能不够塞homogenizer的牙缝~~ |
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w*****a
发帖数: 437 | 48 感兴趣这个快速typing的方法。我们现在该是最common的吧，5% PK O/N，然后
saturated NaCl，100% ETOH, 70% ETOH。Maintain 80笼老鼠typing到都快吐了。。
可以请教是什么enzyme? Kappa的fast PCR 也没用过，呵呵。。
tissue
homogenizer里面被粉碎是件很过瘾 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 49 我们实验室都是用得bead homogenizer来打碎组织的
根据组织不同用不同材料和大小的beads,和tissue一起放在trizol里面打 |
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