T**********t
发帖数: 1604 | 1 Ethanol precipitation啊。普通离心机总有吧。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 4 有一种离心真空泵，不加热就能把水蒸发一部分，就浓缩了。 |
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f*****e
发帖数: 223 | 5 懒人的懒办法，管子放到hood里，过一夜就差不多了 |
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s******s
发帖数: 13035 | 6 介绍两个好东西，那是相当的方便啊，做分子实验不可或缺
Qiagen有一种很好用的柱子，叫做minElute，elution体积10ul.
可几乎所有的resin柱子一样的protocol。
如果你DNA量比较大，millipore有一种size filter的的小柱
子，你选个10,000MW cutoff的柱子，普通离心把小分子和多数
水分离掉，然后倒过来放在Epp管里离一下把浓缩的蛋白、dna/
RNA, whatever回收就行了。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 7 不知道LZ的制备级是指多大量？其实一般3-5ml的柱子就能解决大部分需求了。
我以前一直是GE的忠实用户，整天在ATKA上折腾。现在我全面转向Pierce的柱子了，他
家有0.2, 1 and 3 ml的centrifuged columns，nickle和cobalt都有，都很方便。最大
的优点是可以同时纯化多个蛋白。3 ml的Ni柱子理论可以纯化到>100 mg，Co柱子能到
30 mg.Co柱子非常好，我已经用它一步纯化超过5个蛋白做结晶，全部成功。 |
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V**3
发帖数: 12756 | 8 用centrifuged column 你无法用buffer gradient吧？
莫非就来几个step 就完了？ |
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b*******n
发帖数: 605 | 9 目前用的是Jackson lab的quick dirty protocol, 如下：
NaOH extraction (quick "dirty" DNA preparation). Reference: Truett GE et al.
2000. Biotechniques 29(1):52-54
Cut 2mm of tail and place into an Eppendorf tube or 96-well plate
Add 75ul 25mM NaOH / 0.2 mM EDTA
Place in thermocycler at 98ºC for 1 hour, then reduce the
temperature to 15°C until ready to proceed to the next step
Add 75ul of 40 mM Tris HCl (pH 5.5)
Centrifuge at 4000rpm for 3 minutes
Take an aliquot for PCR (use... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 10 En
温习一下 其十一年前的豪言 啊
中国科学：显著的发展和严峻的挑战
——历史演变和现状比较
于2001年12月4日 1st version
饶毅
本文在简要回顾中国科学史的基础上，介绍一些近年研究的内容，肯定中国
科学令人乐观的进步，并讨论可能的意义。同时也指出，中国优秀论文总量仍不
到世界的百分之一，低于中国经济在世界所占的百分比、也不能适应中国持续发
展的要求。中国科学的规模需要相当程度的扩大、质量有待进一步提高。中国科
技还存在面临许多问题和挑战。
中国科学历史上的优秀例子
一个国家科学研究状况可以近似地由发表论文的情况所反映。以下，本文主
要从生命科学的研究来讨论中国科学的情况，一方面这是我有一定判断力的领域，
另一方面生命科学是科学技术最重要的组成部分之一，可以反映科学主流。讨论
中国论文发表情况前，先谈两个背景：中国科学的历史情况，优秀科学和著名杂
志的关系。
奠定中国生命科学研究是二、三十年代协和医学院生理系林可胜和生化系吴
宪。他们不仅自己研究出色，而且培养和带领了其他研究者。林可胜在胃肠道生
理和神经生理有优秀工作。1942年，他在中国当选为美国科学院外籍院士，是... 阅读全帖 |
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i***l
发帖数: 1656 | 12 分crude membrane and cytosolic fraction, how crude? sure 100% seperated by
centrifugation?
用cofocal看却看到在 everywhere, marker? plasma- membrane and introcellular
vesicle markers? |
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a******a
发帖数: 283 | 13 ask a question in this thread: regarding genomic DNA purification. I will be
doing about the same project -- qPCR genomic DNA for the amount of gene
inserts after transfecting the cells with retroviral vectors.
My plan is to transfect the cell culture on day 1; then on day3, harvest
cells and collect genomic DNA. at this point, how to eliminate the plasmids
present in the cells (if there is still any left without incorporating in
the genome)? would centrifugation alone enough to get rid of most ... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 14 No, centrifugation will not separate plasmid DNA from genomic DNA.
be
plasmids |
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L****S
发帖数: 76 | 15 three possible ways to solve this problem:
(1) Coat the 12-well-plates with vitrogen before plating cells:1/45 dilution
in 1X PBS overnight; 420μl/well;
vitrogen is from Advanced BioMatrix, Inc (5005-B)
Aspirate the nitrogen/PBS before plating cells
This will increase the adhesion.
(2) Collect used medium together with cells when you change medium, then
centrifuge at 1000 rpm (about 500 g, I am not sure, but any speed can pellet
cells without breaking should be ok) for 5 minutes, vacuum the medi... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 16 CA630 1%
Immunoprecipitation of IMC components. Highly synchronized late-stage
parasites were purified over 70% (wt/vol) Percoll, and proteins were
extracted by
incubating them on ice for 15 min in RIPA buffer (1%
octylphenoxypolyethoxyethanol
[IGEPAL CA-630], 150 mM NaCl, 0.5% sodium deoxycholate
[DOC], 0.1% sodium dodecyl sulfate [SDS], 50 mM Tris, pH 7.4). Soluble and
insoluble fractions were separated by centrifugation at 12,000 g for 10
min at
4°C. Soluble lysates were incubated for 1 h... 阅读全帖 |
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J*****n
发帖数: 1041 | 17 用TCA沉淀蛋白，溶解蛋白的溶液中有大概1%的去垢剂NP-40，所以在加入Na-
deoxycholate （DOC）就有很多沉淀出来，不知道会不会对蛋白得率有影响？
many thanks in advance!
这个是protocol
1. to one volume protein, add 1/100 volume of 2% DOC, keep on ice for 15 min
2. add 1/10 volume 100% TCA and keep on ice for 1 hr
3. centrifuge at 10,000 g for 10 min at 4C
4. wash the pellet in acetone to get rid of residual TCA
5. resolubilise the pellet in appropriate buffer, and add Laemmli sample
treatment buffer to protein solution
6. SDS-PAGE |
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c*******4
发帖数: 41 | 18 My protein is around 20kDa, and I see many degraded protein bands (from
10kDa to 3kDa) on the gel. I tried to wash my protein several times using
the amicon centrifugal filter at 10kDa cutoff, but I still see those
degraded protein bands on the gels. I also add proteinase inhibitor and also
do the purification on ice to prevent the degradation, but it does not help
. Does anyone know what is the best way to purify or get ride of these
degraded protein bands on the gel? thanks. |
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s******y
发帖数: 28562 | 19 Polysome purification and fractionation
(Based on Davies & Abe, 1995, Methods in Cell Biology, Vol 50, Chapter 15)
1. Prepare 4.6ml 15-60% sucrose gradients in 5ml polyallomer tubes (Beckman
#326819) by
pipetting 2.3ml of 60% sucrose in buffer B followed by 2.3ml of 15% sucrose
in buffer B
(slowly, drop by drop, against the wall). Cap the tubes with rubber stoppers
and lay tubes
horizontally for 3h @RT for sucrose to diffuse (or for 2h if making 10-40%
gradient). Place the
tubes again vertically... 阅读全帖 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 20 Adult neuronal culture is indeed very tricky. And most of what you get is
debris.
But to dissect out cerebral cortex is easy. By 软脑膜, do you mean meninges?
You can actually start from inside. Use a sharp pair of tweezers to snip out
the meniges on the outside, then flip open the hemisphere, there you will
be able to identify hippocampus and cerebral cortex. You can use tweezers to
snip out cortical pieces.
There will be a lot of debris (actually the majority of the fresh tissue
culture will be d... 阅读全帖 |
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d*******3
发帖数: 8598 | 21 J Gene Med. 2007 Jul;9(7):579-84.
Optimized production and concentration of lentiviral vectors containing
large inserts.
al Yacoub N, Romanowska M, Haritonova N, Foerster J.
Author information
Abstract
Generation of high titer lentiviral stocks and efficient virus concentration
are central to maximize the utility of lentiviral technology. Here we
evaluate published protocols for lentivirus production on a range of
transfer vectors differing in size (7.5-13.2 kb). We present a modified
virus prod... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 不太懂你在问什么。你是想找一个方法来分开不同大小的球状物体（Sphere）？ 还是
想找一种作为尺度分离柱(size exclusion column)的树脂胶体（resin Sphere)？
对于蛋白和特别小的球状物体（小于10nm)，可以用滤膜或者分离柱来分开。分离柱材
料最常见的就是sephedex, 不同规格有不同的分离能力，具体看产品标定。
对于球状物体，如果体积比较大（超过10nm)，可以用gradient centrifugation离心法
来分离。 |
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I********e
发帖数: 131 | 23 NJ大药厂,Job description见下,perfer Ph.D, master也考虑.有兴趣的话站内联系.
Scientist - Process Engineering Job Description:
The Scientist will involve conducting monoclonal antibody purification
process development to support the development, optimization and
manufacturing of biologics covering different therapeutic areas. Scope of
work may include, but are not limited to, protein purification, purification
process development, novel purification technologies, data analysis and
project reporting. The candidate i... 阅读全帖 |
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j****x
发帖数: 1704 | 24 更简单的办法是超滤浓缩，millipore的100K Ultra Centrifugal Filter，可以直接浓
缩100-200倍。
4质粒共转染293T/293FT细胞，隔天换液，3天后收上清，然后超滤浓缩，浓缩后的病毒
直接感染靶细胞，效果会比冻融之后的好几倍到一个数量级。 |
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k****l
发帖数: 279 | 26 cscl centrifugation if the GC content is different |
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r****1
发帖数: 2299 | 27 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: quix (hardworking...smartworking), 信区: Joke
标 题: 万年生物泼石岛看了Jurassic World 内牛满面。。。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 5 13:19:31 2015, 美东)
发信人: mbp (Mac Book Pro), 信区: WaterWorld
标 题: 万年生物泼石岛看了Jurassic World 内牛满面。。。
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 5 12:57:33 2015, 美东)
国庆日和lab的几个老中，老韩，老美万年生物泼石岛 跑pcr期间 去看了场imax的
Jurassic World 。搞了个visa的10$ off 加上student id discount，反正卖票妹子不
查年龄。
万年生物泼石岛最震撼吓尿的，不是特效，不是剧情，而是Dr. Woo的那个lab！
想想自己在lab做的都是搞Drosophila, xenopus,顶多上个rat，平时也跑跑胶，写
script，弄pcr，顶多弄个... 阅读全帖 |
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d**m
发帖数: 536 | 28 【 以下文字转载自 Joke 讨论区 】
发信人: superapc (apc), 信区: Joke
标 题: 万年生物泼石岛看了Jurassic World 内牛满面。。。 (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 19 03:37:23 2015, 美东)
发信人: mbp (Mac Book Pro), 信区: WaterWorld
标 题: 万年生物泼石岛看了Jurassic World 内牛满面。。。
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 5 12:57:33 2015, 美东)
国庆日和lab的几个老中，老韩，老美万年生物泼石岛 跑pcr期间 去看了场imax的
Jurassic World 。搞了个visa的10$ off 加上student id discount，反正卖票妹子不
查年龄。
万年生物泼石岛最震撼吓尿的，不是特效，不是剧情，而是Dr. Woo的那个lab！
想想自己在lab做的都是搞Drosophila, xenopus,顶多上个rat，平时也跑跑胶，写
script，弄pcr，顶多弄个chipseq好发paper， 看看人... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 29 我不是说测序仪这种高大上的仪器，而是所有稍微有点技术含量的仪器，中国都不能做
。别的例子就不用说了，商用的高速离心机，比方说我们天天用的beckman centrifuge
，中国就是造不出来的。这个还不是竞争不过别人所以不造（很多国家都能造这个，但
是因为竞争不过那几个商业巨头所以不去造），而就是中国的厂家真的就造不出来，因
为合金技术不过关。其他技术含量稍微低一点的，比方说细菌摇床，几年前听到的说法
是国产的几乎不能用因为非常不可靠，现在不知道有没有改进。
另外，测序仪这个东西其实还不是世界上其他国家造不出来，而是因为有专利堡垒所以
不能去造吧。 |
|
f**u
发帖数: 346 | 30 我觉得后发国家总是会有这样的问题。一个产业都成熟了你在想从头开始弄个公司会很
难，尤其是如果这个产业有一定的门槛的话。这个还真得慢慢来。
我觉得中国应该不是技术上造不出离心机，铀浓缩都做得到这个还能做不到。
这些技术中国应该是都有的，但是要把他们都拼起来，还要弄出有市场竞争力的产品，
不容易。
从商业角度，让一个产品有市场竞争力一点也不比突破制造技术本身容易。看看老毛子
吧，到目前基本上也没有太多他们技术上造不出的东西，但是基本没一样他们造的东西
有市场竞争力。
centrifuge |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 浓缩铀不是一个好例子。因为浓缩铀需要的是非常大型的，低速度长期运转的离心机。
Beckman centrifuge 里面用的转子则是那种小型的，高速度的转子，这个需要特殊的
钛合金。在我听来的说法是国内根本没有什么厂家可以生产这种钛合金。因为配方和工
艺跟不上。
有好比高精度的光刻机，根本就不是有没有市场竞争力的问题，而是中国根本就不具备
那个技术。所以中国的商用芯片（包括什么龙芯汉芯）都必须依赖境外的企业来给他们
流片，自己都生产不出来。
至于俄罗斯，他们的东西的确没有什么市场竞争力，但是他们倒是可以生产这种离心机
的，如果他们愿意的话。 |
|
w***r
发帖数: 709 | 32 这人就是爱抬杠，看看他搞出啥牛逼东西来。要不然，对不起这脾气
centrifuge |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 我不是说测序仪这种高大上的仪器，而是所有稍微有点技术含量的仪器，中国都不能做
。别的例子就不用说了，商用的高速离心机，比方说我们天天用的beckman centrifuge
，中国就是造不出来的。这个还不是竞争不过别人所以不造（很多国家都能造这个，但
是因为竞争不过那几个商业巨头所以不去造），而就是中国的厂家真的就造不出来，因
为合金技术不过关。其他技术含量稍微低一点的，比方说细菌摇床，几年前听到的说法
是国产的几乎不能用因为非常不可靠，现在不知道有没有改进。
另外，测序仪这个东西其实还不是世界上其他国家造不出来，而是因为有专利堡垒所以
不能去造吧。 |
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f**u
发帖数: 346 | 34 我觉得后发国家总是会有这样的问题。一个产业都成熟了你在想从头开始弄个公司会很
难，尤其是如果这个产业有一定的门槛的话。这个还真得慢慢来。
我觉得中国应该不是技术上造不出离心机，铀浓缩都做得到这个还能做不到。
这些技术中国应该是都有的，但是要把他们都拼起来，还要弄出有市场竞争力的产品，
不容易。
从商业角度，让一个产品有市场竞争力一点也不比突破制造技术本身容易。看看老毛子
吧，到目前基本上也没有太多他们技术上造不出的东西，但是基本没一样他们造的东西
有市场竞争力。
centrifuge |
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s******y
发帖数: 28562 | 35 浓缩铀不是一个好例子。因为浓缩铀需要的是非常大型的，低速度长期运转的离心机。
Beckman centrifuge 里面用的转子则是那种小型的，高速度的转子，这个需要特殊的
钛合金。在我听来的说法是国内根本没有什么厂家可以生产这种钛合金。因为配方和工
艺跟不上。
有好比高精度的光刻机，根本就不是有没有市场竞争力的问题，而是中国根本就不具备
那个技术。所以中国的商用芯片（包括什么龙芯汉芯）都必须依赖境外的企业来给他们
流片，自己都生产不出来。
至于俄罗斯，他们的东西的确没有什么市场竞争力，但是他们倒是可以生产这种离心机
的，如果他们愿意的话。 |
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w***r
发帖数: 709 | 36 这人就是爱抬杠，看看他搞出啥牛逼东西来。要不然，对不起这脾气
centrifuge |
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n***w
发帖数: 2405 | 37 check this article for methods.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8621645
basically, if you have pellets from 10cm plates, resuspend the pellets in
500ul 500 mM sodium carbonate (pH 11), sonicate (3X/15 s). The lysate is
mixed with an equal volume of MES-buffered saline containing 90% sucrose and
centrifuged on discontinuous sucrose gradient (45%, 35% and 5%) for 16 h at
175,000 g and fractions will be collected for analysis.
, |
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v********e
发帖数: 1597 | 38 wash cell by PBS, add NP-40 buffer in wells, suspend the cell by 200ul
peptide, on ice 20min. collect sup to ep tube, centrifuge at >14000xg at 4
degree, 20 min, harvest the sup |
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l*****7
发帖数: 8463 | 39 http://www.nature.com/news/the-unsung-heroes-of-crispr-1.20272?WT.mc_id=TWT_NatureNews
The unsung heroes of CRISPR
The soaring popularity of gene editing has made celebrities of the principal
investigators who pioneered the field — but their graduate students and
postdocs are often overlooked.
Heidi Ledford20 July 2016
When Blake Wiedenheft started studying microbes, his work was both remote
and obscure.
He spent his PhD sampling hot springs in Yellowstone National Park, then
created artificial ... 阅读全帖 |
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b********g
发帖数: 46 | 40 接着讨论。
in situ chromatin 研究的局限性，in vitro reconstituted chromatin顶多能到30-
nm chromatin，higher order chromatin structure始终无法得到研究。我只好重新都
chris woodcock的文章，寻找突破口。我觉得突破口只能是chromatin extraction。无
法做到native,做到无损那是可以的。No MNase digestion, no sonication, no
centrifugation, no filtration, no glutaraldyhyde fixation。我提取的
chromatinc长达100 微米。AFM，TEM下，bead-on-a-string structure清晰可见。三维
重构后，30-nm double double helix structure清晰可见。总之，前人的研究结构，
我都看到了。
我观测到的chromatin structure在人的，老鼠的，健康的，癌细胞的种种条件下，都
可以反复验证。我能证明30-nm c... 阅读全帖 |
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g******1
发帖数: 295 | 41 【 以下文字转载自 JobMarket 讨论区 】
发信人: gofor011 (gofor011), 信区: JobMarket
标 题: [内推］Clinical Laboratory Scientist
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 12 23:28:05 2016, 美东)
If interested, please email your resume to arthurbuffet At hotmail.com
ABOUT THE ROLE
The Clinical Laboratory Scientist is responsible for performing high
complexity laboratory testing (Next generation DNA sequencing) on patient
specimens, performing quality control and quality assurance procedures,
interpreting and reporting patient results, and... 阅读全帖 |
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S*****a
发帖数: 63 | 42 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: Somalia (Anti-Pirates), 信区: Pharmaceutical
标 题: Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro Labs in Woburn, MA
关键字: Biologics,Discovery,Development,Antibody,Computational
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 31 20:28:52 2017, 美东)
Multiple Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro
Labs in Woburn, MA
www.abpro-labs.com
To apply please send resume to [email protected]
1. Scientist/Senior Scientist, Antibody Display Technology
... 阅读全帖 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 43 real-time qPCR system，Bio-rad western blotting detection/gel imagining
system，NanoDrop Microvolume Spectrophotometers and Fluorometer，bench
centrifuge with cooling system （many rotors for different uses)... |
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B***v
发帖数: 113 | 44 谢谢！
现在是市场上有自动Western blot machine，打算买，但还没研究哪个好，设计都很不
一样，western blot太耗时间体力了。
NanoDrop现在也有用cassettee的，很多样品一起测，而不是一个一个加到那个小平台
上。
bench centrifuge with cooling system也算是大宗花销了，好的可以很贵。 |
|
m*********D
发帖数: 1727 | 45 real-time qPCR system，Bio-rad western blotting detection/gel imagining
system，NanoDrop Microvolume Spectrophotometers and Fluorometer，bench
centrifuge with cooling system （many rotors for different uses)... |
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B***v
发帖数: 113 | 46 谢谢！
现在是市场上有自动Western blot machine，打算买，但还没研究哪个好，设计都很不
一样，western blot太耗时间体力了。
NanoDrop现在也有用cassettee的，很多样品一起测，而不是一个一个加到那个小平台
上。
bench centrifuge with cooling system也算是大宗花销了，好的可以很贵。 |
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P********n
发帖数: 372 | 47 ultracentrifugation
centrifugal filter
column |
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l****o
发帖数: 58 | 48 incubate your total protein with your taget ligands for hours or overnight.
Boiling your sample if your product is stable or use other protocol to
precipitate proteins. use centrifuge to remove most of insoluble particles
then use an 0.2 um filter to clean your sample. Now it would be safe to your
column. I use this protocle for years and do not find any damage to column. |
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t******t
发帖数: 3045 | 49 why don't u centrifuge it? |
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t******r
发帖数: 33 | 50 1. Use asphaltene/water for fuel. Black, G.; Bailey, L.; Higgins, D.
Hydrocarbon Processing, v 64, p 99-100, 1985. ISSN 0018-8190.
2. Study of fines in bitumen extracted from oil sands by heat-centrifugation
. Budziak, C. J. et al. Fuel, v 67, p 1633-1638, 1988. ISSN 0016 2361.
Please email to x******[email protected]
Thanks |
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