w*****t
发帖数: 179 | 1 说句实在话，我还是很支持张锋的，我个人觉得，谁对这个领域的推动大，我就会支持
谁。我本人是用了很多张锋在ADDGENE的质粒，包括跟他直接发信都会回，关于专利我
不是很清楚，但是随后的工作还是张锋做的最好。有一点希望就是张锋申请到专利后不
要影响纯学术的研究。
Charpentier |
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w*****t
发帖数: 179 | 2 说句实在话，我还是很支持张锋的，我个人觉得，谁对这个领域的推动大，我就会支持
谁。我本人是用了很多张锋在ADDGENE的质粒，包括跟他直接发信都会回，关于专利我
不是很清楚，但是随后的工作还是张锋做的最好。有一点希望就是张锋申请到专利后不
要影响纯学术的研究。
Charpentier |
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E**********y
发帖数: 991 | 3 https://www.addgene.org/57818/
In the comment, it was suggested that "Use BsmBI sites for sgRNA cloning.
Note that this plasmid does NOT contain the 1.9kb stuffer from the pLKO.005
vector backbone." But I couldn't find BsmBI site on the plasmid map....
Also what is the sequencing primer to confirm a successful cloning of sgRNA
into this vector?
Thanks. |
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n******e
发帖数: 89 | 4 申请专利本身与addgene或者其他条款完全没关系。专利局审查只看已经公布的信息是
否anticipate或者teach你的invention. 楼主的东西应该是产权属于单位的，如果真的
有效果并且方法经过检索为新的话，赶快和学校的专利律师联系申请，说不定有前景。
days |
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l***y
发帖数: 638 | 5 去读当时签的MTA吧，deposit质粒和从addgene弄别人质粒肯定都签了MTA的，他家本身
的格式MTA好像规定的还可以，但是broad的质粒额外要签一个他们自己搞的，记得好像
限制非常多 |
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发帖数: 1 | 6 #注明译者，请随便转载：）
CRISPR英雄谱
埃里克・兰德（Eric Lander）
小鹿／译
三年之前，科学家们宣布，CRISPR技术能够对真核活细胞进行精准与有效的基因组编辑
。自此，这项技术手段已然震撼了科学界，数以千计的实验室正在将其运用于从生物医
药到农业的各个领域。然而，从一种奇特的细菌重复序列现象的发现开始，到确认这种
现象为适应性免疫系统，进而对它的生物功能特性的了解，直至开发为一项基因工程的
技术，这此前二十载相关的研究历程却不为人所知。本文正是着眼于填补这段科学历史
的空白，它讲述的是观念的演化历史和先锋人物的传奇故事，并且从中获得关于支撑科
学发现的优秀科研环境的启迪。
前言
很难想起曾经有哪一次科学革命像CRISPR这般如此迅速地改变生物学界。仅仅三年之前
，科学家宣布，CRISPR系统，即细菌通过纪录和精准攻击入侵病毒的DNA序列而进行自
身防御的适应性免疫系统，可以利用转化为一项简单而有效的技术在哺乳动物和其它生
物体的活体细胞内进行基因组编辑。CRISPR即此被全球数以千计的实验室运用于广泛的
领域，如创建人类遗传疾病和癌症的复杂动物模型；... 阅读全帖 |
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s***o
发帖数: 1189 | 9 如果卖蛋白也是实验用的，想用什么表达系统都可以。 |
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发帖数: 1 | 10 网上有人发邮件问了。 已经送addgene， 很快就可以订了。 |
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发帖数: 1 | 11 合成是可以，但是要花费好几百刀哦。
哪位如果知道Addgene可以购买了，告诉一声啊。
谢谢。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 12 前几天有人说了，质粒送到addgene去了，大概再过一阵子就能订了。
他们实验室就两个人，估计不会有空处理这种要东西的要求的。 |
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r********s
发帖数: 149 | 13 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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r********s
发帖数: 149 | 14 刚刚看到Addgene已经有他们的质粒了，发现c-terminus多出几个氨基酸。
[在 samalli (小米) 的大作中提到：]
:我用的gene block，N端加了3xFlag和nucleoplasmin NLS，就是张峰的Cas9的核定位
序列
:转293也试了韩paper里面targeting GFP的5pssDNA，也没做出来，也许GFP质粒转的太
:多了
:里面很多不确定因素，我已经做了一个跟韩的paper里完全一样的设计，N端Flag-
:SV40NLS
:我也怀疑我的ssDNA 也许local公司磷酸化的不好。我有自己磷酸化的，并且从IDT定
了韩paper里的G10，下周再试一次
:如果有结果我会post 出来的。
:天下熙熙，皆为利来；天下攘攘，皆为利往。 |
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s*****i
发帖数: 315 | 15 又做了一次，没有成功。我认识有个公司的人（CRISPR高手）也在试，试了两次没有成
功，我们分别独立设计的质粒
质粒是 pcDNA3.1-Flag-SV40NLS-NgAgo. C端没有tag， N端跟韩paper的primer序列完
全一样
用了IDT的5'phopspho-G10，用了韩的条件，也用了号称可以共转oligo和plasmid DNA非
常牛的mirus x2
转了1/10的GFP plasmid，FACS的转染效率 Lipo 2000 40%~50%， X2 转染效率 90%
拿到了韩放到 addgene的质粒
下周再试一次 |
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l***s
发帖数: 841 | 16 多谢分享！看来和想象中的不一样啊。。。我们也拿到了Addgene的plasmid,同时自己
也建立了一个plasmid，准备下周一起试一下。但我觉得结果恐怕也不乐观啊。另外韩
的plasmid C-terminus多了7个氨基酸，不是说会影响结构吗？
DNA非 |
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s*****i
发帖数: 315 | 17 我用了addgene上的质粒，他的G10，也没有做出来。要么是他条件写错了
如果国内有很多组重复出来，只能说明我手臭了 |
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j******i
发帖数: 939 | 18 不会真的有造假吧
From Google Group
------
Hi,
I tried a couple of transfections with the NgAgo plasmid from Addgene and
the 5'P oligo against GFP from the paper, but I did not see a dramatic
reduction in GFP+ as seen using Cas9 and a GFP sgRNA.
Anybody tried as well and came to the same (dead) end?
Davide
Hi, Davide,
I tried the same plasmid that you used to target DYRK1A, HBA2, GATA4, which
are tested in Han's paper, but I didn't see any indel as they did. It seems
there is something wrong with this sy... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 19 如果我们要在哺乳动物细胞做原位knock-in,目前最好用的Cas9是哪个版本的? 我依稀
记得好像说是要用一种比较特殊设计的Cas9以及gRNA?
对于knock-in cassette, 在设计的时候需要注意什么？以及是否能在addgene 上要到
相关的质粒？ |
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f**l
发帖数: 22 | 20 看rudolf jaenisch的文章，建议加selection marker，HR arm 别弄得太短，普通cas9
可以用，有些construct可以从addgene买到 |
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发帖数: 1 | 21 Hi,
I tried a couple of transfections with the NgAgo plasmid from Addgene and
the 5'P oligo against GFP from the paper, but I did not see a dramatic
reduction in GFP+ as seen using Cas9 and a GFP sgRNA.
Anybody tried as well and came to the same (dead) end?
Davide |
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发帖数: 1 | 22 发信人: samalli (小米), 信区: Biology
标 题: Re: 韩春雨的NgAgo效率怎么样？有人试过么？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 10 21:21:26 2016, 美东)
又做了一次，没有成功。我认识有个公司的人（CRISPR高手）也在试，试了两次没有成
功，我们分别独立设计的质粒
质粒是 pcDNA3.1-Flag-SV40NLS-NgAgo. C端没有tag， N端跟韩paper的primer序列完
全一样
用了IDT的5'phopspho-G10，用了韩的条件，也用了号称可以共转oligo和plasmid DNA非
常牛的mirus x2
转了1/10的GFP plasmid，FACS的转染效率 Lipo 2000 40%~50%， X2 转染效率 90%
拿到了韩放到 addgene的质粒
下周再试一次 |
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发帖数: 1 | 23 刚开始韩春雨的文章发表，我也是支持者和粉丝，对质疑者很不满。现在觉得韩春雨在
北大和遗传所等的报告中强调必须高超的实验技巧才能做出来，就是为以后别人质疑他
重复不出来提前辩解。又说等他的2.0和smart版，感觉只是为了拖延时间。不然解释不
了，已经发表的文章、效率跟CRISPR差不多，为什么做不出来。连我这种手残党，按着
张锋的protocol、addgene上买来的质粒、做CRISPR一把就做出来了。
韩春雨在报告中反复强调他是初级版、需要高超的实验技巧、等他推出2.0版，实在让
人听了生疑。而且这些表述跟他发表的文章的描述、那么高的效率、以及methods &
materials部分也都是矛盾的，因为他描述的并不是什么复杂的实验，就是转染而已。
T7E1和测序也都是现成的。除非他故意删掉了关键的细节。但是这么说也讲不通，因为
发表文章的目的就是想要公开，何况这是方法学文章、故意隐藏细节不让他人重复，也
讲不通。
感觉韩春雨的泡泡要破灭了。
楼主挺积极的，干嘛不给nature biotechnology的编辑写信提出？editor让他解释的话
，我看韩春雨怎么解释。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 24 我好奇的去看了一眼，刚刚有一个人出来说他做出来了。他的做法是用激酶来磷酸
化那个oligo，而不是从厂家订磷酸化的oligo。因为这个5'-end 磷酸化很关键，没有
磷酸化的Oligo不能被NgAgo识别。从理论上来说，如果oligo 的磷酸化不完全的话，就
有可能出现那些没有磷酸化的oligo和磷酸化的oligo 互相竞争结合基因上的位点而降
低酶的效率。所以弄不好这个磷酸化就是其中的技术要点。
貌似这个是目前第一个跳出来说重复出来了的人。静待更多的跟进报道。
----------------------------------------------------------
Jan Winter
5:34 PM (1 hour ago)
Hi guys,
Just had a couple of tests with ngago from addgene and custom Oligos, so I
did not try to reproduce the paper.
And in my hands I see an effect that is slightly ... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 25 所谓做出来了 是怎么做出来的？
测序了吗？看到切割了吗？
重复的fig4？
[在 sunnyday (胖头鱼。按斤卖就赚了) 的大作中提到：]
:我好奇的去看了一眼，刚刚有一个人出来说他做出来了。他的做法是用激酶来磷酸
:化那个oligo，而不是从厂家订磷酸化的oligo。因为这个5'-end 磷酸化很关键，
没有
:磷酸化的Oligo不能被NgAgo识别。从理论上来说，如果oligo 的磷酸化不完全的话，
就有可能出现那些没有磷酸化的oligo和磷酸化的oligo 互相竞争结合基因上的位点而降
:低酶的效率。所以弄不好这个磷酸化就是其中的技术要点。
:貌似这个是目前第一个跳出来说重复出来了的人。静待更多的跟进报道。
:Jan Winter
:Hi guys,
:Just had a couple of tests with ngago from addgene and custom Oligos, so I
did not try to reproduce the paper.
:And in my hands I see an effect that is slight... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 26 之前还比较反对你的看法，现在看来好像还确实有那么点。
不过韩说的也有道理，如果他是刻意造假了，为啥还第一时间把质粒分发和送给
addgene？这不是等着拆穿吗？更符合的情况应该是拖着不给啊.. 我没有投过NBT，这
是不是NBT的要求？
我觉得如果最后重复不出来，最有可能的情况是假阳性，不会是蓄意造假。 |
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d********m
发帖数: 3662 | 27 烙印目前在测序。话说烙印怎么会去国内的小公司买这个质粒而不是去addgene，好精
彩的篇章啊感觉。 |
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d******t
发帖数: 27 | 28 韩自己回复搬运如下，他自己也承认图四有难度：槐北路 1
12楼今天 16:22
操作
我目前仍只有一个做实验的小团队，无法做好服务性工作，一天十几个个电话我都是重
复的以下内容：----所谓
高超的技巧，其实也很简单，细胞做好检测，不要有寄生菌污染，不要有支原体污染（
Ago系统对污染特别敏
感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下，单转guid不会影响
GFP表达，假阴性也大多因为细胞污染，假阳性和假阴性我都遇到过，国内买的细胞我
就不吐槽了），转染用的质粒质量要好（可用30ngGFP转细胞，若是均一且效率高表明
质量好，强弱不均一则表明质量差，越不均一表明质量越差），guide磷酸化完全（没
有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果，至于怎么检测，自己跑个PAGE看
看---），特别的，对于Fig4，也是几乎惟一算是有难度的，就是控制转染时的细胞密
度和用血清控制细胞生长，时间稍长，毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照着
online method上protocol for genome editing and T7E1做（小经验... 阅读全帖 |
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e*******n
发帖数: 4912 | 29 给个链接
zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
29 21:05
欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :真的是韩老师吗？ 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师入驻9吧？ 6-29 21:17
卖糖果的莎莎： 评论@槐北路: 前排膜 6-29 21:18
还有52条回复…
精锐教育
商业推广
智商差不多，学习成绩千差万别。Why？
学霸宝典
heatherDHHY 1
3楼6-29 17:09
操作
这就很尴尬了
槐北路： 有什么可尴尬的，等相关的第二篇文章出来... 阅读全帖 |
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d******t
发帖数: 27 | 30 http://www.zhihu.com/question/46 ... mp;isappinstalled=0
韩自己回复搬运如下，他自己也承认图四有难度：槐北路 1
12楼今天 16:22
操作
我目前仍只有一个做实验的小团队，无法做好服务性工作，一天十几个个电话我都是重
复的以下内容：----所谓
高超的技巧，其实也很简单，细胞做好检测，不要有寄生菌污染，不要有支原体污染（
Ago系统对污染特别敏
感---特别是单转guide假阳性---我非常确定在没有污染的情况下，单转guid不会影响
GFP表达，假阴性也大多因为细胞污染，假阳性和假阴性我都遇到过，国内买的细胞我
就不吐槽了），转染用的质粒质量要好（可用30ngGFP转细胞，若是均一且效率高表明
质量好，强弱不均一则表明质量差，越不均一表明质量越差），guide磷酸化完全（没
有磷酸化不能load和切割---谢谢印证我的Fig2结果，至于怎么检测，自己跑个PAGE看
看---），特别的，对于Fig4，也是几乎惟一算是有难度的，就是控制转染时的细胞密
度和用血清控制细胞生长，时间稍长，毕竟NgAgo未经过系统的密码子优化---照... 阅读全帖 |
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m****a
发帖数: 270 | 31 是谁吃完饭没事干去跟方舟子告状？？
http://fangzhouzi.baijia.baidu.com/article/523403
不久前河北科技大学韩春雨在《自然·生物技术》发表论文报告了一种基因编辑新方法
NgAgo，在国内轰动一时。被《知识分子》作为末流学校土博士也能做世界一流科研的
典型，国内其他媒体随后跟进宣传，甚至称之为“诺贝尔奖级”的研究成果。
这几天我陆续收到几家实验室的研究人员的来信，反映重复不出韩春雨论文中最关键的
图4结果（切割基因组，T7E1和测序），呼吁我关注一下这事。
有些人已在网上生物专业论坛公开讨论此事，报告他们没法重复该实验，询问有谁重复
出来了。目前还未见有人反映重复出了图4结果。有的能够重复论文中的图3结果（FACS
和Western Blot），但那有可能是假阳性。
据听报告的人说，韩春雨在北大和遗传所的报告上都强调，他目前的NgAgo是初级版、
需要高超的实验技巧、等他推出2.0版和Smart版。这些说法跟他在论文里的描述是矛盾
的。因为他描述的只是个并不复杂的转染实验，T7E1和测序也都是现成的技术，并不需
要高超的实验技巧，按照其提供的... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 33 我一直想不通，韩为什么敢把质粒放在addgene上面去，他是有什么精神疾病吗 |
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m****a
发帖数: 270 | 34 韩把质粒在协和免费发放，送到addgene的质粒现在已经发放给了全世界300多个实验室
，现在又卖给武汉和北京两家生物公司对外销售，这还不是邀请大家一起玩？
明明答应了让一个学生去他们实验室学习,人家要去了就改口说细胞污染了。
所以你说的也没错，他不是邀请大家一起玩，而是所有人被他玩。 |
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发帖数: 1 | 35 From Google 网上论坛
Michael Wilson
2016-07-15 16:54（1 分钟前）
将帖子翻译为中文
Hello,
We have twice attempted to test the NgAgO addgene plasmid in HEK 293 cells
using lipofectamine transfection and the EGXXFP split reporter assay. As
many are aware, this assay requires DNA cleavage in the EGXXFP plasmid to
restore GFP expression.
We ordered oligos with 5' phosphorylation and transfected directly or PNK-
treated an aliquot prior to transfection, just to ensure 5' phosphorylation;
neither of these methods ... 阅读全帖 |
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n**********g
发帖数: 196 | 36 You comments are funny and clearly show you don't understand gene editing or
this paper at all. The reason you found evidences against Han are weak is
simply because you picked weak ones to fight against.
1) You avoided to answer the lack of reproducibility. You want to "window"
as long as possible to deny this concern. But Han distributed plasmids to
many Chinese laboratories during talks and more than 100 labs acquired his
NgAgo plasmid through Addgene. Yet there is only a single (unverified) ... 阅读全帖 |
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W*****n
发帖数: 21 | 37 试着整理了一下.
刚开始有人在Google论坛上说阿狗切不了内源DNA,也切不了转入DNA,自己太衰了,请高
手指点一下.结果有一群人都说阿狗切不动.
突然有个印度小哥debo说阿狗神勇,一试就灵. 与阿狗共转染的GFP质粒表达GFP蛋白明
显下降, 暗示GFP质粒DNA被阿狗切段, Fig 3C 被重复. 众人一追问,debo小哥说没做
DNA实验.看似印度小哥对T7E1实验不太熟. 众人讨论GFP蛋白表达下降也许是由于其他
因素,诸如导向DNA影响转译, 或是GFP质粒DNA转染效率本身在试验组和对照组中就有差
异.也就说对照不严格, 是个假对照. 过了几天, 印度小哥debo悄悄发贴说DNA实验结果
为阴性. 阿狗没有切DNA.
与此同时,更多的人表示Fig4 无法重复. 有人说实验是在293细胞中做的, 也许在HeLa
细胞中会有不同结果. 也有人明确说在HeLa中也不行. 无任何DNA被切证据.
突然又有个澳洲老哥Gaetan Burgio发推特说阿狗神勇,在受精卵中大切内源DNA, 效率
惊人, 而且这次是DNA证据. 有图有真相. 不过老哥好象挺粗心, 图也标错了,引起... 阅读全帖 |
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z*******4
发帖数: 285 | 38 1.评判是否造假的标准。
个人认为这不是看重复/不能重复的比例。而是看有没有人能作出来，有一个人能作出
来NgAgo能切割靶点基因组DNA，就不能算是造假。
这点很多外行都不理解，认为只要大多数人没有重复出来，就是造假，这对于开创性生
物学试验而言，是不公正的评价。 举个例子，一段高CG区域的PCR，很难作出来，可能
10个学生设计10对引物，只有一个能作出来，但你能评价说PCR技术是造假？
生物学实验的影响因素太多太复杂，即便是最常见最基础最成熟的生物学实验，比如基
因克隆，蛋白纯化，质粒转染，不同的生物博士来做，有的人能作出来，有人做不出来
。哪怕同样是一个人在同一个实验室，有时候做出来有时候做不出来，这种事情只要在
生物学实验室超过3年经历，肯定会遇到/听到很多次。
所以，用“很多人都做不出来“判定造假，这是不公正的评价。
2.仇子龙重复出来了靶点DNA的切割，但不知数据如何，因为外人看不到他的数据。如
果数据可靠，证明NgAgo能切割靶点基因组DNA，这就是对韩春雨工作的认可和肯定，造
假之说应该停止，因为对科研工作者而言，这恐怕是最恶毒的攻击。
3. 韩显然是没有坦诚布公，他... 阅读全帖 |
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m*****e
发帖数: 129 | 39
Support! I also spent money in addgene to get the plasmid. |
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x***s
发帖数: 851 | 40 Re
銆鍦medhope (娼滃績淇偧) 鐨勫ぇ浣滀腑鎻愬埌: 銆br />
spent money in addgene to get the plasmid. |
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H****N
发帖数: 997 | 41 Dear colleagues,
the publication by Gao et al in May in Nature Biotechnology http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27136078 triggered an enormous expectation. This Chinese team led by Chunyu Huan reported that the Argonaute (Ago) protein from a rare haloarchaea, Natronobacterium gregoryi, (NgAgo) would efficiently work for gene editing purposes in human cells. Ago had been described as an DNA-guided endonucleases two years before, through a Dutch-Spanish microbiologist collaborating team (Swarts ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 42 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: hanchunyu (), 信区: Military
标 题: 韩春雨是第二个小保方－业界专家的信
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 29 11:59:57 2016, 美东)
Email on ngAgo sent to the ISTT mailing list：
Dear colleagues,
the publication by Gao et al in May in Nature Biotechnology http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27136078 triggered an enormous expectation. This Chinese team led by Chunyu Huan reported that the Argonaute (Ago) protein from a rare haloarchaea, Natronobacterium gregoryi, (NgAgo) would efficiently work for gen... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 43 国际转基因技术协会原主席Montoliu博士建议不要再试图重复韩春雨实验结果
澳大利亚国立大学Gaetan Burgion今天撰写长文介绍他试图重复河北科大韩
春雨创立的NgAgo基因编辑技术的经过，得出结论：韩春雨的实验无法重复，而
且与韩在论文所说矛盾；《自然·生物技术》应要求韩公布原始数据；该技术显
然没有前途。
国际转基因技术协会创建者和原主席Lluis Montoliu博士根据这一结果以
及其本人实验室的实验结果，向国际转基因技术协会会员发出一封公开信，建议
停止继续试图验证韩春雨的实验，不要再浪费时间、金钱、人员和项目。
CRISPR谷歌群针对这项技术和韩春雨的文章的调查表明，140个调查回复中，
只有一个（中国神经所仇子龙？）回答该技术起作用，73个回答无效，63个回答
在验证。
From: [email protected]/* */ on behalf of Lluis
Montoliu To: ISTT List
Subject: [ISTT_list] Great disappointment with Ago: Long life to
CRISPR... 阅读全帖 |
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F****n
发帖数: 5117 | 44 那时候文章刚出来，质粒还没在addgene出来吧 |
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h*****4
发帖数: 1158 | 45 什么1:3，20个啦，这明显是韩老师信口开河的话，随口说的。
其实从他在这听说了C端带tag Ago没活性，做贼心虚把不带tag的Ago质粒，而不是自己
用来做实验的Ago质粒发到Addgene，谜底就已经揭晓了。。。坐等看结局吧 |
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发帖数: 1 | 46 你说：”其实从他在这听说了C端带tag Ago没活性，做贼心虚把不带tag的Ago质粒，而
不是自己
用来做实验的Ago质粒发到Addgene，谜底就已经揭晓了。。。坐等看结局吧“
他给300个实验室的质粒不是原件？ |
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发帖数: 1 | 47 质疑是科学研究不断前进的动力
作者：熊丙奇
2016-08-01北京青年报
河北科技大学副教授韩春雨震惊全球学术界的新基因编辑技术NgAgo-gDNA，
正遭遇越来越多的质疑。从5月2日他的论文发布在《自然-生物技术》网络版之
后，到现在为止，全球仍没有一家实验室对外宣布，能够完全成功重复韩春雨的
实验。现在已有多国科学家要求《自然-生物技术》介入调查，并公开韩春雨实
验中的所有原始数据和实验条件。
一项新技术诞生，同行对其可行性进行重复实验，并根据实验效果对技术进
行质疑，这是太正常不过的事。这样的质疑在科学研究中屡见不鲜，有的质疑推
进了技术的完善、进步，而有的质疑，则发现研究者学术造假、伪造数据，不管
是哪一种结果，这都对学术研究有利无弊。前者推进科学研究进步，后者则纯净
学术研究的环境。
韩春雨和其所在学校应该有直面质疑的常识和勇气。据报道，面对质疑，韩
春雨把质粒信息上传到一家全球科学家质粒共享的非盈利组织——addgene，在
协和讲座发放质粒，“对自己实验的重复性还是很有胆气的”，而之前，他还针
对方舟子的质疑文章，进行了较为详细的回应，强调NgAgo系统对污染特别敏感，... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 48
hffmsb4 (Hua) 说韩春雨提供给其它实验室的Ago质粒不带tag，而NBT文章上的Ago
上有tag。
“其实从他在这（遗传所）听说了C端带tag Ago没活性，做贼心虚把不带tag的Ago
质粒，而不是自己用来做实验的Ago质粒发到Addgene，谜底就已经揭晓了。。。”
这个事情如属实， 问题就严重了。
怪不得NBT强调：“作为在自然科研旗下期刊发表论文的条件之一，作者须将材料、
数据、代码和相关的实验流程及时向读者提供，不可加以不当限制。”
看看， 材料在第一位的。
现在大家手上都有韩春雨提供的质粒，看看他重复时使用什么质粒。
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z*******o
发帖数: 1794 | 49 是不是他故意给的不带tag的？实际上带tag的才有效。之后大家都重复不出来，他再说
当时给addgene的时候手抖搞错plasmid了。 |
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c********n
发帖数: 225 | 50 第四类“重复” 验证实验信息：实名, 网络、论坛发布
- 重复、拓展验证实验不能支持NgAgo基因组编辑功能
暂只收录包含有具体实验信息（eg实验材料，步骤，etc）的发布报告
第一则
- 发布方：Dr. Davide Seruggia
- 发布时间：2016年6月23日 至2016年7月20日
- 发布平台：google groups
- 发布方国家：美国
- 发布方城市：Boston
- 发布方研究机构：Boston Children's Hospital
- 实验室PI：Dr. Davide Seruggia
- NgAgo的来源：Addgene
- 重复及验证实验结果:
o 重复文章中的NgAgo/gDNA - GFP实验不成功 （对比实验Cas9 –“dramatic
reduction”）
o 拓展实验inject embryos - ”pups with no phenotype, no indels”
- 重复及验证详细信息: oligo来源及用量，实验简介，实验结果简汇
- 实验数据发... 阅读全帖 |
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