p******4
发帖数: 53 | 1 急需审稿，工作截止到六月份，审稿数量不够（只有4次审稿），希望在一两个月内能
求到些审稿机会，可以申请EB1A。我的研究领域是有关 pollen biology, RAC/ROP
signaling, cell polarity, Sexual Reproduction, Pollen-pistil interactions,
actin cytoskeleton, plant genetics and molecular biology, cell-cell
communication and signal transduction, biotic/abiotic stress, functional
genomics, plant hormone signaling， 当然也不局限于这些领域，有需要审稿人的请
联系我，我再发简历给您参考，谢谢！ |
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f********s
发帖数: 526 | 2 请问大家跟FOIA要到的140 approval, 是i797 notice of actin for i140还是直接就
是i140的申请表上盖了个approval戳的样式? 我本来想要I797 NOTICE of approval的,
但是他们给我寄来的是我当时的perm申请表和i140申请表, 140上面带着appoved的印
章..不知道能用来申请485不.. 谢谢.. |
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M****7
发帖数: 13407 | 3 An elderly Chinese woman has stunned her family and fellow villagers by
growing from her forehead a horn than resembles a goat’s.
Grandmother Zhang Ruifang, 101, of Linlou village, Henan province, began
developing the mysterious protrusion last year.
Since then it has grown 2.4in in length and another now appears to emerging
on the other side of the mother of seven’s forehead.
The condition has left her family baffled and worried.
Her youngest of six sons, Zhang Guozheng, 60, said when a patch o... 阅读全帖 |
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w***s
发帖数: 7132 | 4 http://www.knoxnews.com/news/2009/feb/18/university-tennessee-president-john-
petersen-resig/
University of Tennessee President John Petersen said it was his decision to
leave UT after four and a half years, starting an administrative leave March
1
and resigning effective June 30.
Former interim Chancellor Jan Simek will serve as acting president for up to
two years, according to a UT release. |
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q****p
发帖数: 4536 | 6 不高，我敢说还没有你们学校篮球队教练的一半。原来我们学校的篮球队教练年薪是这
3倍了都。 |
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g*******a
发帖数: 6484 | 7 是啊。足球教练挣的多。可是他们也给学校挣很多钱啊。
奥巴马的年薪也不过40万。 |
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i**l
发帖数: 4224 | 9 utk的再前一任校长好像是被炒掉的
to
March
to |
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p*********l
发帖数: 26270 | 10 比喻，比喻。。。绝对不骂人。。。:)
说正经的，文盲我刚才看你那个reps的图，查了几个术语，根据下面这个Link的说法，
"Sarcoplasmic hypertrophy is characteristic of the muscles of certain
bodybuilders while myofibrillar hypertrophy is characteristic of Olympic
weightlifters." 综合你的那个图标，那么，你大重量少rep，就是更侧重于长力气而
不是大小，对不对?
http://en.wikipedia.org/wiki/Muscle_hypertrophy#Myofibrillar_vs
Myofibrillar vs. Sarcoplasmic hypertrophy controversy
This section needs additional citations for verification. (July 2012)
In the bodybuilding and fitness community and... 阅读全帖 |
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x****k
发帖数: 2932 | 11 死肌肉和有力肌肉是由科学依据的
In the bodybuilding and fitness community and even in some academic books
skeletal muscle hypertrophy is described as being in one of two types:
Sarcoplasmic or myofibrillar. According to this hypothesis, during
sarcoplasmic hypertrophy, the volume of sarcoplasmic fluid in the muscle
cell increases with no accompanying increase in muscular strength, whereas
during myofibrillar hypertrophy, actin and myosin contractile proteins
increase in number and add to muscular strength as we... 阅读全帖 |
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d*******r
发帖数: 3299 | 12 我已经local看朋友玩过了，
人物模型精度比较粗糙，所以不吃显卡，用ATI 4770的卡，也可以效果全开勉强上
60fps。
只看了朋友玩女DH，高跟鞋紧身裤，弓弩+陷阱，技能看着没啥新鲜的。
blz牛逼在美工，所以虽然画面精度一般，但是总体效果还是很好，贴别是隔远点看，
总体画面还是偏上乘。
总体画风比较像一代和WOW的合体，没有一代dark，没有WOW鲜亮。比二代好看太多了，
个人比较喜欢一代的教堂古堡地牢的哥特风格，不喜欢二代的埃及金字塔南美热带丛林
的乱入风格，还有二代第一幕和第四幕的画面看起来又比较渣。所以个人感觉三代画面
比二代好太多了。
场景是亮点，beta只打倒骷髅王(一代大家屠过一遍的那家伙), 但是场景变化很多，小
村，荒野，各种坟头和古墓，地窖，小地牢，还有骷髅王的地下宫殿。场景变化之快，
远远超过前两代的速度，貌似解决的Diablo系列场景单一的问题，大赞！希望后面的关
卡也保持这种水准。
说完画面，说说系统，随地掉血瓶很多，都是碰到就吃掉的那种GOW actin游戏的风格
。没魔法瓶了，自动回魔很快。DH有攻击防御两种魔法值，攻击魔法回复得快，防御的
回复的... 阅读全帖 |
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L*******s
发帖数: 15925 | 13 本来想发在小杜的不说废话俱乐部的
没想到那边要加入才能发言
记得那边讨论过全是对话的小说
这篇全是短信的小说 拼写一堆错 但读得太乐了 很有Michael Cera的风格
买卖提排版不好
你们直接去链接看吧
http://www.newyorker.com/humor/2013/11/25/131125sh_shouts_cera?
MY MAN JEREMY
by Michael Cera
Whenever a friend asks me if I have any interesting tales involving text-
messaging, I think of Jeremy. Jeremy, a man I am no longer in touch with,
was someone I once considered a friend. It started out very simply: one day
I received a text message from a phone number I did not recognize. Intrigued
,... 阅读全帖 |
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I*G
发帖数: 480 | 14 多谢黄苹果
显微那个是细胞骨架分子(Actin)在细胞外聚集形成的特殊形状 |
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N****1
发帖数: 1117 | 15 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: Notch1 (加油，加油), 信区: Stock
标 题: 小土豆对世界的要求
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Feb 23 10:02:45 2012, 美东)
这个是一份很重要的说明，因为我长期在海外，我无法回去照顾家人，我现在对世界这
么要求：
1).我的父母，尤其是我妈妈用毕生的心血购买的土地，任何人都不能夺走，任何行为
我都必须知道，因为财产在爸爸娶后妈之前已经公正过了，别人家的种对我家的财产连
门都没有；
2).我的小姨姨必须过得开心，我的小姨父在土地所的工作必须让他开心，任何人都不
能让我为他们留一滴眼泪，因为我的小姨姨有和彭丽媛一样的长头发，拉手风琴的，年
轻的时候非常漂亮；
3).我所有的亲戚朋友都必须过得安安稳稳，我们不求大富大贵，我们只求一个安稳，
我们一定要在自己的家乡过得安稳，我们不一定要漂泊在外，因为我已经在海外漂泊了
，一个已经足够。
今天股版播放France 的国歌：Paris by Jay Z.
就这样。
"Niggas In Paris"
(with Jay-Z)
[Jay-Z:]
... 阅读全帖 |
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N****1
发帖数: 1117 | 16 献给台湾的那个什么红歌星：Jay。唱龙卷风的那个。。。想不起来了。。。
"Niggas In Paris"
(with Jay-Z)
[Jay-Z:]
So I ball so hard muhfuckas wanna fine me
But first niggas gotta find me
What’s 50 grand to a muhfucka like me
Can you please remind me?
Ball so hard, this shit crazy
Y’all don’t know that don’t shit phase me
The Nets could go 0-82 and I look at you like this shit gravy
Ball so hard, this shit weird
We ain’t even s’pose to be here,
Ball so hard, since we here
It’s only right that we be fair
Psycho, I’m liable to go Micha... 阅读全帖 |
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G*******s
发帖数: 4956 | 17 首先给大家看个故事，然后再探讨经文：
林慈信牧师的《基督教教义发展史》中提到这个：
http://blog.sina.com.cn/s/blog_622134fd01013i7l.html
基督论的发展史(1)：基督论的争辩
HISTORY OF THE DOCTRINE OF CHRIST (1):
The Christological Controversies
(Louis Berkhof, A History of Christian Doctrines, pp. 101ff.)
基督论与三位一体之问题的关联
Connection of Christological and Trinitarian Problems
基督论的难题可以从一般神学（译注：神论）方面，与拯救论方面来加以
研究。早期教父对基督论拯救方面的关系，虽未曾加以轻忽，但他们在重要的讨论上却
没有重视。在三位一体争论的气氛中，他们从一般神学（译注：神论）方面来研究基督
，乃天经地义的事，而三位一体争论所导致的决定则是，基督为神的儿子，事与父同质
的，因此祂是神。从此而发生的问题，就是基督... 阅读全帖 |
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j****1
发帖数: 15497 | 18 哈哈哈哈~
microtubules, actin filaments and microfilament are components of
cytoskeleton.
We don't say that it's in the cytoplasm. |
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m***e
发帖数: 21 | 19 我觉得有一下几个原因不用E。COLI
1。 一般的E。COLI细菌用的CODON PREFERENCE可能与MAMALIAN CELL不同，所以你用普通
的BL21的话可能蛋白根本不表达，但是这点可以克服，你可以用那种加入了RARE CODON的
CELL LINE，比如ROSETTA GEMI系列。
2。有一些MAMALIAN PROTEIN是需要表达后修饰才有活性的，而E。COLI可能无法提供这种
环境。
3。但是也有很多人用E。COLI表达真和生物蛋白，有时也能成功，但YEAST其实是一种挺
好的表达环境，比在FLY，或者作细胞培养方便多了。
所以建议你试一下用E。COLI，不行的话想办法提高YEAST中的产量。至少我知道不同培养
液对E。COLI表达量影响很大，可能你也可以换其他培养夜养YEAST。 |
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f*****a
发帖数: 7 | 20 I only use SYBR. What I did is
1. Use Primer Express 1.5 or 2.0 from ABI to design primers. Follow their
guidelines. Or just use Primer3.
2. Use Amply 1.2 (or higher) and Netprimer http://www.premierbiosoft.com/n
etprimer/) to evaluate candidates.
3. Blast your primers.
4. Pick up 2-3 pairs. Do standard and dissociation curves. Chose the one wor
k best.
Make sure to chose the right normalization primers for your experiment. 18S,
actin, GAPDH, tubulin... |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 谢谢，但是这些策略对我们没有用，因为我们的蛋白是在细胞骨架里面的，
如果用温和裂解液的话，超过一半的蛋白就和actin filaments 一起在低速离心
下沉到pellet里了。要把所有蛋白都分出来的话我现在是用8M urea, 但是这样
就成了一个gel-like structure, 我也试过pre-clear step with beads，
但是发现根本没有用，因为整个溶液（就是一个胶体结构）都粘在resin bead上，
用普通的desktop centrifuge根本分不开。
release
down |
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s******y
发帖数: 28562 | 22 I tired that, and found out not suitable.
It takes at least 20 to 30 minutes to completely disrupt all the actin
filaments, but my target protein has a half time much much shorter than that
. |
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s******r
发帖数: 2876 | 23 加上MG132行不行？
I tired that, and found out not suitable.
It takes at least 20 to 30 minutes to completely disrupt all the actin
filaments, but my target protein has a half time much much shorter than that
. |
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w****8
发帖数: 36 | 24 i am using actin-CreER line so that i don't need to think about the germline
issue. Just be careful and try. Good luck. |
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t******y
发帖数: 4 | 25 我做arabidopsis 的。 我用real time pcr 检测 Salicylic acid induced PR-1 ，表
达量在
1000fold 左右，这个正常吗。 我重复了一篇paper:lysmRLK1 play a critical role
in chitin
signaling and fungal resistance in arabidopsis的实验。 在文章supplemental
graph里面的
PR-1 induction 只有20 倍，而我的却有1000倍，这个是为什么。 另外我发现actin-2
,ubq10,
ubc 等internal control 的CT 有变化，SA treated 比mock要晚2-3 个CT, 别的
treatment 就没
有这种现象。
有没有人知道这个是怎么解释的？
谢谢 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 26 western blot 发现beta actin 仍然出现在核提取液中。
请高手推荐一个只在细胞质中的蛋白。谢谢。 |
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d******r
发帖数: 124 | 27 非常谢谢
再问一句：一般用什么做internal control？ actin？GAPDH？ 还是S18 rRNA？ |
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v*********i
发帖数: 40 | 28 全细胞蛋白做WB。
以前我是这样做的：
转染之后，6 cm 板（5×10^6)直接拿200 ul PBS冲下来，加过量的5 × SDS PAGE
loading buffer （我一般加80 ul），95度煮30 min；然后 13000 rpm 离心 10 min。
基本看不到沉淀。
然后取10 ul 跑胶WB；因为转染起始细胞数目一样，所以基本不调平，看到的beta-
actin就是平的。
现在的老板说我这样做不对，因为没有测蛋白浓度。他要看到我把每个样品的浓度都写
到本子上；还说直接煮不能溶解全部的蛋白（FT）。他很固执，我只好按他的做：
转染之后，6 cm 板用RIPA buffer 800 ul, 加那个Roche Cocktail蛋白酶抑制剂， 冰
上放30 min，然后 13000 rpm 离心 10 min，结果看到大量沉淀。我感觉沉淀跟直接低
速离心收细胞的沉淀差不多。是不是细胞都没破裂啊?
哎，连个成熟的protocol都木有……
谁能给我个完整成熟可靠的呀?说的详细点。
谢谢。
p.s.
我不放心，现在把那个裂解液又拿去超声了；可是超声仪太古老，上面没有能量显示… |
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v*********i
发帖数: 40 | 29 是的耶。其实根据原理自己也能判断我的做法应该没问题；而且以前、别人都是这么做
的。
我郁闷的是老板说我这么做不对，还指责我，还说你要是不会做就问问其他人，看看人
家是怎么做的。可是我明明会做，而且做的是对的。
所以想发上来让大家评评理。
我直接加SDS PAGE loading buffer到PBS悬起来的细胞里面煮，老板一听就说怎么能这
么做，你这么做是错的……不能用SDS loading buffer，这个是跑胶的时候上样用的，
你提细胞里的蛋白得用RIPA buffer。
还说，你怎么不加蛋白酶抑制剂。我解释说里面有高浓度的SDS，再煮过，不需要加蛋
白酶抑制剂了，因为蛋白酶已经变性了呀（我的解释对不对??????）
可是老板说做蛋白都得加蛋白酶抑制剂，你不是说自己以前做过很多蛋白质实验吗，你
要是没做过就说没做过，我可以让其他人教你，你要是不知道怎么做，要主动问别人，
看看人家怎么做的，等等。
还说，你怎么不测蛋白浓度；我就解释说我觉得不需要测蛋白浓度，以前我都不测，因
为转染的时候起始细胞数量是一样的，蛋白量应该差不多，加actin内参看一看就应该
知道平不平了；另外加了SD |
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h**2
发帖数: 2841 | 30 老弟/老妹，很多实验室都有自己的习惯，尤其是你做phd的话人家assume你是张白纸，
谦虚小心点follow他们的习惯总不会错。
虽然你的这个实验beta actin是匀的，但对于你的这个方法对establish自己的实验系
统很不好。
首先以后你可能会碰到细胞数在transfection/infection之后变化很多，其次你用pbs
冲下来的话也可能漏掉一些，这些都是很可能的，实验多了的话难免出错，但你最快也
要等到running/transferring之后用ponceau S才能知道，浪费时间啊。至于裂解的话
找个标准的protocol用RIPA来做吧，算是经典方法之一，不想配的话公司有卖的。记得
加上protease inhibitor和phoshpatase inhibitor (thermo)也有卖的
我老板平时都不管学生，但每个新生进实验室一般迟早都会被骂一次，算是整个phd培
养过程唯一一次micro-management，常常会说it's scientific research, not
cooking!开始也有点不服气，但后来慢慢意识到每一步仔细一点，其实整体上 |
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h**2
发帖数: 2841 | 31 我们的实验一般细胞都不能太confluent，一般65~90%吧
WCE protein concentration如果用100 ul的RIPA的话有1~2 ug/ul，不过这个跟我们的
spectrometer有关，我们一般1:400 dilute，终浓度太稀的话reading unreliable
Loading的蛋白量的话就根据看什么了，一些oncogene或者tumor suppressor的话我喜
欢10~30 ug，不过30 ug WCE的actin 1:10k，20 min还是太深了，我有时候用tubulin 1:10k，15 min好一点
BioRad的那套东西，15-tooth standard comb的话max应该是55 ul, 10-tooth好像可以
load 80 ul吧？ |
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p*******r
发帖数: 4048 | 32 I suggest CMV-chicken beta actin promoter.
CMV is known to be silenced for many situations. |
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h********n
发帖数: 4079 | 33 谢谢上面各位的意见.
我要用beta-actin-Cre mice, 准备用female Cre mice (homo) 和 LoxP geen A (homo
)杂交, 生下来的小老鼠挑出完全应该是 Cre+/- A+/-, 然后兄弟姐妹交配, 看A-/-的
胚胎发育的情况. 已知A-/-胚胎致死.
现在的问题是, 在比较A-/- 和 A +/+ 胚胎的时候, 我能不能把不同的Cre genotype合
并比较?
谢谢. |
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h********n
发帖数: 4079 | 34 我以前一直做tissue specific的transgenic mice, 不是Cre.
现在用adeno-cre在肺里做肺癌/转移. 另外一个是beta-actin-Cre看看对老鼠胚胎发
育的影响, 这个应该是要完全KO.
cre |
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s******e
发帖数: 370 | 35 还是那句话，看是什么cre
我用的cre是oocyte active，受精后短暂活跃，过了那个阶段就不表达了，所以精子里
来的cre有时就不够effective。beta-actin的话应该会好一点吧
其实我接触这个也才一年多，都是trouble shooting中攒的个人经验而已 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 38 不光是二抗价格的问题。更重要的是，省去了底物反应时间，省去了暗室底片曝光的麻
烦。而且，荧光持久，几个月之后重新扫描仍然清晰。
再有，二抗可以配不同颜色（波长）的荧光。这样一来，同一分子量的两种蛋白可以一
次incubate和成像。例如，需要染磷酸化x蛋白（p-x）和总x蛋白（t-x）。p-x一抗是
mouse的，配上anti-mouse 680（波长）二抗，扫出来是红色；t-x一抗是rabbit的，配
上anti-rabbit 800的二抗，绿色。一张膜就搞定了。定量是，两种颜色互不影响。算p
-x/t-x比值的时候，也不用拿GAPDH或者beta-actin来normalize。 |
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y*******n
发帖数: 127 | 39 RT.
I need to know the exact chemical structure of G-actin and insulin.
Thank you very much! |
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s**e
发帖数: 1523 | 40 从来都只有一条带。。。你做个positive control看看抗体有没有问题？如果胶是自己
做的，那就换commercial的胶试试。如果抗体没问题，胶也没问题，那你换个loading
control的蛋白吧，actin 或者tubulin之类的。 |
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z****g
发帖数: 972 | 41 要求：
1.来源于Col-0的幼苗
2.经过了nomalization,减少了abundant transcripts,比如actin, tubulin等
3.host为普通E.coli,比如W3110或DH5a
4.所在质粒需为E.coli compatible的质粒，本身带有RBS (ribosome binding site)
5.可以受IPTG诱导直接在E.coli中表达
自己google了一堆，没找到合适的。如果板上哪位知道哪里可以购买，请pm |
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U********S
发帖数: 1896 | 42 不是。
你另外需要一个housekeeping基因比如GAPDH，actin, 18s等等，这样每个样本有两个Ct值，一个是测试基因比如A另一个是housekeeping基因B，delta ct是同个样本A和B基因之间差值。由多个样本的话需要计算delta ct的平均值作为这一组的结果，同样方法计算得到另外一组的delta ct。两组delta ct的差值叫delta delta ct，代表实验组和对照组之间的差异，用公式2^(-delta delta ct)可以得到差异的倍数。多个样本之间的delta ct误差计算以及如何传递两组的误差到最后的倍数误差请参考user bulletin#2。 |
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w****l
发帖数: 5 | 43 我正在寻找一对beta Actin qPCR引物， 其要求是既能用于人也能用于小鼠的genomic
DNA 或者cDNA。网络或者文献中确实有很多现成的引物，但都是种属特异性的。各位认
为是否有可能找到我所要的引物吗？ |
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S*********e
发帖数: 127 | 44 Biochem Cell Biol. 1999;77(6):527-42.
Cell adhesion and the actin cytoskeleton of the enveloping layer in the
zebrafish embryo during epiboly.
Zalik SE, Lewandowski E, Kam Z, Geiger B.
a*****[email protected]
thanks alot |
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c****1
发帖数: 1095 | 45 有个问题，一直没有找到明确的答案，还望前辈多多指点。
如果要比较某个mRNA在不同个体，或者不同发育时期的表达水平。一般的做法
是拿个内参（比如actin）作对照，然后比较这个相对值。但问题是，有时候
内参的表达水平也不一定是稳定的。这个时候，也许用绝对定量（也就是用标
准曲线计算出绝对拷贝数）更准备点。但是，这个也是有问题，因为在做RT的
时候，一个mRNA模板不止得到一个cDNA拷贝，因为逆转录酶的活性一直有。
这样一来，之前计算出来的cDNA的绝对拷贝数也只不能反映mRNA的拷贝数。
那究竟怎么才能绝对定量特地的某个mRNA呢？
不知道我说明白没有。 |
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g*******0
发帖数: 2152 | 46 Usually nobody know what locus is the cre located. The safe way to tell cre/
+ or cre/cre is by breeding and look at the Mendelian ratio. But if you pay
enough attention the intensity of PCR genotyping band normally can give you
some clue that two copy PCR band is much brighter than one copy. Better
approach is do cre PCR and a control PCR (say a-actin) in one tube, use the
right cre/+ cre/cre tail DNA control to help you establish the criteria to
judge what is cre/+ or cre/cre (eg. two band wit |
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h********n
发帖数: 4079 | 47 I am thinking of running a microarray, comparing gene expression profile on
beta-actin-Cre homo, hetero and wt mice.
want |
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a*****g
发帖数: 543 | 48 what do you use to extract the RNA? Curious...
Assuming the machine handling wasted 50% of cells(which is a lot), you would
only have one cycle difference, which is not ideal but not terrible.
Then you somehow normalize to a control, such as b-actin. Theoretically you
wouldn't have a problem.... |
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G******O
发帖数: 189 | 49 Is it a chance event?
Look at this figure from another Nature Immunology from his lab in 2008. The
actin bands in fig6b is so similar to the last two bands of Fig6a if rotate
it 180 degrees.
The authors are different from that in the above NI paper except of the
corresponding author.
http://www.nature.com/ni/journal/v9/n5/fig_tab/ni.1604_F6.html |
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