o**4
发帖数: 35028 | 1 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: oct4 (hi), 信区: Biology
标 题: 紧急求助：怎么溶解蛋白质沉淀啊？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 25 10:46:31 2012, 美东)
我做Flag pull down，之后把elution冻在-20°过夜，今天早上解冻的时候发现蛋白质
沉淀，
我加了SDS （终浓度1%），煮了5分钟，还是没见到任何溶解，
请问该怎么溶解蛋白质啊？
用loading buffer煮一下能溶解么？
谢谢 | hr
发帖数: 247 | 2 Try 6 M guanidine or urea. | h**********8
发帖数: 28 | 3 SDS-PAGE Loading buffer直接煮，应该问题不大。
这个loading buffer里面含有SDS和DTT(或者B-MERCAPTETHANOL)还原剂，可以打破双硫
健以及分子之间的吸引力。
一般LOADING BUFFER煮5-10分钟，蛋白完全变性，就ok了。
如果煮了之后，还不行的话，用超声波再打一打，然后再煮。
【在 o**4 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
: 发信人: oct4 (hi), 信区: Biology
: 标 题: 紧急求助：怎么溶解蛋白质沉淀啊？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 25 10:46:31 2012, 美东)
: 我做Flag pull down，之后把elution冻在-20°过夜，今天早上解冻的时候发现蛋白质
: 沉淀，
: 我加了SDS （终浓度1%），煮了5分钟，还是没见到任何溶解，
: 请问该怎么溶解蛋白质啊？
: 用loading buffer煮一下能溶解么？
: 谢谢
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