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发帖数: 210 | 1 EMSA 新手，希望能碰到生物学的老师帮我看看。
我从种子提nuclear extract, 想做EMSA, 用的是DIG-Gel shift kit. 开啥有了
TATABOX （5 repeats) 25bp in length, 试试看蛋白是不是有功能的，结果没加蛋白
的free probe也有带，所以认为我那加了蛋白后产生的带不是真的binding，因为2 带
的位置是一样的。但是有些情况用其他大一点的探针，50bp, 会得到smear. 还有我跑
电泳的胶很小，8x8cm（bio-rad)， 5% native gel. 0.25x TBE buffer, 4C, 80V.
问题：
1）怎么能证明蛋白是用功能的？现在没有binding， 不知是不是蛋白的原因，SDS-
PAGE 检测蛋白还行。抽的几次都是结果差不多，尽管有些带很强且集中在2个区段，但
总体来讲，蛋白的分布大小都有。
2)能不能找个其他probe 做postitive control。 有人可以推见一下啥探针？
3）我是用的nuclear extract, 探针可不可以用200bp 长的。
4)调整些啥才能有好 |
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