c********6
发帖数: 693 | 1 在基因的内含子上面加入一个poly(A)会影响其pre-mRNA和mature-mRNA的
transcription和translation吗？
会不会发生pre-mRNA在转录到poly（A)的位置就停止了，还是会继续转录，然后在mRNA
的成熟加工过程中被切掉，基因的翻译不受任何影响？ |
j*******u
发帖数: 81 | |
l********e
发帖数: 415 | |
c********6
发帖数: 693 | 4 有没有相关的文献呢 昨天跟人讨论从其他实验室拿到的细胞，怀疑这个实验室编辑的
细胞没有去掉selection cassette，同事说如果没有去掉selection cassette，即使它
在intron也会终止pre-mRNA的合成，最终导致带有突变的那个拷贝不能翻译成蛋白质
【在 j*******u 的大作中提到】
: 很大概率会影响
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c********6
发帖数: 693 | 5 Terminators in eukaryotes[edit]
In eukaryotic transcription of mRNAs, terminator signals are recognized by
protein factors that are associated with the RNA polymerase II and which
trigger the termination process. Once the poly-A signals are transcribed
into the mRNA, the proteins cleavage and polyadenylation specificity factor
(CPSF) and cleavage stimulation factor (CstF) transfer from the carboxyl
terminal domain of RNA polymerase II to the poly-A signal. These two factors
then recruit other proteins to the site to cleave the transcript, freeing
the mRNA from the transcription complex, and add a string of about 200 A-
repeats to the 3' end of the mRNA in a process known as polyadenylation.
During these processing steps, the RNA polymerase continues to transcribe
for several kilobases and eventually dissociates from the DNA and downstream
transcript through an unclear mechanism; there are two basic models for
this event known as the torpedo and allosteric models.[7] |
j*******u
发帖数: 81 | 6 如果是反向的作用比较小，但会影响表达level
同向基本废了
【在 c********6 的大作中提到】
: 有没有相关的文献呢 昨天跟人讨论从其他实验室拿到的细胞，怀疑这个实验室编辑的
: 细胞没有去掉selection cassette，同事说如果没有去掉selection cassette，即使它
: 在intron也会终止pre-mRNA的合成，最终导致带有突变的那个拷贝不能翻译成蛋白质
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c********6
发帖数: 693 | 7 有没有相关文献呢？我给我老板解释了，但是他看上去好像不太理解的样子。
【在 j*******u 的大作中提到】
: 如果是反向的作用比较小，但会影响表达level
: 同向基本废了
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j*******u
发帖数: 81 | 8 8,90年代做knockin/out的文章经常讨论这种东西
【在 c********6 的大作中提到】
: 有没有相关文献呢？我给我老板解释了，但是他看上去好像不太理解的样子。
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c********6
发帖数: 693 | |
f*******e
发帖数: 354 | 10 加polya还是类似utr里含有polya信号？是否有tts？ |
c********6
发帖数: 693 | 11 CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCC
CACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGG
GTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
bGH PolyA signal
mammalian terminators (SV40, hGH, BGH, and rbGlob) include the sequence
motif AAUAAA which promotes both polyadenylation and termination. Out of
those listed, the SV40 late polyA and rbGlob polyA are thought to be more
efficient in terminating transcription due to the presence of additional
helper sequences.
为了表达一个插入到基因内含子的Puromycin抗性基因，按理说到最后他们应该把这段
抗性基因切除掉，但是他们没有，他们的理由是因为这段抗性基因在内含子，虽然含有
bGH PolyA signal，但是这整个片段会随着mRNA的编辑被剪除掉而不会影响基因mRNA的
表达。
我想问他们是不是对的？这儿的他们指的是马普学会。我用cDNA去检测这个带有Puro抗
性基因的拷贝有没有成功变成正确的mRNA，很明显没有。
【在 f*******e 的大作中提到】
: 加polya还是类似utr里含有polya信号？是否有tts？
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f*******e
发帖数: 354 | 12 这样的话转录应该就终止了吧。但是如果这个intron后面已经没有编码的exon，那就相
当于替换了基因自己的utr而已，并不一定改变表达水平。
:
CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCC
:
CACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGG
:
GTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
: bGH PolyA signal
: mammalian terminators (SV40, hGH, BGH, and rbGlob) include the
sequence
: motif AAUAAA which promotes both polyadenylation and termination. Out
of
: those listed, the SV40 late polyA and rbGlob polyA are thought to be
more
: efficient in terminating transcription due to the presence of
additional
: helper sequences.
: 为了表达一个插入到基因内含子的Puromycin抗性基因，按理说到最后他们应该
把这段
【在 c********6 的大作中提到】
: CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCC
: CACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGG
: GTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
: bGH PolyA signal
: mammalian terminators (SV40, hGH, BGH, and rbGlob) include the sequence
: motif AAUAAA which promotes both polyadenylation and termination. Out of
: those listed, the SV40 late polyA and rbGlob polyA are thought to be more
: efficient in terminating transcription due to the presence of additional
: helper sequences.
: 为了表达一个插入到基因内含子的Puromycin抗性基因，按理说到最后他们应该把这段
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c********6
发帖数: 693 | 13 这个intron后面还有11个exon，应该是产生truncated mRNA吧
CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCC
CACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGG
【在 f*******e 的大作中提到】
: 这样的话转录应该就终止了吧。但是如果这个intron后面已经没有编码的exon，那就相
: 当于替换了基因自己的utr而已，并不一定改变表达水平。
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: CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCC
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: CACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGG
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: GTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG
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: bGH PolyA signal
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