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Biology版 - 帮忙troubleshooting一下我的culture contamination问题
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请教E. coli 表达的蛋白90% 以上被degrade的掉,怎么避免?有用BL21(DE3 pLysS)表达蛋白的吗?
请教基因克隆纯化蛋白后蛋白质分子量不对的问题。Do you save glycerol stocks for BL21(DE3) or Rosetta2(DE3)
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相关话题的讨论汇总
话题: culture话题: 帮忙话题: phage
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T**********t
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1
这个culture开始长得好像正常,虽然慢一点。可是过了大概十三四个小时之后culture
就开始变清,然后出现这种短线状悬浮物。我怀疑是phage contamination,可是不能
确定,有没有人有经验的?如果真是phage就惨了。。。
T**********t
发帖数: 1604
2
另外我还有个culture,长得速度正常,可是会出现这种团状悬浮物,摇也摇不散。我
以前有culture overgrow的时候也没有这种情况出现,看着又不像是真菌污染,这个又
会是什么情况呢?

culture

【在 T**********t 的大作中提到】
: 这个culture开始长得好像正常,虽然慢一点。可是过了大概十三四个小时之后culture
: 就开始变清,然后出现这种短线状悬浮物。我怀疑是phage contamination,可是不能
: 确定,有没有人有经验的?如果真是phage就惨了。。。

c********g
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3
你在长啥菌

culture

【在 T**********t 的大作中提到】
: 这个culture开始长得好像正常,虽然慢一点。可是过了大概十三四个小时之后culture
: 就开始变清,然后出现这种短线状悬浮物。我怀疑是phage contamination,可是不能
: 确定,有没有人有经验的?如果真是phage就惨了。。。

T**********t
发帖数: 1604
4
E.coli的BL21(DE3)pLysS strain。带的质粒是个小质粒,表达的蛋白不大,只有7kD,
没有细胞毒性。用的培养基是LB+M9 salts,抗生素是Amp+Chloramphenicol。关键是以
前摇菌(同一个strain)都没有这个问题,最近屡屡出现,我不知道是哪里
contaminate了,如果是phage的话,就恐慌了,据说很难清除phage。

【在 c********g 的大作中提到】
: 你在长啥菌
:
: culture

c********g
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5
你有没有streak for isolation 以后 take single colony,然后把antibiotics和
medium都换过吗?
inoculate的时候小心些,不要用什么牙签之类的,也不要用wire loop。。试试用长的
sterile的pipette
看着跟bacilli似的

【在 T**********t 的大作中提到】
: E.coli的BL21(DE3)pLysS strain。带的质粒是个小质粒,表达的蛋白不大,只有7kD,
: 没有细胞毒性。用的培养基是LB+M9 salts,抗生素是Amp+Chloramphenicol。关键是以
: 前摇菌(同一个strain)都没有这个问题,最近屡屡出现,我不知道是哪里
: contaminate了,如果是phage的话,就恐慌了,据说很难清除phage。

T**********t
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6
我都是从streak的fresh plate上挑的单菌落。Medium和antibiotics肯定是好的。
inoculate我都是用sterile pipette tips。
如果是bacilli,为什么一开始会是正常的cloudy的菌液,然后慢慢变清出现这种悬浮
纤维状物质呢?我没养过bacilli,不知道它的生长状况是如何的。
第二张图里那种一团团的菌体是什么呢?除了它之外,那管菌液本身的生长状态和浊度
倒是挺正常的。

【在 c********g 的大作中提到】
: 你有没有streak for isolation 以后 take single colony,然后把antibiotics和
: medium都换过吗?
: inoculate的时候小心些,不要用什么牙签之类的,也不要用wire loop。。试试用长的
: sterile的pipette
: 看着跟bacilli似的

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