c*****0
发帖数: 109 | 1 第一次拿到设计的引物。想问问大家干粉引物稀释后应该怎么分装保存？
网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。这个意思是不是说应该把100uM的引物
溶液分装在N个小离心管中然后冻起来，然后用的时候先稀释一个管到10uM，用完这个
管以后再稀释下一个管到10uM? 如果是这样的话那每个分装多少适合呀？
我担心分装太多了反复冻融影响寿命。 |
a****o
发帖数: 1786 | 2 prepare one tube of 100uM and one tube of 10uM. when you run out of 10uM
working primer, make new one from the 100uM stock. DNA oligo is very tough.
don't worry about it. |
C*******e
发帖数: 4348 | 3 补充一句：除非你做很多反应，比如realtime PCR之类的
一般来说一管50-100ul左右的10 uM的都很少有用完的情况哈
tough.
【在 a****o 的大作中提到】
: prepare one tube of 100uM and one tube of 10uM. when you run out of 10uM
: working primer, make new one from the 100uM stock. DNA oligo is very tough.
: don't worry about it.
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M****e
发帖数: 178 | 4 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。
按字面理解，意思是，引物stock是100uM，如果你的PCR反应体系是20ul，就向PCR
mixture中加2ul的引物stock。
不过，我们做PCR，引物的工作浓度（在PCR反应体系中的浓度）是0.5uM. 我们会把引
物稀释成5uM，每管100ul保存。反复冻融没什么问题。
【在 c*****0 的大作中提到】
: 第一次拿到设计的引物。想问问大家干粉引物稀释后应该怎么分装保存？
: 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。这个意思是不是说应该把100uM的引物
: 溶液分装在N个小离心管中然后冻起来，然后用的时候先稀释一个管到10uM，用完这个
: 管以后再稀释下一个管到10uM? 如果是这样的话那每个分装多少适合呀？
: 我担心分装太多了反复冻融影响寿命。
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n***w
发帖数: 2405 | 5 我都是直接稀释成40uM用的。。。。这就是work solution。。。没有做stock。。。 |
c*****0
发帖数: 109 | 6
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这样的话100uM的stock不是会反复冻融N多次了吗？没有事吗？
【在 a****o 的大作中提到】
: prepare one tube of 100uM and one tube of 10uM. when you run out of 10uM
: working primer, make new one from the 100uM stock. DNA oligo is very tough.
: don't worry about it.
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c*****0
发帖数: 109 | 7 就是real time哈……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 补充一句：除非你做很多反应，比如realtime PCR之类的
: 一般来说一管50-100ul左右的10 uM的都很少有用完的情况哈
:
: tough.
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c*****0
发帖数: 109 | 8
谢谢，我突然好像明白了……
【在 M****e 的大作中提到】
: 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。
: 按字面理解，意思是，引物stock是100uM，如果你的PCR反应体系是20ul，就向PCR
: mixture中加2ul的引物stock。
: 不过，我们做PCR，引物的工作浓度（在PCR反应体系中的浓度）是0.5uM. 我们会把引
: 物稀释成5uM，每管100ul保存。反复冻融没什么问题。
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v***a
发帖数: 1242 | 9 我一般是直接加水成50uM的，然后放在4C。。。有一次碰到引物不好用了的情况
【在 c*****0 的大作中提到】
: 第一次拿到设计的引物。想问问大家干粉引物稀释后应该怎么分装保存？
: 网上说先稀释成100uM保存，工作时稀释为10uM。这个意思是不是说应该把100uM的引物
: 溶液分装在N个小离心管中然后冻起来，然后用的时候先稀释一个管到10uM，用完这个
: 管以后再稀释下一个管到10uM? 如果是这样的话那每个分装多少适合呀？
: 我担心分装太多了反复冻融影响寿命。
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B*****l
发帖数: 261 | 10 我一般用TE配100 uM stock solution，然后用水稀释成10 uM working solution。 |
