d*******i
发帖数: 57 | 1 genotyping PCR 结果是对的，但是WB结果显示目的基因没有被敲除
会是什么原因？ |
n***w
发帖数: 2405 | |
S*****h
发帖数: 21 | |
f*******e
发帖数: 354 | |
x*****6
发帖数: 49 | 5 换抗体
【在 d*******i 的大作中提到】
: genotyping PCR 结果是对的，但是WB结果显示目的基因没有被敲除
: 会是什么原因？
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D****g
发帖数: 275 | 6 +1
【在 f*******e 的大作中提到】
: 太不详细了，ko，cko，iko....
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d*******i
发帖数: 57 | 7 是conditional KO
fl/fl + tissue specific cre
两者genotyping 都是对的。
请教会是什么原因？？
【在 f*******e 的大作中提到】
: 太不详细了，ko，cko，iko....
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d*******i
发帖数: 57 | 8 是conditional KO
fl/fl + tissue specific cre
两者genotyping 都是对的。
请教会是什么原因？？
【在 D****g 的大作中提到】
: +1
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a*******g
发帖数: 33 | 9 是lysm cre吗？有效果不佳的，可能跟蛋白本身half life太长有关。其他的原因比如
，flox设计不合理，导致部分敲除，其余部分蛋白还能表达；被敲除片段过长，形成
episome。也可能产生了变化，但是变化比较小， wb要细心一点定量
【在 d*******i 的大作中提到】
: genotyping PCR 结果是对的，但是WB结果显示目的基因没有被敲除
: 会是什么原因？
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f*******e
发帖数: 354 | 10 先假设抗体特异，cre好使，loxp正确。
你检测下你可以切掉的部分，有些时候切掉一个exon还能形成转录本，不frameshift还
能有蛋白。primer至少一头设计在切除的部分上。做个pcr。
: 是conditional KO
: fl/fl tissue specific cre
: 两者genotyping 都是对的。
: 请教会是什么原因？？
【在 d*******i 的大作中提到】
: 是conditional KO
: fl/fl + tissue specific cre
: 两者genotyping 都是对的。
: 请教会是什么原因？？
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d*******i
发帖数: 57 | 11 谢谢你的建议。
我的flox mice 是别人给的，发过文章的。不过他们用的其他组织的cre
而我们用的另外一个组织的cre. 我们的cre也应该没有问题（和其他癌基因cross后能
成瘤）
【在 f*******e 的大作中提到】
: 先假设抗体特异，cre好使，loxp正确。
: 你检测下你可以切掉的部分，有些时候切掉一个exon还能形成转录本，不frameshift还
: 能有蛋白。primer至少一头设计在切除的部分上。做个pcr。
:
:
: 是conditional KO
:
: fl/fl tissue specific cre
:
: 两者genotyping 都是对的。
:
: 请教会是什么原因？？
:
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n******e
发帖数: 89 | 12 可能是overlapping PCR，同源DNA在vector和基因组里面都有，两个不相干的DNA分子
粘在一起放大了。用过一个PCR enzyme特别好，也发生过这个现象。不好的PCR enzyme
不会发生。降低PCR的循环数会去除这个overlapping PCR。 |
A**W
发帖数: 50 | 13
应为你组织不纯，里面是个mixture， 其实敲出了，没有敲出掩盖你敲出效率
【在 d*******i 的大作中提到】
: 是conditional KO
: fl/fl + tissue specific cre
: 两者genotyping 都是对的。
: 请教会是什么原因？？
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s*****v
发帖数: 274 | |
