r******k
发帖数: 446 | 1 如题。 小弟想想做cell line的KI。不知道哪位大神做过？ 质粒我都拿到了。 不知道
大家都用什么样的protocol呢？
非常感谢 |
T****u
发帖数: 424 | 2 直接转染筛选即可
【在 r******k 的大作中提到】
: 如题。 小弟想想做cell line的KI。不知道哪位大神做过？ 质粒我都拿到了。 不知道
: 大家都用什么样的protocol呢？
: 非常感谢
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l*********i
发帖数: 332 | 3 ssDNA oligo as donor, puro screen, should be easy~
【在 r******k 的大作中提到】
: 如题。 小弟想想做cell line的KI。不知道哪位大神做过？ 质粒我都拿到了。 不知道
: 大家都用什么样的protocol呢？
: 非常感谢
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f*******g
发帖数: 245 | 4 crisper/CAS9 究竟怎么工作？ homologous recombination ? or RNAi ? |
M*****n
发帖数: 16729 | 5 楼上二位能不能多分享一些经验？
具体讲讲要注意点啥
【在 f*******g 的大作中提到】
: crisper/CAS9 究竟怎么工作？ homologous recombination ? or RNAi ?
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r******k
发帖数: 446 | 6 是呀 光这么说 小弟愚钝不太懂。。。
【在 M*****n 的大作中提到】
: 楼上二位能不能多分享一些经验？
: 具体讲讲要注意点啥
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r******k
发帖数: 446 | 7 大神 有具体操作吗？ 小弟愚钝。。。
【在 l*********i 的大作中提到】
: ssDNA oligo as donor, puro screen, should be easy~
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r******k
发帖数: 446 | 8 大神 有具体操作吗？ 小弟愚钝。。。
【在 l*********i 的大作中提到】
: ssDNA oligo as donor, puro screen, should be easy~
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l*********i
发帖数: 332 | 9 zhang feng的nature protocol写的如此详细，看看去啊
【在 r******k 的大作中提到】
: 大神 有具体操作吗？ 小弟愚钝。。。
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r******k
发帖数: 446 | 10 好的好的！
【在 l*********i 的大作中提到】
: zhang feng的nature protocol写的如此详细，看看去啊
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m*********D
发帖数: 1727 | 11 Thanks a lot! Just assigned by my boss to develop this technology for the
lab.
【在 l*********i 的大作中提到】
: zhang feng的nature protocol写的如此详细，看看去啊
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r***z
发帖数: 19 | 12
ssDNA转染细胞效率很低吧？？？
【在 l*********i 的大作中提到】
: ssDNA oligo as donor, puro screen, should be easy~
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j******i
发帖数: 939 | 13 转染效率跟哪种细胞有关。CRISPR+ssDNA要拿到想要的克隆还是挺费劲的。可以考虑
CRISPR+piggybac＋puroTK的结合来筛选克隆。
【在 r***z 的大作中提到】
:
: ssDNA转染细胞效率很低吧？？？
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s*****g
发帖数: 87 | 14 不需要antibiotic selection的方法。
Isolation of single-base genome-edited human iPS cells without antibiotic
selection
Yuichiro Miyaoka, Amanda H Chan, Luke M Judge, Jennie Yoo, Miller Huang,
Trieu D Nguyen, Paweena P Lizarraga, Po-Lin So & Bruce R Conklin
Nature Methods 11, 291–293 (2014) doi:10.1038/nmeth.2840 |
