z**b
发帖数: 192 | 1 与蛋白质结合的DNA用酶处理后需提纯。难点在于结合的蛋白质不能去除，蛋白不能变
性，这样就不能用phenol/chloroform或spin column的方法了。请教各位有没有简单可
行的方法，在下先行谢过了。 |
m*********D
发帖数: 1727 | 2 你是要纯化总个DNA-protein complex还是拆开complex就纯化DNA?一般DNA-protein结
合，需要一定的盐浓度，高KCl浓度，象300mM就可以了。这是许多纯化DNA/RNA
binding protein，从affinity column上把蛋白里洗脱下来的条件。 |
z**b
发帖数: 192 | 3 感谢回帖。我要的是纯化总的DNA-protein complex（上面crosslink的蛋白不能去除，
不能变性）, 需要将酶和反应buffer里的成分都去除干净，还要求recovery的百分比较
高，方法简单易行。望不吝赐教。
【在 m*********D 的大作中提到】
: 你是要纯化总个DNA-protein complex还是拆开complex就纯化DNA?一般DNA-protein结
: 合，需要一定的盐浓度，高KCl浓度，象300mM就可以了。这是许多纯化DNA/RNA
: binding protein，从affinity column上把蛋白里洗脱下来的条件。
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s******y
发帖数: 28562 | 4 能不能用 agarose-conjugated DNaseI把DNA消化掉？然后过一下一次性的柱子，就把
DNaseI和小片断的DNA 都同时去掉了。
【在 z**b 的大作中提到】
: 与蛋白质结合的DNA用酶处理后需提纯。难点在于结合的蛋白质不能去除，蛋白不能变
: 性，这样就不能用phenol/chloroform或spin column的方法了。请教各位有没有简单可
: 行的方法，在下先行谢过了。
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z**b
发帖数: 192 | 5 感谢回复。可惜我是要蛋白质和DNA都保留。
【在 s******y 的大作中提到】
: 能不能用 agarose-conjugated DNaseI把DNA消化掉？然后过一下一次性的柱子，就把
: DNaseI和小片断的DNA 都同时去掉了。
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d****i
发帖数: 2346 | 6 你这个蛋白是已知的吗？如果是已知的，那么用这个蛋白的抗体（conjugated to
beads）和你的complex孵育一下，然后挂在磁性柱子上，杂蛋白洗掉。。。。。 |
s******y
发帖数: 28562 | 7 这样的啊，我还以为你是想把蛋白质和DNA分开呢。
那些经常做ChiP 的人应该有比较好的办法吧。
比方说你应该可以用DEAE resin (positively charged) 来收集DNA啊。
比方说QIAGEN Anion-Exchange Resin。
相应的蛋白也会被留下来的。
【在 z**b 的大作中提到】
: 感谢回复。可惜我是要蛋白质和DNA都保留。
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f*****r
发帖数: 84 | 8 不能平行做两个sample 么， 一个留蛋白， 一个留 DNA, 这样简单很多。 否则就看升
高盐浓度行不行了。 |
R******0
发帖数: 6158 | |
m********e
发帖数: 349 | 10 对阿，不能过一个size exclusion的柱子么， 把小于10kd的都留在柱子里。
【在 R******0 的大作中提到】
: 不能一起过个gel filtration柱子？
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