t******y
发帖数: 716 | 1 最近做一个蛋白，处理后mRNA 升高了10倍，蛋白量却下降了有将近80%。你们会认为问
题出在哪里？有没有谁碰到类似的情况？
1）蛋白翻译受到抑制，蛋白降解提高。
2）蛋白降解抑制。
为什么细胞需要做这样的调整？
用的细胞是上皮细胞。 |
s******s
发帖数: 13035 | 2 首先你要确定确实原来的mRNA升高了10倍，而不是alternative splicing一类的
【在 t******y 的大作中提到】
: 最近做一个蛋白，处理后mRNA 升高了10倍，蛋白量却下降了有将近80%。你们会认为问
: 题出在哪里？有没有谁碰到类似的情况？
: 1）蛋白翻译受到抑制，蛋白降解提高。
: 2）蛋白降解抑制。
: 为什么细胞需要做这样的调整？
: 用的细胞是上皮细胞。
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a*******g
发帖数: 33 | 3 会不会是体内的siRNA导致的转录后抑制？有做siRNA的可以出来讲讲 |
p****p
发帖数: 3360 | 4 1. 前面有一个人说得好，要仔细查看是否有alternative splicing导致其他isoform
增多，而你检查的isoform随之下降了。也就是说，看看你检查的mRNA和protein是否来
自同一个isoform。
2. 另外看看你的蛋白是否有转录后调控的功能。看看它是否能反馈调节自己。
3. 你的蛋白是生物钟调控的。你的mRNA，蛋白取样的时间不一样，所以丰度高低也就
不同了。
【在 t******y 的大作中提到】
: 最近做一个蛋白，处理后mRNA 升高了10倍，蛋白量却下降了有将近80%。你们会认为问
: 题出在哪里？有没有谁碰到类似的情况？
: 1）蛋白翻译受到抑制，蛋白降解提高。
: 2）蛋白降解抑制。
: 为什么细胞需要做这样的调整？
: 用的细胞是上皮细胞。
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t******y
发帖数: 716 | 5 1. 目前看到的2个isoforom的蛋白量都下降。
2. 你是指转录后反向抑制蛋白合成？
3. 应该和生物钟没有关系。
【在 p****p 的大作中提到】
: 1. 前面有一个人说得好，要仔细查看是否有alternative splicing导致其他isoform
: 增多，而你检查的isoform随之下降了。也就是说，看看你检查的mRNA和protein是否来
: 自同一个isoform。
: 2. 另外看看你的蛋白是否有转录后调控的功能。看看它是否能反馈调节自己。
: 3. 你的蛋白是生物钟调控的。你的mRNA，蛋白取样的时间不一样，所以丰度高低也就
: 不同了。
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f******o
发帖数: 427 | 6 蛋白降解加快，而RNA代偿性升高，可以比较一下处理前后蛋白ubiquitin化的水平。
【在 t******y 的大作中提到】
: 最近做一个蛋白，处理后mRNA 升高了10倍，蛋白量却下降了有将近80%。你们会认为问
: 题出在哪里？有没有谁碰到类似的情况？
: 1）蛋白翻译受到抑制，蛋白降解提高。
: 2）蛋白降解抑制。
: 为什么细胞需要做这样的调整？
: 用的细胞是上皮细胞。
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n**8
发帖数: 221 | 7 你用什么方法检测mRNA水平的? qRT-PCR 还是northern。
如果是我，我会去检测是否存在anti-sense RNA（noncoding RNA）。
会不会只是anti-sense RNA水平上升？ |
t******y
发帖数: 716 | |
i*****g
发帖数: 11893 | 9 你的RNA extract里面DNA去干净没有？
另外，RNA的事情和蛋白可以差很远 |
n**8
发帖数: 221 | 10 qRT-PCR引物一般跨intron吧...
【在 i*****g 的大作中提到】
: 你的RNA extract里面DNA去干净没有？
: 另外，RNA的事情和蛋白可以差很远
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