J****n
发帖数: 156 | 1 在下做植物的，猜想T2A puro应该是个promoter吧？谢谢解惑。 |
d****d
发帖数: 214 | 2 T2A编码的是一个peptide，可以连接两个蛋白质的coding sequence使其转录时为一个
mRNA但在翻译时分开成为两个独立的蛋白。
以你的问题为例子，你可以在T2A上游插入你感兴趣的蛋白质的coding sequence，最终
你的蛋白和puromycin resistant gene (Puromycin N-acetyl-tranferase)所编码的蛋
白会被翻译成两个蛋白。这种同时表达多个基因的策略同IRES策略相比，好处是上下游
蛋白的比例理论上讲是严格的1：1.
【在 J****n 的大作中提到】
: 在下做植物的，猜想T2A puro应该是个promoter吧？谢谢解惑。
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J****n
发帖数: 156 | 3 感谢你的解答
【在 d****d 的大作中提到】
: T2A编码的是一个peptide，可以连接两个蛋白质的coding sequence使其转录时为一个
: mRNA但在翻译时分开成为两个独立的蛋白。
: 以你的问题为例子，你可以在T2A上游插入你感兴趣的蛋白质的coding sequence，最终
: 你的蛋白和puromycin resistant gene (Puromycin N-acetyl-tranferase)所编码的蛋
: 白会被翻译成两个蛋白。这种同时表达多个基因的策略同IRES策略相比，好处是上下游
: 蛋白的比例理论上讲是严格的1：1.
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w*e
发帖数: 740 | 4 顺便问一个，
但是2A的原理是"ribosome skip",所以在前后两个蛋白的尾巴处都多留了一个或者几个
氨基酸，难道没人怀疑过会这个也许会影响蛋白的功能？
【在 d****d 的大作中提到】
: T2A编码的是一个peptide，可以连接两个蛋白质的coding sequence使其转录时为一个
: mRNA但在翻译时分开成为两个独立的蛋白。
: 以你的问题为例子，你可以在T2A上游插入你感兴趣的蛋白质的coding sequence，最终
: 你的蛋白和puromycin resistant gene (Puromycin N-acetyl-tranferase)所编码的蛋
: 白会被翻译成两个蛋白。这种同时表达多个基因的策略同IRES策略相比，好处是上下游
: 蛋白的比例理论上讲是严格的1：1.
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S*********s
发帖数: 304 | 5 可能会
对于2A前面的蛋白，如果C terminal序列有功能的话，还是用 IRES吧
对于2A后面的蛋白，一般就是Puro或fluoresence protein，关系不大。
【在 w*e 的大作中提到】
: 顺便问一个，
: 但是2A的原理是"ribosome skip",所以在前后两个蛋白的尾巴处都多留了一个或者几个
: 氨基酸，难道没人怀疑过会这个也许会影响蛋白的功能？
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w*e
发帖数: 740 | 6 有的2A后面就是接的是功能蛋白
记得iPS的4个因子的小鼠就是这么造的
【在 S*********s 的大作中提到】
: 可能会
: 对于2A前面的蛋白，如果C terminal序列有功能的话，还是用 IRES吧
: 对于2A后面的蛋白，一般就是Puro或fluoresence protein，关系不大。
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