C********4
发帖数: 308 | 1 我有一个酶，切一段双链DNA出来，最后得到的是5端缩进去三个碱基。希望把这个缩进
去的补回来，最好还能伸出去一些碱基。
能否清楚的说一下，到底怎么做？
非常感谢！ |
u**********d
发帖数: 573 | 2 擦！这是在寻找3-5 polymerase吗？不知有没有COW又招。 |
C********4
发帖数: 308 | 3 晕。。是不是用没有3-5 exo活性的klenow就可以啊？能补齐，然后再加一个A？
【在 u**********d 的大作中提到】
: 擦！这是在寻找3-5 polymerase吗？不知有没有COW又招。
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j****x
发帖数: 1704 | 4 取决于你接下来具体想干吗了，我相信一般会有办法不需要先发明一个新型聚合酶，呵
呵 |
s******s
发帖数: 13035 | 5 不能把多出那段切掉么
【在 C********4 的大作中提到】
: 我有一个酶，切一段双链DNA出来，最后得到的是5端缩进去三个碱基。希望把这个缩进
: 去的补回来，最好还能伸出去一些碱基。
: 能否清楚的说一下，到底怎么做？
: 非常感谢！
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u**********d
发帖数: 573 | 6 你的不是5'缩进么，klenow只能补5’突出的吧。加A我记得只有taq才可以，而且是加
在3’。T4 DNA polymerase好像可以把3’突出切掉，不过你要的是补平。
【在 C********4 的大作中提到】
: 晕。。是不是用没有3-5 exo活性的klenow就可以啊？能补齐，然后再加一个A？
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w*e
发帖数: 740 | 7 klenow works for your purpose.
no addition of " A"
【在 C********4 的大作中提到】
: 我有一个酶，切一段双链DNA出来，最后得到的是5端缩进去三个碱基。希望把这个缩进
: 去的补回来，最好还能伸出去一些碱基。
: 能否清楚的说一下，到底怎么做？
: 非常感谢！
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H*g
发帖数: 2333 | 8 Get a NEB catalog.
【在 C********4 的大作中提到】
: 我有一个酶，切一段双链DNA出来，最后得到的是5端缩进去三个碱基。希望把这个缩进
: 去的补回来，最好还能伸出去一些碱基。
: 能否清楚的说一下，到底怎么做？
: 非常感谢！
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a*******a
发帖数: 4233 | 9 如果没理解错， 你的意思是这样的吧
AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
3" overhang是没有办法补的。
能做的就是用KOD plus之类的高保真PCR酶或者klenow把overhang切掉，然后直接连接
或者用普通PCR酶加A以后做TAclone
一般按照PCR体系不加primer， 95度hotstart5min， 然后分别68/72度保温10min就可以
我是懒得用klenow的。。 |
b****r
发帖数: 17995 | |
g***j
发帖数: 40861 | |
s********n
发帖数: 2939 | 12 设计primer带有你要的酶切位点（能够使你的5‘伸出来），PCR扩增后再酶切 |
z*h
发帖数: 773 | 13 Try this new technology. One day work.No kit needed.no colony PCR.
http://aem.asm.org/content/early/2011/12/16/AEM.07105-11.abstra |
