关于从分行和未分化的3T3L1提取RNA - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 关于从分行和未分化的3T3L1提取RNA

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m***o 发帖数: 272	1 加TRIreagent时，发现分化的细胞，因为lipid比较多，就离心了一下，然后发现离心后，我做的这个gene RT-PCR 比不离心要多出来很多。但是这个离心对没分化的细胞变化就不大。这样我比较分化和没分化时的gene 表达就会因为这个离心而不同。离心后，分化的细胞有些pellet，估计是没有裂解的细胞核。这样离心后cytosol的RNA 就会多很多。但是没分化的细胞因为细胞量少，所以裂解的充分些。请问该怎么做才能最客观检测变化呢？
a*****n 发帖数: 2835	2 你用的总RNA不定量一下吗？ RNA 【在 m***o 的大作中提到】 : 加TRIreagent时，发现分化的细胞，因为lipid比较多，就离心了一下，然后发现离心 : 后，我做的这个gene RT-PCR 比不离心要多出来很多。但是这个离心对没分化的细胞变 : 化就不大。这样我比较分化和没分化时的gene 表达就会因为这个离心而不同。 : 离心后，分化的细胞有些pellet，估计是没有裂解的细胞核。这样离心后cytosol的RNA : 就会多很多。但是没分化的细胞因为细胞量少，所以裂解的充分些。 : 请问该怎么做才能最客观检测变化呢？
m***o 发帖数: 272	3 当然定量了。现在觉得如果离心了，分行的细胞会多胞浆的RNA。不离心，就是细胞核和胞浆的都很多。离心对不分化的细胞影响不大。这样即使定量，离心和不离心获得的 RNA就在分化和不分化比较时就会不一样。

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