x***o
发帖数: 47 | 1 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
单体位置
也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
什么好
办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢 |
o****e
发帖数: 1011 | 2 就是“很容易被氧化（交联）”的缘故吧
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
: 单体位置
: 也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
: 什么好
: 办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢
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m**z
发帖数: 787 | 3 try to run the Ni-column with TCEP in the buffer. TCEP should not interfere
with the Ni-column and can protect the Cys residues.
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
: 单体位置
: 也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
: 什么好
: 办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢
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h*****b
发帖数: 492 | 4 所有buffer里面加BME,或者deoxgyen buffer.
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
: 单体位置
: 也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
: 什么好
: 办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢
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g*********r
发帖数: 9366 | 5 Ni-column buffer 加BME， 管里加DTT，不可能交联
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
: 单体位置
: 也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
: 什么好
: 办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢
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e****s
发帖数: 1125 | 6 多聚也不完全就是disulfide bond. 你要是加了足够的DTT，就算Ni-column组分形成2
硫健，应该
也能打开。
可以试试看变化盐浓度，不知道你现在盐浓度多少。看看提高盐浓度有没有改变多聚和
单聚体间的比
例。另外，有时候盐浓度也能提高浓缩过程的的稳定性，大部分蛋白在100-500mM NaCl
比较稳定。还
有就是浓缩方法也很重要。
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的一个蛋白有4个cys，下了ni柱就加了dtt，过分子筛时大部分在外水体积出来，在
: 单体位置
: 也有一点，但是不纯，外水体积出的一浓缩就沉淀，单体位置的没事，请问各位大侠有
: 什么好
: 办法消除多聚吗，还有沉淀是什么原因，谢谢
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C*******e
发帖数: 4348 | 7 顶这个！
2
NaCl
【在 e****s 的大作中提到】
: 多聚也不完全就是disulfide bond. 你要是加了足够的DTT，就算Ni-column组分形成2
: 硫健，应该
: 也能打开。
: 可以试试看变化盐浓度，不知道你现在盐浓度多少。看看提高盐浓度有没有改变多聚和
: 单聚体间的比
: 例。另外，有时候盐浓度也能提高浓缩过程的的稳定性，大部分蛋白在100-500mM NaCl
: 比较稳定。还
: 有就是浓缩方法也很重要。
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x***o
发帖数: 47 | 8 我的蛋白过Ni盐浓度是500mM，上分子筛时换成200mM，请问蛋白聚集除了二硫键还有其
他什么原因吗，谢谢。 |
p****y
发帖数: 95 | |
e****s
发帖数: 1125 | 10 就是一般的表面电荷或者疏水作用。
所以我建议改变盐浓度，如果是正负电荷作用占主导的话，那么高盐情况下，会有更多
的单体出现。反
之，如果是疏水作用的话，高盐下，更多的多聚体。另外我相信你都跑过SDS，确定分
子筛的两个组分都
是你的目标蛋白。
【在 x***o 的大作中提到】
: 我的蛋白过Ni盐浓度是500mM，上分子筛时换成200mM，请问蛋白聚集除了二硫键还有其
: 他什么原因吗，谢谢。
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