S*******e
发帖数: 17 | 1 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 如果只是做标记信号可以，因为有些抗体其实就是针对5xHis 设计的，
如果想用来pulldown 那应该不行
【在 S*******e 的大作中提到】
: 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个
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g*********r
发帖数: 9366 | 3 ?
I remember that both 5 and 6 histag is working fine with Ni resin
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果只是做标记信号可以，因为有些抗体其实就是针对5xHis 设计的，
: 如果想用来pulldown 那应该不行
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s******y
发帖数: 28562 | 4 啊？这个我还得不知道。5个也行么? 特异性怎么样？
【在 g*********r 的大作中提到】
: ?
: I remember that both 5 and 6 histag is working fine with Ni resin
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t**s
发帖数: 284 | 5 It's binding to the Ni resin will be weaker. In fact, many histidine
residues in proteins can bind to Ni/Mn etc, just that their binding are much
weaker.
【在 s******y 的大作中提到】
: 啊？这个我还得不知道。5个也行么? 特异性怎么样？
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s********n
发帖数: 2939 | 6 Re this.
应该能够bind到resin上，可能结合力下降一些（Imidazole洗脱的浓度低）。有时候不
一定是坏事，可能会提高分辨率。
much
【在 t**s 的大作中提到】
: It's binding to the Ni resin will be weaker. In fact, many histidine
: residues in proteins can bind to Ni/Mn etc, just that their binding are much
: weaker.
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T**********t
发帖数: 1604 | |
m*p
发帖数: 226 | 8 Positive and negative charge interaction may be weakened, but still will be
fine.
You are lucky, as you missed three nucleotides, but not two or one. |
j****x
发帖数: 1704 | 9 hehe，不厚道的说，你应该被劝退哈
【在 S*******e 的大作中提到】
: 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个
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I**l
发帖数: 74 | |
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y***i
发帖数: 11639 | 11 与其问来问去，做实验担惊受怕，不如重做。
【在 S*******e 的大作中提到】
: 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个
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g*****y
发帖数: 6325 | 12 这个想都不想打回去重做。
【在 S*******e 的大作中提到】
: 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个
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y***i
发帖数: 11639 | 13 hehehe。。。。我同意啊。
做错实验没问题，但这种事情还心存侥幸想能不能做下去，除非是老板钱不够想省钱
。不然只能说懒到不知轻重的地步，继续做生物，估计没什么希望。
【在 j****x 的大作中提到】
: hehe，不厚道的说，你应该被劝退哈
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h**********r
发帖数: 671 | 14 应该没啥问题吧，看看sigma家的MAT-tag, HNHRHKH.人家隔一个才是His,照样行。MAT-
Tag (Metal Affinity Tag) |
s******y
发帖数: 28562 | 15 我倒。。。
你这个例子有问题。
MAT-
【在 h**********r 的大作中提到】
: 应该没啥问题吧，看看sigma家的MAT-tag, HNHRHKH.人家隔一个才是His,照样行。MAT-
: Tag (Metal Affinity Tag)
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s********n
发帖数: 2939 | 16 不至于吧。
如果不赶时间的话可以试试，其实His tag也有多种versions，只是6xHis常用而已。但
如果赶时间可以重新克隆，同时验证这个5xHis tag是否work。
不是很明白为什么要加his tag在primer上呢？没有带His tag的vector？
【在 y***i 的大作中提到】
: hehehe。。。。我同意啊。
: 做错实验没问题，但这种事情还心存侥幸想能不能做下去，除非是老板钱不够想省钱
: 。不然只能说懒到不知轻重的地步，继续做生物，估计没什么希望。
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