g*********r
发帖数: 9366 | 1 ?
I remember that both 5 and 6 histag is working fine with Ni resin |
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M********r
发帖数: 278 | 2 Really like what histag recommends. But keep in mind that this is a long
term portfolio for retirement. Very likely what will happen is that some of
the components will underperform badly and some will out perform for a
period of time. Don't dump the loser and chase the winner. Simply rebalance
the portfolio to its original allocation. I believe vanguard has the option
to do this automatically for you. Don't time the market. and that's a really
difficult thing to do for some people. |
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h****g
发帖数: 259 | 3 【 以下文字转载自 EB23 讨论区 】
发信人: histag (stone), 信区: EB23
标 题: 有I-193入境的吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 30 10:08:53 2015, 美东)
I-485上怎么填入境和签证信息？Status按I-94填，visa部分填N/A？求解 |
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y******0
发帖数: 8807 | 4 Transfer $10.0 to vilta... @ level 2.....successful
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Transfer $10.0 t... 阅读全帖 |
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j******g
发帖数: 1428 | 5 我觉得2类本财年到13年还是挺乐观的。
目前为止，相比于上财年，才绿了53.23%，（305/573）。
根据histag发的数据，下个月排期不动，估计板上报绿就是20个左右。
这样就算下个月末，本财年比上财年，都没绿到60%。 |
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m****m
发帖数: 395 | 6 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
了？大家说说有没有这种情况？
而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪 |
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c*****t
发帖数: 198 | 7 我最近一直在表达一个膜蛋白在壁膜间隙的那段。DNA sequence也是对的， 但是不知
为什么跑SDS胶时总是发现多出３kD。 我是用的Histag过的柱。 |
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g*****y
发帖数: 6325 | 8 很多都可以。 histag, tev 什么的都可以自己加。 又不难。 |
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S*******e
发帖数: 17 | 9 本来要加6个的，设计primer时没仔细数，结果测序出来只有5个 |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 如果只是做标记信号可以，因为有些抗体其实就是针对5xHis 设计的，
如果想用来pulldown 那应该不行 |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 啊？这个我还得不知道。5个也行么? 特异性怎么样？ |
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t**s
发帖数: 284 | 12 It's binding to the Ni resin will be weaker. In fact, many histidine
residues in proteins can bind to Ni/Mn etc, just that their binding are much
weaker. |
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s********n
发帖数: 2939 | 13 Re this.
应该能够bind到resin上，可能结合力下降一些（Imidazole洗脱的浓度低）。有时候不
一定是坏事，可能会提高分辨率。
much |
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m*p
发帖数: 226 | 15 Positive and negative charge interaction may be weakened, but still will be
fine.
You are lucky, as you missed three nucleotides, but not two or one. |
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y***i
发帖数: 11639 | 20 hehehe。。。。我同意啊。
做错实验没问题，但这种事情还心存侥幸想能不能做下去，除非是老板钱不够想省钱
。不然只能说懒到不知轻重的地步，继续做生物，估计没什么希望。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 21 应该没啥问题吧，看看sigma家的MAT-tag, HNHRHKH.人家隔一个才是His,照样行。MAT-
Tag (Metal Affinity Tag) |
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s********n
发帖数: 2939 | 23 不至于吧。
如果不赶时间的话可以试试，其实His tag也有多种versions，只是6xHis常用而已。但
如果赶时间可以重新克隆，同时验证这个5xHis tag是否work。
不是很明白为什么要加his tag在primer上呢？没有带His tag的vector？ |
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s******s
发帖数: 13035 | 24 应该可以吧。GST还是比较容易纯化的，不想histag |
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g*********r
发帖数: 9366 | 25 有的地方有相当好的resource
有的地方有cloning facility, high throughput crsytallogrphy screening
facility
你拿来coding sequence，你说要放到什么vector 里面，histag, GST tag, mbp tag
同时尝试， 要什么mutant/truncation , 几种选择，一个礼拜交活，你拿走plasmid,
然后你拿去fermentation facility长
回去自己纯化， 然后robot setup box， robot inspection,
没有这些的结构小组，是无论如何不会有竞争力的 |
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X*******0
发帖数: 134 | 26 做了,是带Tag的.你说的这些Tag,能解决问题吗?补充一下:我已经试了往蛋白C端和
HisTag之间塞了从4个一直到16个氨基酸长度的Tail或者说linker,还是不挂柱,我怀疑
我C端包在蛋白构象内部包得很深.你说的2种也是基于Tag的,会不会也有这样的Tag被包
的问题?能不能有不依靠Tag的,比如分子筛什么的有可行性吗? |
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s*******e
发帖数: 1010 | 27 Hisx10肯定不是灵丹妙药，我做的时候大概只有一半相对于Hisx6产率有所提高。螯合
金属当然不会有太多的His参与，但也有个His的局部浓度的问题。一个明显的例子就是
我有几个即使连着Hisx10的蛋白，咪唑梯度洗脱的时候也是先洗脱单体，再提高浓度才
洗脱二聚体。如果10和20个His有差别，我认为6和10有差别是必然的。
因为还没见过有副作用的例子，所以只好一律X10了。你说的影响溶解度的情况我还没
遇到过——His-tag影响溶解度是肯定的，但是没遇到过长短Histag影响的差别明显的
情况。
至于影响结晶，从来不敢带着Tag去长晶体，无论x6还是x10，一律切掉再说。 |
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r******t
发帖数: 629 | 28 我用agilent的Site-Directed Mutagenesis Kit在蛋白的N端加6 his tag。
分两步加的，一次加三个，结果第一次三个加得很容易，第二次的三个就是加不上，
primer也是靠agilent自己网上的primer design做的。
不知道有啥办法吗？
目前好郁闷啊。
另外，有没有人试过用3个his的tag来纯化呢？ |
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r******t
发帖数: 629 | 32 哦呵呵，谢谢指导。
我觉得这个round the horn也挺有意思的。
嗯，这个网站也很有趣。 |
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b******y
发帖数: 627 | 33 3 His is not close to be enough for purification. At least 6 His. If you can
, 8 or 10.
5' long primer containing: overhang sequence (e.g. GGAA); cloning site (make
sure in frame); His6 ---5' of your gene, should be the way to go as
abovementioned. |
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m******5
发帖数: 1383 | 34 怎么可能6his加不上？引物应该有问题，我1xflag2xha8glycine 都是一次性在引物上
加的 |
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b******y
发帖数: 627 | 35 He/she is doing mutagenesis. |
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s******y
发帖数: 28562 | 36 3个不可以，最短必须要四个。
另外，如果你非要用site directed mutagenesis 的话，最好不要用完全一样的
his codon. |
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s******9
发帖数: 283 | 37 我问过NEB的人，如果要用histag，他们得付专利费。 |
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发帖数: 1 | 39 先看看带着hisTag的Ago能否正确将C-端正位。 |
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m*********k
发帖数: 10521 | 40 "[Money]zengdl Dec 24 ● 包子贴 - 圣诞节快乐"
扣除版面:(Money)6444伪币成功
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m*********k
发帖数: 10521 | 41 "[NCAA]fullbloom Jan 13 ● 热烈庆祝Ohio State Buckeyes夺得CFP冠军"
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m*********k
发帖数: 10521 | 42 "[NCAA]bsfac Jan 12 ● 八盖人品包子"
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m*********k
发帖数: 10521 | 43 "[NCAA]bsfac Jan 2 ● 眼眶已经湿润，如果俄亥俄州立能勇夺2015大学"
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m*********k
发帖数: 10521 | 44 "[Football]RW3 Jan 19 ● 绿湾准备比较足，海鹰应变比较好。"
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m*********k
发帖数: 10521 | 45 "[Football]PetTurtle Feb 5 ● 海鹰赛季包"
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m*********k
发帖数: 10521 | 46 "[Joke]walkpanda Feb 19 ● 大年初一，给大家拜年发包子了"
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m*********k
发帖数: 10521 | 47 "[Football]RW3 Aug 6 ● 大家好， 新人报到"
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