v***a
发帖数: 1242 | 1 目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用，想看看substrate的哪一个磷酸
基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate，再用Phospho
-Specific的抗体去看（WB）。用过invitrogen的抗体做WB，signal非常弱，几乎看不
出来。请问大家有什么推荐的抗体吗？像anti-phosphotyrosine啊、anti-
posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
酸化作用？
谢谢！ |
F**********e
发帖数: 158 | 2 如果你确定你的蛋白有磷酸化的化， 你可以ip大量的蛋白做质朴
可以确定你的蛋白中那个为点被磷酸化了 |
h*******n
发帖数: 2052 | |
v***a
发帖数: 1242 | 4 谢谢！
【在 F**********e 的大作中提到】
: 如果你确定你的蛋白有磷酸化的化， 你可以ip大量的蛋白做质朴
: 可以确定你的蛋白中那个为点被磷酸化了
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v***a
发帖数: 1242 | 5 谢谢！看了不错，打算买了试试。
不知道你用过EMD（Calbiochem）的没？好多的clone啊，不知道怎么样？clone与clone
之间有什么区别吗？
【在 h*******n 的大作中提到】
: 4G10
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h*******n
发帖数: 2052 | 6 I used one from Millipore. |
K******S
发帖数: 10109 | 7 If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
Your problem should be very easy to solve using mass spec.
Phospho
【在 v***a 的大作中提到】
: 目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用，想看看substrate的哪一个磷酸
: 基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate，再用Phospho
: -Specific的抗体去看（WB）。用过invitrogen的抗体做WB，signal非常弱，几乎看不
: 出来。请问大家有什么推荐的抗体吗？像anti-phosphotyrosine啊、anti-
: posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
: 酸化作用？
: 谢谢！
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v***a
发帖数: 1242 | 8 谢谢！前面也有位同学说用质谱。这个没有做过，正在研究中。
能请教一下p-y-100是哪家的抗体？
其实我不需要知道确切的磷酸化位点，只是想知道这个kinase让substrate的Tyr、Ser
、Thr磷酸化是增强还是减弱。
4G10
【在 K******S 的大作中提到】
: If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
: and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
: Your problem should be very easy to solve using mass spec.
:
: Phospho
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I**l
发帖数: 74 | 9 Phos-tag！！！
磷酸化蛋白特异性抗体，不分氨基酸，有biotin连接的phostag，可以做WB，也可以做
纯化。 |
v***a
发帖数: 1242 | 10 谢谢！这是哪家公司的？
【在 I**l 的大作中提到】
: Phos-tag！！！
: 磷酸化蛋白特异性抗体，不分氨基酸，有biotin连接的phostag，可以做WB，也可以做
: 纯化。
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