l**********1
发帖数: 5204 | 1 try
Human Phospho-MAPK Array kit
(R&D Systems, Minneapolis, MN).
link:
//www.biocompare.com/ProductDetails/3015549/Proteome-Profiler-Human-Phospho-
MAPK-Array-Kit-NEW.html
cited from 2011 paper:
Activation of p38 mitogen-activated protein kinase by norepinephrine in T-
lineage cells.
Immunology. 2011 Feb;132(2):197-
link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21039464
>Phospho-MAPK protein array
>Following exposure to NE (150 lM, 15 min), total cellular
>protein was obtained using the reagents and proto... 阅读全帖 |
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j*****a
发帖数: 658 | 2 这个问题没法统一回答。各个磷酸蛋白不一样。比方说phospho-Erk, phospho-JNK,特
别是
phospho-c-Jun 我都用的不同的公司的。一般来说cell signaling的质量不错。但抗体
这玩意
儿，你不自己试是无法提前知道一定work 或不work的。不同细胞不一样。phospho-Akt
我就用过4中
都不work，当然我高度怀疑是我的system就没有这个信号。总之，先查文献，和你做的
一样system得
人都用哪一家公司的抗体，就follow一个试试看，可以买小size的先。不过很多人的文
章都不写
cat#，比如santacruz一个抗体有10几20种。。。另外也要会differentiate文章，有的
group的
文章我相信多一点，有的就还好。。=） |
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b****o
发帖数: 4 | 3 Have identified some novel phosphorylation sites in my interested proteins,
and would like to raise specific phospho-antibodies to examine the
endogenous phosphorylation in a more pathophysiological settings. Did anyone
have good experience with some company for custom phospho-antibodies? Your
suggestion and sharing will be highly appreciated! |
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c**a
发帖数: 94 | 4 phospho-JNK应该跑在54KD和46KD, 但是第二个sample总是有条小于46KD的带. 应该不
是degredation, 重复了实验,还是在这个sample里有这个带. 应该把这个带算在
phospho-JNK里吗
图见附件. |
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c**a
发帖数: 94 | 5 目前做的是1个小时serum starvation, 细胞受各种treatment. western 总是得不到
phospho信号, 不知道有没有什么试剂是可以诱导明显的p38磷酸化增加,这样我可以用
来做positive control. 抗体用的是cell signaling的. 用cell signaling 的cell
extract跑western, 这个抗体可以很好的识别phospho-p38.
求指教. |
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m**********r
发帖数: 26 | 6 Can anybody recommend a good non-rabbit anti-phospho H3 for IF? A related
reference would be more appreciated. Thanks |
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f*********6
发帖数: 94 | 7 rat anti phospho-Histone H3 (1:500, Upstate Biotechnology) |
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a****d
发帖数: 1919 | 8 Phospho-Histone H3 (Ser10) (6G3) Mouse mAb #9706
cell signaling tech |
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v***a
发帖数: 1242 | 9 目前在研究一个kinase对一个substrate的磷酸化作用，想看看substrate的哪一个磷酸
基团在这个kinase的作用下有变化。我是先用IP分离出来这个substrate，再用Phospho
-Specific的抗体去看（WB）。用过invitrogen的抗体做WB，signal非常弱，几乎看不
出来。请问大家有什么推荐的抗体吗？像anti-phosphotyrosine啊、anti-
posphothreonine这种的。不知大家觉得有没有其它更好的办法可以监测或定性这类磷
酸化作用？
谢谢！ |
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K******S
发帖数: 10109 | 10 If it's tyrosine phosphorylation, there are 3 good antibodies p-y-100, 4G10
and a 3rd one I can't remember now. There is no good S/T antibodies.
Your problem should be very easy to solve using mass spec.
Phospho |
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m***o
发帖数: 272 | 11 同学，请问有公司卖phospho-Sp1的抗体的吗？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 12 Genscript
They even have the guarantee service. If the phospho-specific antibody is
not successful they don't charge you. |
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b******j
发帖数: 361 | 13 有人知道phospho-PPARg (Ser112)和PPARg (Ser273)， 比较好用的抗体吗? 帮帮忙推
荐一个， 谢谢。 |
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d***l
发帖数: 50 | 14 最近需要做一个phospho-specific antibody，请有经验的推荐一个好公司。看到几件
国内的公司非常便宜 （genescripts, abmart），$1000-2000, 美国的都要$5000-$
8000，不知道质量如何。主要是要有经验成功率高的。谢了。 |
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h********r
发帖数: 12 | 15 I transferred my HA-tag myr-AKT plasmid into my cells and conducted the
selection of stable cells. After selection, the selected clonies exhibited
AKT expression through the examintion of HA-tag antibodies in Western blot.
Moreover,the fast tumor formation was observed in nude mice implanted cells
expressing myr-AKT. However, currently, when I used these cells (several
passages cell culture) for examining phospho-AKT, upstream signals or
downstream signals such as phospho-GSK,phospho-S6K and som |
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m**********3
发帖数: 706 | 16 "However, currently, when I used these cells (several
passages cell culture) for examining phospho-AKT, upstream signals or
downstream signals such as phospho-GSK,phospho-S6K and some others in
western blot, it is difficult to obtain the signal from western blot"
Do you mean you can not get any signal for all these antibodies? Or there is
no difference between your stable cell line and the parental cell line? |
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i*****g
发帖数: 11893 | 17 你做这些事情，要和质谱实验室讨论了再做，不要想当然
这种是全细胞全组织的质谱分析，基本上属于stupid proteomics，
一个mudpit可以捞出3000个蛋白(但细胞里面含有恐怕10万种蛋白以上)，但phospho
proteomics很不好做，量要很多。
你还想做对比，很麻烦的。
他们大概可以用titium （？？）富集吸附一些phospho-peptide
根据我的记忆，有人发过nature 还是science（可能是这个journal），似乎是VEGF，
EGF+— 对整个细胞phospho assay, 用 SILAC, 非常类似你的实验设想。
时间大概是2005-2008年的论文，你去找找。 |
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i*********0
发帖数: 915 | 18 Just got the reply from the CST. It seems the lower band is isoform beta.
Dear @@@@,
Thank you for your inquiry regarding our Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP&#
174; Rabbit mAb #9145. The top band, at 86kDa, represents Phospho-
Stat3alpha. The bottom band, at 79kDa, represents Phospho-Stat3beta isoform
. |
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c*******u
发帖数: 12899 | 19 ☆─────────────────────────────────────☆
PandaCub (godblessmybaby) 于 (Sat Jan 7 01:31:40 2012, 美东) 提到:
Update:
谢谢宝宝版这么多热心善良的妈妈们为宝宝祈福，给我们鼓励建议。我们天天给她说话，想逗她开心，虽然心里很难过，但是尽量不在她面前流泪。宝宝的精神这两天稍微恢复了一些，不过我仍然感觉她的眼神是空的。关于眼底检查听说宝宝的眼皮会被夹子拉开照光，加上强光刺激散
难劬ΓΡΨ纯沟煤芾骱Γ永疵挥斜簧苏庋源Ｖ灰锌赡埽颐且院笤僖膊换岫滤桓鋈俗鋈魏渭觳椤Ｎ颐谴蛩阆轮茉偃ジ歉鲅劭埔缴幌拢蛔鰀rum test, 看是否真的造成了精神以外的创伤。
关于宝宝的病我们也在拼命看资料。宝宝的眼睛没有大家说起的那种典型的快速水平或垂直运动，否则我们也能够早察觉到。宝宝的眼睛有时似乎正常，只是眼神有些游移，有时有些微微晃动, 像是在找什么。Nystagmus确实只是一种symptom，但是被认为是眼睛的病变或神经系统的问
穑蟾欧殖蒻otor和sensory两类，因果关系不同。如果眼睛本身没有问题... 阅读全帖 |
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a*****x
发帖数: 901 | 20 Just my two cents, not in the field...
1) pulse chase (fluore or isotope) or CHX treatment or SNAP tag with or
without over-expression of E (or knock-down)
2) Phospho versus dephospho mimic mutation; If the sites are not clear, try
to look for phospho change by over-expression of E (or knock-down)
3) specific inhibitors |
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c**a
发帖数: 94 | 21 如图, 做western的时候, 用phospho-p38抗体标记,总是有多条带,其中两条带如图 (绿
色示意), 这个抗体识别所有phospho-p38. 但是如果用 p38 alpha 抗体标出来像红色
示意的地方. 这个红色跟上面那条绿色, 有时候像是重叠有时候又不像, 请问,上面这
条绿色的带到底是不是p38alpha?? |
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l*****7
发帖数: 8463 | 22 Cancer researcher retracts 19 studies at once
with 23 comments
jcheng
Jin Cheng
A former cancer biologist at the Moffitt Cancer Center in Tampa, Florida has
retracted 19 papers from a single journal.
Jin Cheng, who studies how ovarian cancer develops, withdrew 19 papers from
the Journal of Biological Chemistry originally published over the last 15
years, and corrected another. All of the retractions are for image
manipulation.
For example, here’s the notice for “Activation of phosphatidylinosito... 阅读全帖 |
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m****s
发帖数: 18160 | 23 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: valine (valine), 信区: Biology
标 题: Postdoctoral position available
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 1 15:38:12 2013, 美东)
Postdoctoral Fellow Position
A postdoctoral fellow position is available to study ERK3 kinase signaling
in cancer progression and metastasis. ERK3 is a member of the atypical MAP
kinase subfamily. In contrast to the well-studied classic MAPKs, such as
ERK1/2, little is known concerning the molecular regulation of ERK3
signaling and its function in cancer... 阅读全帖 |
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E*****e
发帖数: 54 | 24 请问blocking和wash buffer需要用TBS代替PBS吗？
谢谢 |
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s******u
发帖数: 81 | 26 Try Proteintech Group Inc
proteins,
anyone
Your |
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C****o
发帖数: 994 | 27 做了一年多phospho-p38 的western，用自己配的gel和transfer buffer一直出不来。
可最近用biorad的胶p38就很容易出了band.
我猜是自制gel的问题，transfer的时候不完全。
这个可能性大不大？ |
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p****l
发帖数: 291 | 28 需要一个rabbit anti mouse b-actin 抗体做westernblot对照
对于哪个公司的更好没有任何idea
我目的蛋白抗体来自BD transduction laboratories
请帮忙推荐一个,谢谢!
此外,有人有用多抗unlabeled antibody做intracellular staining的么?比如检测
phospho-stat5.有经验的给一个protocol
最好了,感激不尽! |
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m**********r
发帖数: 26 | 30 Thanks but this one is from rabbit. I need a non-rabbit one for co-labeling
purpose. |
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F**********e
发帖数: 158 | 31 如果你确定你的蛋白有磷酸化的化， 你可以ip大量的蛋白做质朴
可以确定你的蛋白中那个为点被磷酸化了 |
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v***a
发帖数: 1242 | 34 谢谢！看了不错，打算买了试试。
不知道你用过EMD（Calbiochem）的没？好多的clone啊，不知道怎么样？clone与clone
之间有什么区别吗？ |
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h*******n
发帖数: 2052 | 35 I used one from Millipore. |
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v***a
发帖数: 1242 | 36 谢谢！前面也有位同学说用质谱。这个没有做过，正在研究中。
能请教一下p-y-100是哪家的抗体？
其实我不需要知道确切的磷酸化位点，只是想知道这个kinase让substrate的Tyr、Ser
、Thr磷酸化是增强还是减弱。
4G10 |
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I**l
发帖数: 74 | 37 Phos-tag！！！
磷酸化蛋白特异性抗体，不分氨基酸，有biotin连接的phostag，可以做WB，也可以做
纯化。 |
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m*********7
发帖数: 5207 | 39 前两天作WB。因为蛋白在细胞里丰度很低，所以用的是GE healthcare生产的ECL plus.
结果曝光时间不到5秒，整个blot就全黑了。通常这种情况下，我会等信号自然衰减，
大概2-4小时之后再去darkroom.但那天因为急着接孩子，我就突发奇想，把那张已经曝
光了的片子放在blot上，但是避开黑色的部分。把新的片子压在旧片子的上面，曝光十
秒，出来条带非常清晰。
反正那张废了的片子不用白不用，正好可以屏蔽信号。而且这样做也省时间。不过如果
你用phospho-imager，就不知道这招能不能用了。 |
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m*********7
发帖数: 5207 | 40 听说Invitrogen, Sigma店大欺客，产品质量不稳定。Santa-Cruz我个人印象不太好。
版上做signal transduction的大拿，能不能推荐一个vendor，磷酸化抗体质量比较可
靠呢？
话说一个抗体也满贵的，如果几个都不work，岂不是杯具？ |
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c**k
发帖数: 1228 | 41 cell signaling technology, BD bioscience |
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v***a
发帖数: 1242 | 42 哈哈 我也问过跟你类似的问题 看了看 再综合大家的推荐 打算买millipore或EMD的 |
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I*****y
发帖数: 6402 | 46 run longer with lower voltage and lower percentage of SDS-Page.
If you are using phospho-antibody for your WB, use BSA to block membrane, no
t milk. |
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f*********e
发帖数: 1144 | 48 second this.
就算IP不出来purified form, 也可以稍微纯化一下，然后search 加各种variable
phospho modification mass shifts.
我对western有恐惧，来源于n多年前本科第一次作western试验把整包film曝光了，
develop film的时候手忙脚乱，灌gel 到处漏。。。所以能不做western,尽量不做
western....自己太笨手笨脚了。。。 |
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i******m
发帖数: 495 | 49 嗯。离心一下应该是个不错的主意。我用的是elisa kit
一个抗体precoat在板子上，另一个抗体来识别。都是phospho specific抗体
triton
sonication |
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C**********P
发帖数: 1004 | 50 激酶A在整个细胞周期中都位于位置B，无论是抗体染色还是GFP signal在位置C都没有
任何信号。但有人发现Phospho激酶A可以定位于位置C，并且在有些情况下特异性的定
位于C，而在B完全没有定位。大家觉得这可能是啥原因，简单的artifact还是存在什么
regulation在里面？ |
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