问个培养细菌的问题 - Biology版

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Biology版 - 问个培养细菌的问题

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话题: 大肠杆菌话题: 质粒话题: minimal话题: 底物话题: media

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o******n
发帖数: 511

背景：
1. 有个酶能分解一种底物，其产物可作为细菌的唯一氮源。这个酶连带它上下游
flanking region一起放到质粒上，转到大肠杆菌里，大肠杆菌可以表达这种酶，别人
测过cell-free extract里的酶有活性。
2. 已知这种酶Km比较低，对底物亲和力低
3. 土壤细菌本身有这个酶的，在minimal media+底物的平板和液态培养基都可以长起
来，长得慢。
4. 大肠杆菌好像不太喜欢这个6 kb多的质粒，每次overnight culture都长得不太浓，
有floc,显微镜下看到细胞连成长条，肉眼可见细胞沉在管底。
现在我在minimal media+底物的液态培养基里想长带这个酶的质粒的大肠杆菌，就是长
不起来，我试了几种minimal media，加了trace elements，也不行。大肠杆菌在
minimal media加别的氮源可以长。
因为酶不给力吗？可是再怎么不至于一点都长不起来呀？换个很强的promoter，多产些
酶有用吗？
还是因为酶在质粒上，而大肠杆菌不喜欢这个质粒，在minimal media里，就不爱给表
达它了？
请大家给些建议意见，谢谢！

s********n
发帖数: 2939

问题是你的MM里有没有氮源？这个酶的产物E. coli能够利用吗？

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