X*******0
发帖数: 134 | 1 某原核蛋白,在其原来的菌里的定位未知,蛋白序列本身找不到信号肽.
在大肠杆菌里表达.由于胞质表达总是包涵体,于是改周质表达.用的是pET26b,就是N端
加了一段pelB信号肽的.问题来了,表达完的蛋白去哪儿找?用哪部分纯化?是用细胞,还
是用培养基上清?问题等价于,蛋白(46kD)会不会大多数穿过细胞壁漏到培养液中.
做生化的,大量提蛋白解结构的,比较容易解答我的问题. | a****k
发帖数: 1130 | 2 http://lifeserv.bgu.ac.il/wb/zarivach/media/protocols/Novagen%2
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【在 X*******0 的大作中提到】
: 某原核蛋白,在其原来的菌里的定位未知,蛋白序列本身找不到信号肽.
: 在大肠杆菌里表达.由于胞质表达总是包涵体,于是改周质表达.用的是pET26b,就是N端
: 加了一段pelB信号肽的.问题来了,表达完的蛋白去哪儿找?用哪部分纯化?是用细胞,还
: 是用培养基上清?问题等价于,蛋白(46kD)会不会大多数穿过细胞壁漏到培养液中.
: 做生化的,大量提蛋白解结构的,比较容易解答我的问题.
| C*******e
发帖数: 4348 | 3 osmotic shock取periplasmic fraction
但是带pLysS的不好用这个protocol
会不会leak是case by case
另外跟induce强度及时间长短有关
pelB signal peptide不一定好用
好不好用也是case by case |
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