n*****r
发帖数: 78 | 1 做Taqman realtime RT-PCR时间很长了，一直没问题，最近NTC和RT-突然出现扩增，CT
都在35左右。通过大量的NTC，RT-和RNA extraction negative control重复测试，初
步判断为随机污染。做了所有我能想到的，换成新的试剂，引物，探针，用UV或bleach
洗泡桌面，枪，盘子....等等，还是没解决问题。
哪位大侠有经验，帮我一把。谢谢。 |
w***e
发帖数: 269 | 2 那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank
plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染，我觉得你不妨一试。
有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。 |
n*****r
发帖数: 78 | 3 我把里面那个thermol block都洗过好几遍了，不过还真没做个空白版。我回头试一下。
【在 w***e 的大作中提到】
: 那天我做RT的时候随便翻看别人留下来的protocol,说每几个月大概应该用个blank
: plate做个RT-PCR,看看是不是机器里面被dye或者别的什么污染，我觉得你不妨一试。
: 有的实验室有专门的blank plate,没有的话好像可以用平时的plate或者tube加水。
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k****l
发帖数: 279 | 4 the best way is to switch to another bench or even another lab
DNA could be in the air |
C*******e
发帖数: 4348 | 5 随机污染没什么办法吧
枪头有没有用带filter的？
用带filter的会好一点
另外已经Ct>35了
如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
问题也不大吧 |
p******d
发帖数: 3737 | 6 我也觉得这个影响不大。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 随机污染没什么办法吧
: 枪头有没有用带filter的？
: 用带filter的会好一点
: 另外已经Ct>35了
: 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
: 问题也不大吧
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n*****r
发帖数: 78 | 7 我当然都用filter了，这都是common sense东西。我们是测病毒，结果要求是Positive
或 Negative。 虽然Ct的大小不是非常重要，但我们有许多阳性样品含的病毒量比较
低，Ct也会在35左右，这样NTC或RT-如果出现污染，那整个结果就只能当无效处理。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 随机污染没什么办法吧
: 枪头有没有用带filter的？
: 用带filter的会好一点
: 另外已经Ct>35了
: 如果跟有模板的比较Ct相差了10以上
: 问题也不大吧
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C*******e
发帖数: 4348 | 8 哦，这样子。那你用的是一整板的还是一条一条的？
如果是一条一条的，我一般先加样negative control，盖上
然后再加别的
Positive
【在 n*****r 的大作中提到】
: 我当然都用filter了，这都是common sense东西。我们是测病毒，结果要求是Positive
: 或 Negative。 虽然Ct的大小不是非常重要，但我们有许多阳性样品含的病毒量比较
: 低，Ct也会在35左右，这样NTC或RT-如果出现污染，那整个结果就只能当无效处理。
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