s*********r
发帖数: 13 | 1 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
，能P出来吗。。。。
谢谢指导^^ |
C*******e
发帖数: 4348 | 2 光说引物
引物长没问题哈
做过很多七十几到八十左右的引物，其中跟模板配对的部分是18左右，P起来完全没问题
【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
: 道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
: ，能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^
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p******i
发帖数: 1092 | 3 中间加linker有时候是为了防止后加上的TAG影响原来蛋白的功能
可以参考pcDNA6.2 fusion GFP系列的linker
不过以前貌似很多人都是直接加个GFP……
【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
: 道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
: ，能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^
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n***w
发帖数: 2405 | 4 我正在做一个fusion protein，我就是设计引物，然后p。。。引物大概35个碱基吧。
。。overlap。。。还是比较好p的。。。 |
s*********r
发帖数: 13 | |
w**********s
发帖数: 72 | 6 像GFP这么大的蛋白很可能会影响定位.一般我还是会加一个Linker。 比如GGSG。 |
K*C
发帖数: 2825 | 7 我最近做了一些fusion proteins.我的建议是你不要在引物里面加linker。
最好先做出一个Target protein-non coding region-Fluorescent protein（FP）的
prototype来，然后用Site-directed mutagenesis往里加linker。 FP加在N端还是C端
，是要试的。linker用多长的，什么样的，也是要选的。否则会对蛋白折叠有影响。
【在 s*********r 的大作中提到】
: 第一次设计fusion protein,想给自己的蛋白加个mcherry tag,没有现成的载体，不知
: 道中间需要加个linker呢，还是直接按ORF接上就好呢？pcDNA3.1的vector。没有现成
: 的linker给我用，如果要加的话，是不是得设计到primer上去，那这primer也太长了吧
: ，能P出来吗。。。。
: 谢谢指导^^
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